斜纹夜蛾NPV对取食不同蔬菜的斜纹夜蛾幼虫的毒力差异

采用生物测定法,比较了斜纹夜蛾ＮＰＶ对取食芋叶等７科８种蔬菜的斜纹夜蛾幼虫的毒力反应差异性。结果表明ＮＰＶ对取食番茄叶的幼虫毒力最高,比取食芋叶的毒力高６．８２倍;但再经菜心饲养一代后,ＮＰＶ的毒力差异消失。     

金龟子绿僵菌对斜纹夜蛾幼虫的生防效果、抗氧化酶活性和肠道细菌群落的影响

【目的】测定金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)对斜纹夜蛾(Spodoptera litura) 2龄幼虫的毒力,研究金龟子绿僵菌侵染后寄主体内抗氧化酶活性和肠道内细菌群落的变化,探讨斜纹夜蛾对金龟子绿僵菌侵染的防御机制。【方法】采用浸渍法测定不同浓度金龟子绿僵菌对斜纹夜蛾2龄幼虫的毒力;应用IlluminaMiSeq高通量测序技术测定肠道细菌群落。【结果】不同浓度的孢悬液对斜纹夜蛾2龄幼虫均有一定的毒力,处理7 d时半致死浓度(LC₅₀)为3.944 107个孢子/mL;浓度为1.0×10⁹个孢子/mL时,半致死时间最短(LT₅₀)为4.6 d,校正后的死亡率为81.03%。处理后未致死的斜纹夜蛾幼虫体内抗氧化酶活性显著高于对照组。处理后致死的斜纹夜蛾幼虫肠道细菌群落多样性显著高于对照组;且处理后致死的斜纹夜蛾幼虫肠道细菌群落组成与对照组差异显著。【结论】金龟子绿僵菌对斜纹夜蛾幼虫的致死率和致死效率与金龟子绿僵菌的浓度呈正相关;斜纹夜蛾幼虫体内的抗氧化酶可能在抵抗金龟子绿僵菌侵染的过程中起重要作...     

杀菌剂对斜纹夜蛾SL细胞系和幼虫的生物活性

以MTT法筛选了19种杀菌剂对斜纹夜蛾Spodoptera litura SL细胞的毒杀活性,并以该方法研究了三唑类杀菌剂对SL细胞的毒力。结果表明: 福美双、烯唑醇、己唑醇、氟硅唑、苯霜灵、苯醚甲环唑、戊唑醇和腈菌唑等杀菌剂对SL细胞具有优异的毒杀活性。三唑类杀菌剂腈菌唑、烯唑醇、己唑醇和戊唑醇处理SL细胞48 h后,LC₅₀值分别为21.94 μg/mL、 23.80 μg/mL、 33.16 μg/mL和47.63 μg/mL。以考马斯亮蓝G₂₅₀法研究了腈菌唑对SL细胞中蛋白质含量和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的影响, 20 μg/mL腈菌唑处理12 h、24 h、48 h和72 h后,SL细胞中蛋白质含量分别降低8.55%、25.95%、42.95%和67.05%;处理24 h和48 h后,SL细胞的LDH漏出率分别为30.66%和32.05%。以浸叶喂食法处理斜纹夜蛾3龄幼虫,三唑类杀菌剂可显著抑制试虫体重增长。以0.5 μg/头、 1.0 μg/头和2.0 μg/头剂量的腈菌唑注射处理72 h后,斜纹夜蛾4龄幼虫血细胞数量分别降低12.31%、 25.96%和25.73%;腈菌唑注射处理48 h和72 h后,对斜纹夜蛾幼虫的LD₅₀值分别为1.59 μg/头和1.53 μg/头。结果显示以离体培养细胞为对象,从现有杀菌剂中寻找新的杀虫剂先导化合物具有良好的研究潜力。     

腐生培养下爪哇虫草对寄主的转录组响应

爪哇虫草菌是广谱性虫生真菌,具有防治膜翅目社会性昆虫红火蚁Solenopsis invicta的生防潜能。为探究蚁巢弃尸堆中携菌虫体在侵染循环链的关键作用,探讨腐生条件下爪哇虫草Cordyceps javanica响应寄主的分子致病机制,本研究通过向培养基添加冷冻干燥的虫尸粉进行诱导,对诱导前后的菌丝孢子混合体进行转录组测序分析。结果表明,与纯培养条件相比,菌株经虫尸粉诱导后发掘新基因1 912个,有379个得到功能注释。显著差异表达基因有242个,上调表达基因111个,下调表达基因131个;GO富集分析表明,生物学过程的代谢过程和细胞过程、细胞组分的细胞结构体及分子功能中参与催化活性和结合相关的基因可能在爪哇虫草响应寄主过程中发挥了重要作用;KEGG分类和富集分析表明,代谢过程分类的色氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、糖酵解/糖原异生和乙醛酸和二羧酸酯代谢,遗传信息过程分类的碱基切除修复和内质网的蛋白质加工,环境信息过程分类的ABC转运蛋白和丝裂原活化蛋白激酶信号通路,细胞过程分类的自噬和过氧物酶体通路是爪哇虫草的主要代谢途径。随机筛选8个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,这些基因的表达模式与转录组数据分析结果基本一致。本研究结果表明,爪哇虫草在适应腐生环境过程中与氨基酸代谢和能量代谢相关的基因活跃,这可能是其在垂直和水平扩散过程中需维持侵染力,为自身提供营养并转化为能量和中间产物等物质所致。     

斜纹夜蛾幼虫感染莱氏野村菌后的抗氧化酶活性变化

【目的】研究斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫感染莱氏野村菌Nomuraea rileyi后的抗氧化防御机制。【方法】通过测定斜纹夜蛾各龄幼虫超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等的活性,探讨染菌后不同侵染阶段,幼虫抗氧化酶活性的变化趋势和不同接种方法对抗氧化酶活性的影响。【结果】在斜纹夜蛾染菌幼虫和未接种幼虫(对照)中均未测出POD活性;各龄幼虫在接种莱氏野村菌后SOD和CAT活性显著高于对照,但随着侵染过程的进行,2-3龄幼虫的SOD和CAT活性在16 h左右达峰值后迅速降低,而4-5龄幼虫SOD和CAT活性自染菌初期增强后,变化较平缓,至60-72 h后才低于对照。喷雾法与浸蘸法接种后,各龄幼虫SOD和CAT活性显著高于对照,且对于2-3龄幼虫,浸蘸法对抗氧化酶活性的影响显著高于喷雾法,而对于4-5龄幼虫而言两处理方式之间活性差异不显著。【结论】斜纹夜蛾感染莱氏野村菌后,其体内抗氧化酶活性变化很大,SOD和CAT活性先升后降,且其变化趋势与幼虫所处的发育阶段密切相关。在体壁接种量相当的情况下,浸蘸法对2-3龄幼虫SOD和CAT活性的影响大于4-5龄幼虫。     

寄主植物对斜纹夜蛾酯酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响

利用生物测定与生物化学的方法,就取食不同寄主植物的2个斜纹夜蛾[Spodoptera litura(Fab.)]品系对丙溴磷和灭多威的敏感性及其体内的酯酶与乙酰胆碱酯酶的活性变化进行了研究。结果表明,取食不同寄主植物的斜纹夜蛾对丙溴磷和灭多威的敏感性不同。在敏感品系中,取食不同食料的斜纹夜蛾后代对灭多威的敏感性顺序为:烟草<棉花<大豆<人工饲料;对丙溴磷而言,敏感性顺序则为:棉花<烟草<大豆<人工饲料。而在田间抗性品系中,对丙溴磷的敏感性顺序为:棉花<烟草<人工饲料<大豆;对灭多威的敏感性顺序为:棉花<烟草<大豆<人工饲料。此外,在田间抗性和敏感品系中,取食不同食料的斜纹夜蛾体内的酯酶活性之间均存在显著差异,对其乙酰胆碱酯酶的活性也有程度不同的诱导效应,但并不会引起乙酰胆碱酯酶的质变。     

Ni胁迫对斜纹夜蛾幼虫包囊反应的影响

将不同浓度Ni2+添入人工饲料中,研究连续3代取食含不同剂量Ni2+饲料的斜纹夜蛾5、6龄幼虫血细胞对凝胶珠包囊反应的影响。将新蜕皮的5龄幼虫记为0 h,每隔24 h注射凝胶珠处理幼虫,直至6龄末,注射24h后解剖虫体,观察包囊情况。结果表明,5mg/kg及以下处理浓度Ni2+的1代胁迫可提高0-120 h幼虫血细胞对凝胶珠的包囊反应,但2-3代的胁迫只增加发育初期0-72 h幼虫血细胞的包囊反应;10-20 mg/kg处理浓度Ni2+的1代胁迫仅增加0-24 h幼虫血细胞的包囊率,但可降低2-3代幼虫血细胞各发育时间的包囊率。此外,40 mg/kg Ni2+胁迫可连续降低3个世代各个发育阶段幼虫的包囊反应。饲料中Ni2+剂量、胁迫世代数以及两者的交互作用均对幼虫包囊率产生了显著影响。     

对斜纹夜蛾高毒力的Bt新分离株及其特性的研究

对从德国禁止施用Bt杀虫剂地区的土壤中分离的18个Bt菌株,以斜纹夜蛾幼虫为靶子昆虫进行了筛选,结果表明,其中6个菌株对斜纹夜蛾有高毒性,当晶体蛋白浓度为4．5～5．0μg／ml时,48h的校正死亡率高达85％～90％,LD50范围为28．2～137.2μg晶体蛋白。对这6菌株的生化特性、鞭毛血清型以及质粒DNA的琼脂电泳图谱进行了研究。     

幼虫密度对斜纹夜蛾抗病能力的影响

为了阐明斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius幼虫密度对其抗病能力的影响,在室内条件下(温度23℃±1℃,相对湿度75%)对不同幼虫密度(1、2、5、10、15头/皿(直径为12cm))饲养的斜纹夜蛾幼虫抵抗斜纹夜蛾核型多角体病毒侵染的能力及其免疫指标进行了研究。结果表明:幼虫密度对斜纹夜蛾幼虫接种核型多角体病毒后的存活率、存活时间及血淋巴酚氧化酶活性影响显著。随着幼虫密度的增加,接种核型多角体病毒后幼虫的存活率降低,存活时间缩短。当幼虫密度达到15头/皿时,幼虫存活率显著低于其它幼虫密度。不同幼虫密度幼虫的存活时间以1头/皿的最高,15头/皿的最低,且二者之间差异显著。幼虫血淋巴中酚氧化酶活性随幼虫密度的增加而明显降低,当幼虫密度达到5头/皿时,幼虫酚氧化酶活性显著低于1头/皿的。另外,幼虫溶菌酶活性和血细胞总数受幼虫密度影响不显著。不同密度幼虫抗病性的变化与其血淋巴中酚氧化酶活性的变化趋势较为一致。所以斜纹夜蛾幼虫抗病能力的降低可能与幼虫酚氧化酶活性的下降有关。因此,幼虫密度是影响斜纹夜蛾幼虫抗病性变化的重要因子。     

阿维菌素苯甲酸盐和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对斜纹夜蛾幼虫和卵的毒力试验

采用常规方法在室内外分别测定了0.5%甲维盐(甲胺基阿维菌素苯甲酸盐,Banlep)微乳剂、10亿PIB/mL奥绿1号(苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒,AcMNPV)悬浮剂对斜纹夜蛾Prodenia litura(Fabricius)幼虫、卵及其初孵幼虫的杀伤力。试验结果表明,甲维盐和奥绿1号对初孵幼虫、3龄幼虫及卵具有很强的杀虫力,其死亡率分别可达95%~100%,且较特异性农药美满(虫酰肼)见效明显要快,是当前防治斜纹夜蛾等夜蛾类害虫较理想的2种新生物农药。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA诱导同源昆虫细胞的凋亡

发现野生型斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus,SpltNPV）DNA转染SL-1细胞能诱导细胞凋亡.SpltNPV-DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL-1细胞6 h后,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞碎裂成凋亡小体,18 h后,细胞100%碎裂成凋亡小体.DAPI荧光染色显示感染细胞核渐呈半月形,直至碎裂被凋亡小体包裹.被转染的SL-1细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型梯形谱带.野生型SpltNPV病毒粒子感染的SL-1细胞既无多角体的出现,也无凋亡现象的发生.     

环链虫草Cordyceps cateniannulata对番茄生长和抗氧化酶活性的影响

【目的】评估环链虫草Cordyceps cateniannulata对植物促生和植物抗氧化酶活性的影响。【方法】本研究利用浸种法将环链虫草接种于番茄植物体,在接种后的第30天和60天,通过番茄株高、根长、地上和地下部分的干鲜重指标评价其对番茄生长的影响;在接种后第10、20、30、60和90天,通过选择性培养基分析其在番茄不同组织中的生存情况,使用形态学及DNA序列比对的方法检验所分离菌株与原有菌株的一致性。在处理后的第30天,检测番茄叶片中的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,观察环链虫草对番茄的抗氧化酶活性影响。【结果】环链虫草可定殖于番茄幼苗且对番茄生长有显著促进作用,菌株对植株的定殖偏好性分别为根部>茎部>叶部。酶活检测结果表明,处理组番茄叶片防御酶活性均呈显著升高的趋势,其中POD、CAT、SOD活性分别比对照增加了52.21%、75.31%和158.59%,MDA含量下降了35.15%。【结论】环链虫草可以通过浸种的方法感染并定殖番茄幼苗的根、茎、叶,促进番茄幼苗的生长并提高番茄抗氧化酶活性,具有较好的田间...     

甲维盐对斜纹夜蛾幼虫肠道细菌的影响

【目的】斜纹夜蛾幼虫属杂食性、高食量的害虫,通过分子生物学手段对经甲维盐处理后的斜纹夜蛾幼虫肠道微生物进行比对,研究肠道共生菌群受毒剂刺激后的代谢变化,探讨菌株的自身代谢与甲维盐的作用受体的相关性。【方法】基于Illumina MiSeq技术测序平台,对取食甲维盐和未取食甲维盐的斜纹夜蛾幼虫中肠细菌的16S rRNA可变区进行高通量测序,分析对比细菌群落结构多样性。【结果】肠杆菌属、根瘤菌属在斜纹夜蛾的肠道中占优势地位,经过甲维盐处理后两者的丰度大幅下降。沙雷氏菌属和黄单胞杆菌属在处理后减少到几乎为零,相反,原先不占据优势的棒状杆菌属和甲醇杆菌属,处理后丰度明显上升。【结论】甲维盐处理后的优势菌群以及丰富度均发生变化,表明斜纹夜蛾的肠道菌群结构可能与甲维盐毒理机制有关。     

Influence of incubation temperature on productivity and quality of Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus

Mass production of baculoviruses by in vivo methods is influenced by several factors like larval age at virus treatment, virus concentration and the incubation temperature. The larval age at virus treatment and virus concentration should be synchronized to result in insect death at a fully grown larval stage to maximize the productivity. Since temperature influences both the growth of the larvae and replication of the virus, we evaluated the influence of incubation temperature on mass production of Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus (SpltNPV) at four different temperature regimes viz., 25, 30, and 35 °C and room temperature by diet-surface contamination method. Incubation of early fifth instar larvae dosed with 3932.4 polyhedral inclusion bodies (PIB)/mm² at 25 °C enhanced the virus productivity to 6.623 × 10¹¹ PIB yield/100 inoculated larvae, while it was only 1.779 × 10¹¹ at 35 °C. The disease progression in the virus treated larvae was slow with median lethal time (LT₅₀) of 208 h at 25 °C as compared to 136 h at 35 °C. In spite of the slow death which means lower production cycles/year, the productivity/year was higher at 25 °C than at other temperatures. The SpltNPV produced at 25 °C was also found to be of superior quality in terms of low bacterial contaminants than at 35 °C. Neonate larval bioassay conducted with viruses produced at different temperature treatments revealed that they were similar in their activity and virulence. Hence our results indicate that maintenance of the SpltNPV production facility at 25 °C would enhance both the virus productivity and quality.     

Insecticidal compound isolated from Syzygium lineare Wall. (Myrtaceae) against Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae)

A new crystal compound 2,5-diacetoxy-2-benzyl-4,4,6,6-tetramethyl-1,3-cyclohexanedione was isolated from the leaves of Syzygium lineare. The insecticidal activity of the compound was assessed against fourth instar larvae of Spodoptera litura. Its activity was better than the positive control azadirachtin. The compound was responsible for growth inhibition on S. litura. It induced larval, pupal and adult deformities even at low concentration. The compound may be useful as a botanical pesticide.     

黄带犀猎蝽成虫对斜纹夜蛾幼虫的捕食功能反应

[目的] 探明黄带犀猎蝽成虫对斜纹夜蛾幼虫的捕食潜力。[方法] 在室内条件下,研究了黄带犀猎蝽对斜纹夜蛾2、3、4龄幼虫的捕食功能反应、搜寻效应和干扰反应。[结果] 黄带犀猎蝽成虫对斜纹夜蛾2、3、4龄幼虫的捕食功能反应模型均符合Holling II型,即其捕食量随猎物密度的增加而增加,其搜寻效应随猎物密度的增加而减小,HollingⅡ方程依次为：N_a=0.9750N/（1+0.0273N）、N_a=1.1654N/（1+0.0804N）,N_a=1.3058N/（1+0.1799N）;黄带犀猎蝽成虫自身密度干扰反应符合HasseⅡ型（E=0.337P^-0.565）,即随着自身密度的增加,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率逐渐降低。[结论] 黄带犀猎蝽成虫对斜纹夜蛾幼虫有较好的防治潜力,可用于斜纹夜蛾的生物防治中。     

斜纹夜蛾核多角体病毒gp37及其邻近序列的克隆及分析

从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)基因组中克隆了gp37基因.分子生物学软件分析表明,在gp37基因内部存在糖基化位点.含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG),推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因.通过GP37蛋白的同源性比较,绘制了以gp37基因为基础的杆状病毒进化树, 发现与以多角体蛋白基因（polyhedrin）为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异.以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV）与杆状病毒代表种——苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multinucleocapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV）分开,根据gp37基因分析则将二者归到同一分枝,这与以egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致.     

锌胁迫对长药景天光合特性和保护酶活性的影响

以园林植物长药景天(Hylotelephium spectabile)为研究对象,探讨了不同浓度Zn SO4胁迫对长药景天光合特性和保护酶活性的影响。结果表明:长药景天的质膜相对透性、丙二醛含量、过氧化物酶和过氧化氢酶活性随Zn SO4胁迫强度的增加而升高,净光合速率、胞间二氧化碳浓度、气孔导度和蒸腾速率则降低,叶绿素含量先升高后降低,超氧化物歧化酶活性变化不大。长药景天在抵御锌胁迫的过程中,通过保护酶活性的升高、气孔关闭降低水分流失等方式降低了锌的毒害作用,使其具有很强的抵抗锌胁迫的能力。