Celecoxib 联合X 线对胆管癌细胞株QBC939 凋亡的影响

目的:研究塞来昔布联合X线在体外环境下对人胆管癌细胞株QBC939凋亡的影响并对其机制进行初步探讨。方法:CCK-8检测出不同浓度的塞来昔布及不同剂量的X线对QBC939细胞株的增值抑制率,确定塞来昔布组的IC50及X线组的IC50。将QBC939细胞株分为5组:对照组(control)、X线组(R)、塞来昔布组(C)、塞来昔布再加X线组(C+R),X线再加塞来昔布组(R+C)。用流式细胞仪检测各组的凋亡率,western blot检测凋亡相关基因survivin蛋白的表达。结果:联合使用塞来昔布和放疗组的凋亡率有明显的增加,从8.268%,11.233%到15.733%,22.133%(P<0.05)。western结果显示联合组survivin蛋白的表达也明显低于对照组(P<0.05)。先用塞来昔布再加放疗的效果要优于先用放疗后用塞来昔布的效果。结论:塞来昔布联合X线对QBC939细胞株有凋亡增敏作用,作用可能机制之一是通过降低或下调凋亡相关基因survivin蛋白的表达。     

靶向survivin 的siRNA 联合5-FU 转染抑制肝细胞株HepG2 增殖的研究

目的:研究靶向survivin的(小分子干扰RNA)siRNA和(氟尿嘧啶)5-FU联用对肝癌细胞HepG2的增殖抑制及凋亡的影响。方法:将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组。转染采用脂质体法。RT-PCR法检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果:空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组survivin mRNA表达无明显变化(P>0.05),siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组survivin mRNA表达明显下降(F=280.326,q=4.72~7.34,P<0.05)。5-FU+siRNA转染组增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其它各组相比抑制率明显增高(F=280.326,q=5.27~9.84,P<0.05)。5-FU+siRNA组与其它各组相比细胞凋亡率明显增高(F=13568.68,q=110.47～327.16,P<0.01)。结论:将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

乙肝病毒X蛋白通过β-catenin通路调控肝癌细胞增殖、细胞周期的研究

乙肝病毒X蛋白(HBx)是由乙型肝炎病毒(HBV)DNAX基因编码的蛋白,具有促癌作用且与乙肝相关肝癌的发生有关,但其发挥促癌作用的机制尚不清楚.在乙肝相关肝癌中,β-连环蛋白(β-catenin)通路过度激活并介导了促进细胞增殖、加速细胞周期的效应.为了观察HBx是否通过β-catenin通路调控肝癌细胞增殖、细胞周期,本实验培养肝癌Huh7细胞株并分为对照组、转染HBx质粒的HBx组、转染HBx并用β-catenin抑制剂ICG-001处理的HBx+ICG-001组、转染HBx并用β-catenin抑制剂XAV939处理的HBx+XAV939组,检测细胞增殖活力OD490nm、细胞周期及生存素(survivin)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-myc、β-catenin、磷酸型GSK-3β(p-GSK-3β)的表达量.结果显示,HBx组的OD490nm水平、细胞周期S期、G2/M期的比例、survivin、bcl-2、cyclinD1、c-myc、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均高于对照组,细胞周期G0/G1期的比例低于对照组(P＜0.05);HBx+ICG-001 组、HBx+XAV939组的OD490nm水平、细胞周期S期、G2/M期的比例、survivin、bcl-2、cyclinD1、c-myc、β-catenin、p-GSK-3β的表达量均低于HBx组,细胞周期G0/G1期的比例高于HBx组(P＜0.05).结果表明,HBx促进肝癌细胞增殖、加速细胞周期的作用与激活β-catenin通路有关.本研究的创新之处在于阐明HBx促进肝癌细胞增殖、加速细胞周期的分子机制,激活β-catenin通路是介导HBx上述作用的分子机制之一,这也为今后乙肝相关肝癌的防治提供了新思路、新靶点.     

LncRNA MEG3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)人母系表达基因(Maternally expressed gene 3,MEG3)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:选取我院住院的OA患者和半月板损伤患者各40例,采用RT-PCR检测两组患者软骨组织和细胞中MEG3的表达。在OA软骨细胞中,转染si RNA-MEG3(si-MEG3)或过表达MEG3的慢病毒载体(LV-MEG3),采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR和western blot检测PCNA、Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达。结果:OA患者膝关节软骨组织中MEG3的表达水平明显低于半月板损伤患者软骨组织(P0.05),同时OA软骨细胞中MEG3的表达水平明显低于正常软骨细胞(P0.05)。OA软骨细胞转染siMEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显下降(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显升高(P0.05),S期细胞比例明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显增加(P均0.05)。低表达MEG3能够显著降低Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),增加GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P均0.05)。在OA软骨细胞转染LV-MEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显升高(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),S期细胞比例明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显减少(P均0.05)。高表达MEG3能够显著增加OA软骨细胞中Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),降低GSK-3βm RNA和蛋白表达(P均0.05)。同时,采用XAV939阻滞Wnt/β-catenin信号通路能够显著逆转过表达MEG3对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:MEG3在OA患者和软骨细胞中均显著低表达,并能够通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路激活影响OA软骨细胞增殖和凋亡。MEG3可能成为OA治疗的重要靶分子。     

澳洲茄碱诱导胆管癌QBC939细胞凋亡及作用机制

研究澳洲茄碱对人胆管癌上皮细胞系QBC939凋亡的诱导与作用机制。采用MTT法检测不同浓度澳洲茄碱对QBC939细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测澳洲茄碱对QBC939细胞的凋亡诱导情况;Western blot检测澳洲茄碱对QBC939细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3、caspase7、PARP、cleaved PARP)的表达影响。结果发现澳洲茄碱以浓度依赖方式能够抑制QBC939细胞的增殖;澳洲茄碱能够显著诱导QBC939细胞的凋亡;澳洲茄碱可以上调Bax、caspase3、caspase7和cleaved PARP蛋白表达,下调Bcl-2和PARP蛋白表达。表明澳洲茄碱能够通过改变凋亡相关蛋白表达,诱导胆管癌QBC939细胞的凋亡,这对于研发和治疗胆管癌相关药物具有一定的潜在价值。     

周期蛋白D1参与香烟烟雾提取物促进人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

本文旨在探讨周期蛋白D1(cyclin D1)在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)所致人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖和迁移中的作用。构建反义cyclin D1基因真核表达载体(pIRES2-EGFP-ascyclin D1),采用脂质体介导基因转染法将空载体(pIRES2-EGFP)和pIRES2-EGFP-ascyclin D1导入正常HPASMCs后,分别进行CSE干预。细胞随机分为6组:对照组、空载体组、反义cyclin D1组、5%CSE组、空载体+5%CSE组、反义cyclin D1+5%CSE组。用实时荧光RT-PCR和Western blot法分别检测cyclin D1mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色法测定细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移能力。结果显示,反义cyclin D1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-ascyclin D1成功构建,并成功转染入HPASMCs,转染后HPASMCs中cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著下降(P0.05)。与对照组比较,5%CSE组cyclinD1的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.05),细胞增殖和迁移能力显著增强(P0.05)。与5%CSE组比较,反义cyclinD1+5%CSE组cyclin D1mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.05),细胞增殖和迁移能力显著降低(P0.05)。上述结果提示,CSE可通过上调cyclin D1表达促进HPASMCs增殖和迁移,反义cyclin D1基因真核表达载体可抑制CSE介导的HPASMCs增殖和迁移,提示cyclin D1在CSE所致HPASMCs增殖和迁移中发挥重要调控作用。     

UPR在人胆管癌细胞株QBC939中的作用

目的:研究UPR(未折叠蛋白反应,unfolded protein response)在QBC939细胞中的作用,为临床治疗胆管癌提供新思路.方法:低剂量过氧化氢(H2O2、顺铂(DDP)作用于人胆管癌QBC939细胞系,MTT法测定不同处理组细胞生长曲线,western-blot法测定不同处理组IRElα、BiP蛋白表达情况.结果:低剂量过氧化氢诱导QBC939增殖,顺铂抑制QBC939细胞增殖,IREloα、BiP蛋白在过氧化氢组表达强阳性.结论:UPR促进细胞增殖,对细胞起保护作用,降低顺铂的抑制细胞作用.     

塞来昔布联合survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布和survivin反义寡核苷酸(ASODN)联合作用对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法:构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠随机分为4组:对照组、塞来昔布组(给予1000ppm的塞来昔布饮水)、survivin ASODN组(瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN)、联合组(给予1000ppm的塞来昔布饮水的同时瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN);观测裸鼠肿瘤生长情况并测量不同时间的体积变化,于接种肿瘤的35天处死裸鼠,测瘤体质量,应用cas- pase-3试剂盒检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数(PI)和微血管密度(MVD)。结果:治疗组平均体积均明显低于对照组(491.97±4.62mm~3,427.34±14.62mm~3,300.39±6.59mm~3 vs 703.56±12.51 mm~3,P<0.01),其中联合治疗组体积明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01);平均抑瘤率分别为32.26%、50.86%、62.07%。治疗组caspase-3相对活性明显高于对照组(0.026±0.003、0.040±0.018、0.059±0.005 vs 0.006±0.001,P<0.01),其中联合治疗组caspase-3相对活性明显高于塞来昔布组(P<0.01)或survivin ASODN组(P<0.05);治疗组平均PI和MVD均明显低于对照组(P<0.01,或P<0.05),其中联合治疗组平均PI和MVD明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01,或P<0.05)。结论:COX-2抑制剂塞来昔布和survivin ASODN联合应用可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过共同提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,为胰腺癌的治疗提供了新的思路。     

比较NRP-1反义寡核苷酸与VEGFR-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究比较神经纤毛蛋白1(NRP-1)反义寡核苷酸(ASODN)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖活性及凋亡水平的影响。 方法:分别及同时将不同浓度经硫代磷酸化修饰的NRP-1 ASODN 和 VEGFR-2 ASODN 转染入人胃癌SGC7901细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平;MTT比色法测量细胞的增殖活性;流式细胞仪测量细胞的凋亡水平。 结果:转染NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN后,人胃癌SGC7901细胞NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平均出现降低;NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN对SGC7901细胞有明显抑制增殖和促进凋亡的作用,且随着ASODN浓度升高而增强;分别转染时其作用无显著差别,联合转染时其作用明显增强。结论:NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN可抑制人胃癌SGC7901细胞 NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平及细胞增殖活性,促进细胞凋亡;与分别转染相比,两者联合转染作用明显增强。     

C-myc对子宫内膜细胞增殖和凋亡的影响

为了通过子宫内膜细胞实验检测原癌基因C-myc对子宫内膜癌发生发展的影响,本研究用蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空白对照组中C-myc蛋白的表达情况;细胞计数盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞活力;蛋白免疫印迹法分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化;Annexin/PI流式分别检测C-myc转染组和空载体转染组的子宫内膜细胞凋亡率的变化。C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞中C-myc蛋白表达明显高于空白对照组;C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞活力显著低于空载体转染组(p0.05),Ki67蛋白的表达明显高于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的的表达显著高于空载体转染组(p0.05)以及抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p0.05);C-myc转染子宫内膜细胞后,细胞凋亡率明显高于空载体转染组(p0.05)。本研究表明,C-myc能够促进子宫内膜细胞增殖并诱导细胞凋亡,子宫内膜细胞的增殖过度和凋亡失衡在子宫内膜癌的发生发展中具有重要意义。     

靶向Survivin基因与肿瘤

Survivin基因不仅表达于绝大多数的肿瘤细胞中,也存在于人体正常的细胞中,它具有抑制凋亡和调节有丝分裂的双重作用．临床研究表明：下调Survivin基因的表达或者抑制Survivin蛋白的功能,可以降低肿瘤细胞的生长潜力、增加凋亡的比例,而且可以增强肿瘤细胞对抗肿瘤药物和放射线的敏感性．许多抗肿瘤药物通过诱导细胞凋亡而发挥功能．但某些肿瘤表现出对它们的耐药性。导致肿瘤耐药性的一个最重要的因素就是Survivin的表达．有关细胞凋亡途径和Survivin基因表达等方面的研究可为发现和发展新型抗肿瘤药物提供新的途径．     

存活蛋白与细胞分裂

凋亡抑制蛋白家族的新成员存活蛋白(survivin)在肿瘤细胞中特异性地表达,它不仅具有抗凋亡的功能,而且它在细胞分裂中的重要作用也越来越受到人们关注,这一方面的研究取得了新的进展。深入研究存活蛋白在细胞分裂中的作用,将拓展人们对于这一分子新的认识。     

肿瘤中与survivin有关的信号通路及分子以及靶向survivin的治疗前景

Survivin在细胞内环境稳定和肿瘤的形成中起重要的作用,在肿瘤的治疗中,survivivin的靶向治疗调节与一些典型的信号通路和一系列生长因子有关。众所周知,survivin是一个小的凋亡蛋白抑制因子,也是一个主要的抗癌靶标,与细胞分裂和凋亡抑制有关,它在大部分正常组织中缺失但在大部分癌组织中过表达。Survivin是一个与众多细胞信号通路有关的节点蛋白,这些通路协调各种细胞因子、转录网络和修饰基因,通过调节癌细胞内环境稳定直接或间接促进细胞增殖。临床前研究数据表明,survivin的抑制可以降低细胞增殖促进凋亡,增加细胞对细胞毒药物和放疗的敏感性,其过表达与不良预后和治疗耐受有关。因此对于癌症治疗,survivin是一个潜在的靶标。     

Survivin structure: crystal unclear

The recent X-ray structures of the anti-apoptotic protein survivin reveal two different dimeric interfaces. More experiments are needed to determine the biologically relevant dimer interface and to probe survivin function on the basis of its structure.     

凋亡抑制基因Survivin与肿瘤的关系

Survivin是一种新的凋亡抑制蛋白,其具有抗凋亡的特征性结构。Survivin在肿瘤的发生发展中起重要作用,与肿瘤预后密切相关,有望成为一种广谱的肿瘤诊断标记物,并可能是抗肿瘤治疗的重要标靶。     

Survivin基因在肺癌中的作用

Survivin是凋亡蛋白抑制因子(inihibitor of apoptosis protein,IAP)家族中的一员,发挥强大的抑制凋亡功能,同时也参与细胞周期调控,使该基因在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。Survivin基因特异性的表达于大多数常见的恶性肿瘤(如肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等),而在正常成人组织中不表达或低表达。大量的研究涉及Survivin基因与肺癌的关系,目前的研究认为,Survivin基因可能成为一个提示预后不良的肿瘤标志物,可为肺癌的诊断提供新的方法。而且很多研究已经进入临床试验阶段,使得Survivin基因在肺癌治疗方面的应用前景广泛。随着研究的不断深入,Survivin有望成为肺癌治疗的理想靶点。本文对Survivin基因在肺癌中作用的研究进展作如下简要综述。     

Survivin小分子抑制剂的研究进展

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一员,在抑制细胞凋亡、调控细胞周期、参与血管形成等方面发挥重要的生物学功能。Survivin在多种肿瘤组织中过量表达,与肿瘤不良预后和耐药性密切相关。Survivin作为一种潜在的肿瘤治疗靶点,其小分子抑制剂用于肿瘤治疗的研究为人们所关注。概述了Survivin的结构、功能及其在肿瘤组织中的特异性表达,综述了目前靶向Survivin的小分子抑制剂的研究进展。