FMLP诱导的嗜中性白细胞呼吸爆发与凋亡的关系研究

本文对fMLP诱导的嗜中性白细胞胞内钙浓度变化与凋亡的关系进行了研究。用膜受体激动剂fMLP和钙离子载体A23187诱导细胞内钙浓度升高,BAPTA螯合胞质钙。运用荧光显微镜,流式细胞仪,电泳等方法对培养细胞的凋亡百分率及细胞骨架变化进行了研究。结果表明:fMLP和A23187均有效地抑制了凋亡,而BAPTA促进了凋亡。对骨架测定表明随细胞凋亡微丝解聚明显,胞内钙升高抑制骨架解聚,胞内钙降低促进其解聚。故嗜中性白细胞凋亡过程中伴随有微丝的解聚,胞内钙浓度升高时凋亡被有效抑制,胞内钙浓度降低时促进了凋亡。     

节球藻毒素对草鱼淋巴细胞凋亡毒性效应及机理

节球藻毒素是水华水体中发现的一种新型蓝藻毒素,鱼类很容易受到节球藻毒素的影响.本研究发现节球藻毒素能够体外诱导草鱼淋巴细胞发生凋亡.电镜观察从形态学上发现节球藻毒素诱导的草鱼淋巴细胞呈现明显的细胞质浓缩、染色质凝集以及边缘化等典型细胞凋亡特征.梯队状DNA进一步证实凋亡的发生.1、10和 100 μg·L^-1的节球藻毒素体外诱导草鱼淋巴细胞12 h后,凋亡率分别达到19.4%、31.6%和71.6%,具有明显的剂量效应特征.节球藻毒素诱导的草鱼淋巴细胞凋亡与胞内活性氧物质增加、线粒体膜电位下降、胞钙含量上升、Bcl₂基因下调和Bax基因上调有关;此外,Caspase-3和Caspase-9两种酶参与该凋亡过程.表明节球藻毒素能够通过线粒体通路诱导鱼体淋巴细胞发生凋亡.
     

嗜中性白细胞呼吸爆发与胞内外钙信号的关系研究

以膜受体激动剂ｆＭＬＰ和ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ为刺激剂,ｆｕｒａ－２为荧光探针,分别用化学发光和荧光方法研究了嗜中性白细胞呼吸爆发与胞内外钙信号的关系。并以ｆｌｕｏ－３为荧光探针,在激光共聚焦显微镜上观测了呼吸爆发时的胞内钙信号的时间与空间变化。ｆＭＬＰ能够迅速引起胞内钙变化,而ＰＭＡ不引起胞内钙变化。在呼吸爆发启动时间上,ｆＭＬＰ明显短于ＰＭＡ,且呼吸爆发的强度更高,持续时间较短。比较胞内钙信号与呼吸爆发,胞内钙变化在启动时间,到达峰值时间和持续时间上均短于呼吸爆发时间。胞内无钙时,呼吸爆发完全被抑制。胞外无钙时,呼吸爆发强度比有钙时低７０％左右。激光共聚焦显微镜观测发现：细胞在ｆＭＬＰ作用之后胞内钙库释放钙进入胞浆并向胞外流动。当胞外有钙时,胞内钙浓度降至最低后,由于外钙内流会使其再次缓慢上升;当胞外无钙时,胞浆钙浓度降至最低后不会再回升。结果提示胞内钙信号对细胞进入呼吸爆发有重要控制作用,而胞外钙主要用于维持细胞的呼吸爆发。     

钙稳态失衡与癌细胞抑制

细胞胞浆钙离子浓度必须处于严格的调控之中,钙稳态失调必将导致细胞严重损伤或死亡（凋亡或坏死）.综述了钙稳态失调在外界因素引起细胞死亡中的作用、直接钙稳态失调的细胞死亡效应、以及钙离子在细胞凋亡中的作用,并讨论了上述作用的机制,最后在总结基础上提出了一种抑癌新途径——选择性引发癌细胞钙稳态失衡.     

T、B淋巴细胞的凋亡及其与疾病的关系

细胞凋亡是免疫系统的一个重要的事件,它凋控着淋巴细胞的成熟、受体组分的选择及内环境的稳定。其中T、B淋巴细胞在各自的发育过程中都发生大量的细胞凋亡。Fas/FasL信号途径、NoTCH信号途径是免疫系统细胞凋亡的两条最主要的途径。此外,一些共刺激分子（如CD40）在T、B淋巴细胞存活及凋亡的选择上也发挥着重要作用。凋亡同细胞的生长、分化一样,对免疫细胞发挥正常功能是必不可少的。因此,免疫系统细胞凋亡的脱轨势必会给机体带来严重的影响,导致一系列相关疾病的发生。     

外周血淋巴细胞凋亡依赖于细胞周期运行

目的以培养的人类正常外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocytes,PBLs）为模型,模拟细胞周期运行的不同状态,研究细胞凋亡与细胞周期运行的关系。方法将PHA及咖啡因处理前后的PBLs,分别用喜树碱（CPT）、X-射线、抗Fas抗体和肿瘤坏死因子TNF-α诱导,流式细胞术方法对细胞凋亡进行定量检测。结果PBLs经PHA刺激后进入细胞周期并发生凋亡,在凋亡因子打击作用下凋亡明显增加,用咖啡因废除细胞周期检测点后对凋亡打击敏感性降低。未经PHA刺激的PBLs对凋亡打击无应答。结论细胞进入细胞周期总是伴随细胞凋亡的发生,细胞不进入周期,则不会发生凋亡,细胞周期不停止,也不会凋亡。细胞周期检测点是联结细胞周期和细胞凋亡的重要位点。     

钙离子信号与细胞凋亡

细胞凋亡的分子机制是什么?这个问题当前引起人们广泛的研究兴趣。作为重要的第二信使,钙信号在许多生理和细胞活动中都起到了十分重要的作用。钙信号是否也在凋亡的调控中起作用呢?虽然在过去十多年中,许多研究证据都表明钙信号参与凋亡的调控,但是,钙信号如何作用于凋亡过程的具体机理仍然是众说纷纭。事实上,许多研究结果仍存有争议。文章总结了近几年来大量关于钙信号与凋亡研究的成果,集中讨论了两个问题：1)在凋亡前期“决定阶段”有没有钙离子信号的参与?2)钙离子信号与哪些凋亡调控因子(包括Bcl-2族蛋白)相互作用及如何作用?这问题还牵涉到亚细胞结构中钙库的作用(包括细胞质、内质网和线粒体)。根据作者自己的实验结果,文章对这些文献中不同的说法作了一些具体的评估。最后,文章还提出了一个钙离子信号参与调控细胞凋亡的可能模型。     

H1N1亚型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

A型流感病毒能诱导淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡,为进一步探讨淋巴细胞和单核巨噬细胞在凋亡中可能存在的相互作用,用H1N1亚型流感病毒诱导人外周血淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡．结果显示,前48 h,H1N1流感病毒能诱导淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡,但在培养48 h后,流感病毒对单核巨噬细胞表现为凋亡抑制作用,同时流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细胞术检测凋亡未见明显差异,说明细胞凋亡与病毒吸附时间长短并无相关性．检测p53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)加入前后淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡情况,结果显示,淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡均被抑制, 提示通过p53诱导的凋亡可能是流感病毒诱导细胞凋亡的一条重要途径．     

HIV感染中的细胞凋亡

CD4^ T细胞的丢失在HIV感染引起免疫缺陷过程中起着重要作用。但造成CD4^ T细胞丢失的具体机制还不清楚,细胞凋亡可能是CD4^ T细胞丢失的一个重要因素,HIV感染以后,病毒蛋白的持续性产出导致免疫系统的持续性激活,引起Th1细胞的丢失,Th1细胞通过合成Ⅰ型细胞因子,抑制淋巴细胞的自发凋亡,另外,病毒蛋白或其他因素能够使CD4^ ,CD8^ T细胞和APC转化为凋亡的效应细胞,通过Fas/FasL或其他途径引起细胞凋亡,HIV感染人体后凋亡细胞不仅有CD4^ T细胞,还包括B细胞,NK细胞,粒细胞,神经细胞和单细胞,凋亡作为机体的自我防护措施,在清除感染细胞的同时,并没有抑制HIV在单细胞/巨噬细胞内的复制,反而造成大量未感染细胞的凋亡,导致对HIV复制的失控,发展为严重的免疫缺陷,引起AIDS相关的机会性感染。     

氢化可的松诱导特发性血小板减少性紫癜淋巴细胞凋亡和增殖抑制

探讨氢化可的松对儿童急性特发性血小板减少性紫癜（AITP）外周血淋巴细胞增殖和凋亡的影响,对12例确诊的儿童AITP外周血淋巴细胞进行体外培养,用流式细胞术观察糖皮质激素处理后外周血淋巴细胞凋亡数量的变化,并用Wst-1（四氮唑盐）测定代表增殖的活细胞数。结果显示,激素处理组淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率也明显高于处理前和正常对照组,均具有显性差异。结果表明,氢化可的松具有明显的诱导淋巴细胞凋亡和增殖抑制作用,说明糖皮质激素可通过诱导AITP外血淋巴细胞凋亡和增殖抑制发探治疗作用。     

人外周血淋巴细胞凋亡与年龄及p21~(WAF1)的关系

 分别从老年人和新生儿外周血中分离淋巴细胞 ,用形态观察、DNA断裂电泳图谱、流式细胞仪分析凋亡峰等手段检测其在体外培养过程中发生凋亡的情况 .结果表明 ,不论是自发凋亡还是用1 0 mmol/L的丁酸钠诱导其凋亡 ,老年人淋巴细胞的凋亡率均高于新生儿组 .进一步检测淋巴细胞凋亡时 p2 1 WAF1的表达变化 ,结果表明老年人淋巴细胞 p2 1 WAF1的下调幅度明显大于新生儿组 .提示老年人淋巴细胞凋亡率高与其 p2 1 WAF1表达容易下调有关 .     

X射线对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复和凋亡的影响

目的 研究不同时间诱导X射线照射的淋巴细胞进入细胞周期DNA损伤修复与凋亡的影响.方法 X射线（0.5 Gy）作用于正常人外周血淋巴细胞,以照射后不同时间点（0、4 h）分别加入PHA并分成两组,即照射后0 h加PHA组（A组）和照射后4 h加PHA组（B组）,再分别培养0、0.5、2 h,用流式细胞术和免疫印迹法检测A组和B组γ-H2AX蛋白的表达,Annexin-V/PI法分析A、B两组的细胞凋亡率.结果 流式细胞术及免疫印迹结果均显示A组的γ-H2AX蛋白表达高于B组（P＜0.05）,且均先升高后降低.A组细胞凋亡率亦大于B组.结论 不同时间诱导被打击的淋巴细胞进入周期其可能发生DNA修复并同时伴随细胞凋亡的发生.     

热胁迫对二化螟幼虫血淋巴细胞内活性氧、HSP90及细胞凋亡的影响

为探讨热激条件下二化螟Chilo suppressalis幼虫体内生理上的保护反应,本研究应用流式细胞术分析了热胁迫对二化螟幼虫血淋巴细胞内活性氧（ROS）、热休克蛋白90（HSP90）的产生和对细胞凋亡的影响。结果表明：暴露于33℃,36℃和39℃的二化螟5龄幼虫的ROS与对照（28℃）相比显著提高,分别增加了1.71,1.69和1.38倍;当温度达到33℃以后,ROS不再显著增加。实时定量PCR结果显示,二化螟HSP90基因在热胁迫诱导下表达。流式细胞术检测表明,HSP90的变化与在mRNA水平上的变化高度一致,热胁迫处理没有造成血淋巴细胞凋亡的显著变化。这些研究结果进一步证明热胁迫产生的ROS激活HSP90基因的表达,HSP90蛋白在保护机体免受ROS引起的伤害中起着重要作用,能够抑制血淋巴细胞凋亡的发生。     

缺血预适应对大鼠肢体缺血/再灌注后小肠细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠肢体缺血再灌注后小肠粘膜自由基及钙含量改变与细胞凋亡情况．以及缺血预适应对其变化的影响。方法：将雄性Wistar大鼠18只,随机分为对照（Control）组,缺血／再灌注（I／R）组和缺血预适应（IPC＋I／R）组,分别测定血浆和小肠组织超氧化物歧化酶（SOD）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、丙二醛（MDA）的含量,小肠组织钙及线粒体钙含量;小肠组织的Bel-2和Bax蛋白的表达水平;检测小肠细胞凋亡情况。结果：肢体I／R后血浆和小肠粘膜SOD减少而XOD和MDA增加;小肠组织钙及线粒体钙含量增多;Bel-2蛋白表迭和Bax表达增多,但Bel-2／Bax比值降低;凋亡细胞增多。IPC减轻了I／R后引起的XOD、MDA含量的升高,并且增加了SOD的含量;减轻了组织和线粒体钙超载;Bel-2的表达则明显升高而Bax表达较I／R组明显减少,Bel-2／Bax比值升高;凋亡细胞减少。结论：肢体IR引起小肠粘膜自由基的增多,钙超栽,凋亡细胞增多;IPC可能通过减少自由基的产生及钙超载,抑制细胞凋亡而对肢体I／R继发的小肠功能损伤起保护作用。     

人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡研究及氨茶碱的诱导作用

目的:在前期研究的基础上进一步观察氨茶碱对人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡的诱导作用。方法:密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞,分空白组及氨茶碱组,培养后观察细胞光镜及电镜形态学、FDA/PI荧光染色,并用流式细胞仪检测凋亡和胀亡细胞比例变化。结果:①人外周血T淋巴细胞经体外培养,可自然出现典型的细胞凋亡与胀亡形态学改变。②人外周血T淋巴细胞在氨茶碱诱导作用下,凋亡率有显著增高,但胀亡率相对无显著增高。结论:人外周血T淋巴细胞存在凋亡与胀亡现象,氨茶碱可诱导人外周血T淋巴细胞凋亡,但不能有效的诱导健康人外周血T淋巴细胞胀亡。     

肾上腺髓质素降低培养海马神经元胞内游离钙离子浓度

经荧光探针Fluo 3-AM标记细胞内游离钙后,用激光共聚焦显微镜检测肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对原代培养大鼠海马神经元内游离钙浓度([Ca^2 ]1)的影响。实验结果如下：(1)ADM(0．01-1．0μmol／L)浓度依赖性地降低细胞内钙浓度。(2)降钙素基因相关肽受体阻断剂(calcitonin gene-related peptide,CGRP8-37)预处理可部分抑制ADM的效应。(3)ADM可显著抑制高钾引起的[Ca^2 ]1增加。(4)ADM可显著抑制三磷酸肌醇(inositol 1,4,5-trisphosphate,IP3)引起的内钙释放,而对兰尼定(ryanodine)引起的内钙释放无显著影响。以上结果提示,ADM降低培养海马神经元内游离钙浓度,此作用与其抑制IP,引起的内钙释放有关,ADM对静息状态下的Ca^2 内流无影响,但可显著抑制高钾引起的Ca^2 内流,CGRP受体介导了ADM的上述效应。     

线粒体钙离子转运的研究进展

线粒体内的钙离子浓度对于线粒体的ATP合成、线粒体通透性转变孔道的开放及细胞质内钙信号的调节具有重要影响。线粒体的钙离子转运调节平衡是线粒体除合成ATP和诱导细胞凋亡以外的又一重要功能。线粒体中存在钙吸收和钙释放两种重要的钙转运机制。文章就线粒体外膜钙离子的转运、内膜钙离子的吸收和释放等线粒体钙离子转运方式的研究历史和最新研究进展进行了综述。     

人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡研究及地塞米松的诱导作用

目的:观察分离培养的人外周血T淋巴细胞的调亡与胀亡.方法:密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T淋巴细胞,分空白组及地塞米松(DXM)组,培养后观察细胞光镜及电镜形态学、FDA/P1荧光染色,并用流式细胞仪检测凋亡和胀亡细胞比例变化.结果:①人外周血T淋巴细胞经体外培养,可自然出现典型的细胞凋亡与胀亡形态学改变.②人外周血T淋巴细胞在地塞米松诱导作用下,凋亡率与胀亡率皆有显著增高.③随着培养时间的增加人T淋巴细胞凋亡与胀亡率亦有升高.结论:人外周血T淋巴细胞存在凋亡与胀亡现象,DXM可诱导人外周血T淋巴细胞凋亡与胀亡.     

三氧化二砷对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞凋亡和IL-10分泌的影响

目的观察不同浓度三氧化二砷（As2O3）对活动期系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞凋亡及白介素10（IL-10）分泌的影响。方法收集15例未曾用过激素及免疫抑制剂治疗并排除其它类型的自身免疫性疾病及感染性疾病的初诊SLE患者和同期15例健康体检者（健康对照组）的外周血,分别于不同浓度As2O3干预培养后12h和24h采用VnnexinV＼PI染色定量分析外周血淋巴细胞凋亡率,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中IL-10的含量。结果SLE组患者和健康对照组在不同As2O3浓度下12h和24h的凋亡率均增加（P〈0．05）;不同浓度As2O3诱导SLE患者在12h和24h淋巴细胞凋亡率明显高于健康对照组（P〈0．05）;且随As2O3干预浓度的增加,两组外周血淋巴细胞凋亡率均增加（P〈0．05）。SLE组患者外周血淋巴细胞在体外培养后分泌IL-10水平明显高于健康对照组（P〈0．05）,且As2O3能显著抑制其分泌,As2O3对健康对照组无影响（P〉0．05）。结论As2O3能诱导外周血淋巴细胞凋亡,并且具有时间和浓度依赖性,提示As2O3通过引起淋巴细胞凋亡发挥治疗作用;As2O3抑制SLE患者外周血淋巴细胞分泌IL-10可能是其发挥治疗作用的重要机制之一。     

交感神经调节外周血淋巴细胞再分布的机制

免疫细胞在机体各部位之间不停地迁徙,对于抗原识别和启动快速有效的免疫应答至关重要.大量研究表明:心理和身体应激可引起外周血免疫细胞亚群分布改变,而交感神经在调节应激引起的外周血淋巴细胞再分布的过程中扮演了重要角色.神经和免疫相互调节机制研究表明,交感神经活化时通过释放儿茶酚氨类神经介质,一方面通过引起血流动力学改变和对免疫细胞表面黏附分子表达的调节,引起外周血白细胞分布改变;另一方面通过诱导淋巴细胞凋亡参与调节慢性应激时淋巴细胞数目下降.