异育银鲫肠道噬菌蛭弧菌BDF-H16的分离及其对嗜水气单胞菌的裂解活性

噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)是一种通过裂解其他细菌进行生长繁殖的寄生性细菌,是自然环境中病原菌滋生的天然生物控制因子,誉有"活性抗生素"的美称.     

西瓜食酸菌抗铜基因cueR的生物信息学分析及功能验证

【背景】CueR被证实在模式细菌大肠杆菌的Cue抗铜系统中参与转录调控,西瓜食酸菌(Acidovorax citrulli)中是否有类似的机制尚不清楚。【目的】鉴定西瓜食酸菌中的cueR基因、分析其编码蛋白的特点与功能,可以为进一步探究类Cue系统在西瓜食酸菌铜稳态中的作用机制奠定基础。【方法】以大肠杆菌等4个模式细菌中已经鉴定的CueR为参照,运用生物信息学手段对西瓜食酸菌的CueR (AcCueR)与大肠杆菌的EcCueR、铜绿假单胞菌的PaCueR、沙门氏菌的SeCueR、霍乱弧菌的VcCueR蛋白进行结构、性质、亚细胞定位、互作因子等特征分析;利用同源重组插入突变技术构建西瓜食酸菌FC440菌株cueR基因的突变体,并制备突变体基因功能互补菌株,比较分析各菌株抗铜性表型。【结果】西瓜食酸菌和铜绿假单胞菌的CueR序列相似性最高;5个细菌的CueR蛋白均属于HTH-MerR-SF超家族,三级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成;5种蛋白结构相似;AcCueR可以与西瓜食酸菌中P型ATP酶(即CopA)、多铜氧化酶CueO产生互作,且copA启动子中存在一个与CueR结合的回文结构。在含Cu~(2+)培养基上,突变菌株FC440(?cueR)生长能力明显减弱,基因功能互补菌株FC440(?cueR-cueR)的生长能力则完全恢复。【结论】西瓜食酸菌中的cueR基因与菌的抗铜性相关,其AcCueR蛋白与大肠杆菌等菌中的CueR具有相似的结构与功能,在西瓜食酸菌中可能存在类似于大肠杆菌的Cue抗铜系统。     

青枯菌三型分泌系统研究进展

摘要:青枯菌(Ralstonia solanacearum)可导致多种重要经济作物毁灭性枯萎(bacterial wilt,又称青枯病),是世界上分布最广、危害最严重的十大植物病原细菌之一。注射器状的三型分泌系统(Type III secretion system)是青枯菌的一个决定性致病因子,青枯菌利用T3SS向寄主细胞中注射大量效应蛋白(Type III effectors)来抑制寄 主的免疫反应,从而引起寄主感病。本文围绕近年来有关青枯菌T3SS 遗传特性、表达调控、效应蛋白功能等方面最新进展进行综述,为全面了解青枯菌致病机理和植物细菌病害的防治提供新思路。     

肺炎克雷伯菌菌毛的研究进展

肺炎克雷伯菌为条件致病菌,可引起肺炎、败血症等多种化脓性炎症,近年来肺炎克雷伯菌也成为医院内感染的主要致病菌之一。研究表明,菌毛作为细菌重要的毒力因子之一,在细菌黏附过程中起重要作用,细菌可借助于菌毛尖端黏附素黏附到宿主的组织器官,这是引起机体致病的首要条件。肺炎克雷伯菌菌毛包括Ⅰ型菌毛和Ⅲ型菌毛,绝大多数的肺炎克雷伯菌均可表达Ⅲ型菌毛,在医院感染的致病过程中起到关键作用。     

对硝基苯酚对细菌产生持留菌的影响及其相关机制

【目的】研究对硝基苯酚(PNP)对大肠杆菌和铜绿假单胞菌产生持留菌的影响,并对转录组进行分析,阐明对硝基苯酚影响持留菌形成的相关机制。【方法】采用氧氟沙星抗生素探究对硝基苯酚对细菌产生持留菌的影响,并通过检测细菌自溶情况和呼吸抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)对持留菌比例的影响,然后通过转录组分析其相关基因的表达,最后通过实时荧光定量PCR和反义核酸进行相关功能基因的验证。【结果】PNP可以通过抑制大肠杆菌和铜绿假单胞菌的呼吸作用使其产生持留菌的比例增加,PNP不同浓度、作用不同时间和作用不同生长时期的菌体都会影响细菌产生持留菌的比例。PNP和呼吸抑制剂CCCP均能够抑制2个菌体的自溶情况,包括溶解氧含量的变化、蛋白质降解情况、细胞尺寸的变化和RNA完整性。转录组分析和实时荧光定量PCR实验结果表明加入PNP后,cyo A、app C两个基因在大肠杆菌和铜绿假单胞菌中的表达量均显著下降,再通过反义核酸抑制cyo A、app C的表达发现持留菌的比例和原始菌株相比均有所增加。【结论】PNP可以通过抑制细胞呼吸作用来增加细菌产生持留菌的比例。     

病原性孤菌

<正>孤菌在海洋细菌中占有相当大的比例。生活在海洋周围、且喜食海产物的日本人,接触孤菌的机会较多。现已知11种人的病原性孤菌(表1)(但是霍乱菌和纳格孤菌在分类学上属同一种类)。非病原性孤菌已知20种以上。在人的病原性孤菌中已知的主要致病因子仅为霍乱菌的霍乱毒素,其它菌种的致病机制尚未明确。其中有仅以“是从患者身上分离出的”为理由,便作为病原性孤菌。因此,这些细菌致病因子的阐明,对于明确致病机制和区别病原性菌株和非病原性菌株都很有益。在基因水平上分析特别重要的致病因子并制造相应的基因探针。目前,这些探针还未用于临床检查中,但已用于致病因子的分析和流行病学的研究中,本文作一综述,并论述今后开发和利用DNA探针的意义。 (一)病原性孤菌的致病因子     

鼠伤寒沙门菌入侵宿主细胞机制研究进展*

鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)是一种人畜共患的肠道病原菌,可引起肠道炎症。该病原菌主要通过其致病岛(SPIs)编码的III型分泌系统(T3SS)分泌效应因子,包括促炎因子和抗炎因子。其在入侵肠上皮细胞时会释放促炎因子引发炎症反应,同时,为防止促炎因子过度破坏宿主细胞影响菌体的生存和繁殖,鼠伤寒沙门菌会产生一系列抗炎因子来调节细胞内信号通路,与宿主共同繁殖并最终全身扩散造成严重感染。旨在对鼠伤寒沙门菌利用T3SS效应因子入侵并调节宿主细胞信号通路机制进行概述。     

铜绿假单胞菌生物膜和浮游菌的毒力表达差异

目的探究铜绿假单胞菌生物膜和浮游菌状态下毒力因子的表达差异。方法使用铜绿假单胞菌标准菌株PAO1,分别在生物膜(静置)和浮游菌(摇床)状态下培养,收集上清液,检测总蛋白酶、LasA和LasB弹性蛋白酶、鼠李糖脂、绿脓素、溶血活性;通过荧光定量PCR检测群体感应(quorum sensing, QS)系统相关基因的表达;同时,通过活菌计数检测PAO1在生物膜和浮游菌状态下的生长曲线。结果生物膜状态下,铜绿假单胞菌PAO1的总蛋白酶、LasA、LasB弹性蛋白酶、鼠李糖脂、绿脓素表达均增高(均P0.05),溶血活性增高(P0.05),生物膜和浮游菌状态下细菌生长曲线差异无统计学意义,QS相关基因rhlI、rhlR、rhlA、lasI、lasR、pqsA、pqsR表达增高(均P0.05)。结论铜绿假单胞菌PAO1在生物膜状态下毒力因子表达较浮游菌状态下增高。     

制备禽致病性大肠杆菌菌蜕的三种方法比较

菌蜕(Bacterial ghosts)是一种只含有细菌内、外膜结构的细菌空壳,可作为新型疫苗和传递载体。本研究通过3种方式制备禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenicity Escherichia coli,APEC)分离株DE17的菌蜕,评价不同的菌蜕制备方法。结果表明,利用噬菌体Phi X174的裂解基因E构建的溶菌质粒pBV220-E制备DE17菌蜕,对DE17菌株裂解率可达99.9%,扫描电镜观测结果表明,在DE17两端或中部形成可见的跨膜孔道,呈现典型的菌蜕结构。利用合成的细胞穿透肽MAP(KLALKLALKALKAALKLA)作用于DE17制备菌蜕,结果表明,10μmol/L的MAP可实现对OD_(600)=0.1的DE17完全灭活,扫描电镜虽未看到明显的跨膜孔道,但细菌的膜结构呈现沟壑状,而构建的可表达MAP的溶菌质粒pBV220-MAP并不能实现对DE17的裂解作用。本研究通过比较分析不同APEC菌蜕的制备方式,为进一步研究菌蜕疫苗和提高菌蜕疫苗的生物安全性提供参考。     

活性氧在海带抗褐藻酸降解菌感染中的作用

海带是我国大型经济海藻养殖的主要对象 ,养殖历史长 ,用途广泛。海带人工育苗是发展我国海带养殖事业的一个重要环节。海带病烂 (烂柄病 ) ,尤其在育苗期 ,将造成很大的经济损失。研究指出 ,海带的病烂与褐藻酸降解菌的大量繁殖有关[1- 3 ] 。褐藻酸降解菌是海带藻体上主要附生细菌 ,正常情况下并不引起病烂 ,但若养殖环境恶化 ,如过于密植、损伤、温度过高等 ,使海带的抵抗力下降 ,细菌易于侵入并大量繁殖而导致病害。本文以褐藻酸降解菌为病原细菌 ,研究海带活性氧的产生及其在抵抗褐藻酸降解菌感染过程中所起的作用 ,以期为揭示海带活性…     

高效聚磷菌的诱变选育及特性研究

实验采用15 keV不同剂量的低能氮离子束注入G菌,选育出两株高效聚磷菌K1、K2。其聚磷率明显高于实验出发菌,为G菌的1.43倍~3.89倍。经多次传代实验表明这两株菌遗传稳定性较好。根据生理生化及生长实验,这两株菌被鉴定为假单胞菌属细菌(Pseudom onas spp),K1、K2两株菌的最适生长条件为:温度为30℃;pH分别为6和8。菌量OD值(optim al density)在λ为218 nm、220 nm时,分别为0.6和0.4。K1菌在3天时繁殖量达到最大,K2菌在4天时繁殖量达到最大。     

迟缓爱得华氏菌溶菌蛋白NlpD的致病性研究

目的：以牙鲆为模式生物检测了迟缓爱得华氏菌一个潜在的毒力相关蛋白NlpD的生物学功能。方法：对NlpD蛋白序列进行分析,在大肠杆菌中进行了蛋白重组表达,并通过同源重组原理采用插入失活的方式构建了nlpD的突变型菌株TNlpD。结果：NlpD由316个氨基酸组成,与已知的细菌NlpD具有很高的同源性;生物信息学分析表明,NlpD包含两个结构域：N-端的细胞溶解酶结构域和C-端的肽酶结构域,在大肠杆菌中获得的重组蛋白具有溶菌活性;与野生型菌株相比,TNlpD的生长情况基本无变化,但对牙鲆的致死率以及在牙鲆组织内的扩散和增殖能力大幅下降,此外,TNlpD抵抗牙鲆巨噬细胞活性氧的杀伤能力也明显降低。结论：迟缓爱得华氏菌的NlpD具有溶菌活性,是一种毒力相关因子,在宿主体内扩散增殖、抑制巨噬细胞呼吸爆发等过程中发挥重要作用。     

培菌白蚁菌圃和粪便微生物多样性分析

【背景】培菌白蚁是属于白蚁科的一类与鸡枞菌属真菌共生的高等白蚁,其与体内肠道微生物和体外菌圃微生物形成三维共生体系。【目的】分析培菌白蚁菌圃和粪便的微生物多样性,并与肠道微生物进行比较。【方法】通过Illumina MiSeq高通量测序方法对培菌白蚁菌圃和粪便样品进行细菌16S rRNA基因和真菌ITS测序分析。【结果】高通量测序获得培菌白蚁菌圃和粪便样品细菌和真菌的有效序列和OTU数目。5个样品细菌OTU数目在90-199之间,而真菌OTU在10-58之间,细菌的种类多样性明显大于真菌。不论是细菌还是真菌,粪便样品的OTU数目多于菌圃样品。经物种分类分析,菌圃样品主要优势细菌是变形菌门(Proteobacteria),其相对含量超过82.4%;其次是拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes);粪便样品中优势细菌为拟杆菌门,其次是变形菌门,粪便优势菌属为别样杆菌属和营发酵单胞菌属,这与培菌白蚁肠道菌多样性组成一致。培菌白蚁菌圃和粪便样品共生真菌主要为担子菌门(Basidiomycota)和子囊菌门(Ascomycota)。菌圃优势真菌为鸡枞菌属(Termitomyces),相对含量在51.83%以上,菌圃中还鉴定到炭角菌属(1%,Xylaria)。【结论】为今后培菌白蚁-体内外微生物共生关系研究以及微生物的分离培养提供了依据和参考。     

新疆艾丁湖及邻近地区嗜盐菌和耐盐菌的数量分布

以盐（NaCI）为限制性生物因子,对艾丁湖地区原核生物的分布状态进行调查,从距艾丁湖中心1．5km处出发,定距离,分季节取土样及水样（共取样20个）。对样品菌群数量统计表明,在湖水中,春秋两嗜盐菌的数量高于耐盐菌。冬季湖水温度大大降低,盐结晶沉淀,湖水中的盐浓度降低,使得湖水中的耐盐菌的数量高于嗜盐菌的数量。土壤中的有要物比湖水中的丰富,温度也较稳定,因而耐盐菌的数量高于嗜盐菌的数量。距湖岩越远,土壤中对盐依赖性强的细菌越少,反之对盐依赖性弱的菌越多。由样品中分离得到细菌173株,放线菌12株,以不同浓度NaCI为唯一生长限制因子对所分离到的细菌进行生理生化实验,获得嗜盐菌61株,其中除3株可视为新种外（新种的鉴定将另外报告）,其它均为嗜盐菌的已知产生菌种,现仅报道艾丁湖及邻近地区以盐为限制因子的原核微生物分布。     

痢疾菌质粒毒力基因的克隆及表达

<正> 所有四种痢疾菌和某些侵袭性大肠杆菌引起的细菌性痢疾,是由细菌侵入、在其中繁殖并且杀伤肠粘膜上皮细胞而造成的一种疾疡。这个病理过程,可导致典型的结肠溃疡,引起剧烈的腹P痉孪、后坠、发烧、血及粘液便排出。对这种发病机理的遗传学研究说明了毒菌侵入了肠粘膜,在细胞内繁殖,但对症状发生原因尚未搞清。根据福氏痢疾菌染色体的研究证明染色体上有多个占毒力相关的分隔区(占穿透上皮细胞、在细胞内活存/繁殖、合成O抗原和产生痢疾毒素有关)。进一步的研究表明这些菌对哺乳动物细胞的侵袭主要取决于大质粒(180-     

非致病性大肠埃希菌能增多大肠埃希菌O157:H7志贺毒素的产生

大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157：H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使毒素水平远远超过病原性菌株本身的产量,作者在体外以及鼠肠道验证了这一假设。     

单增李斯特菌感染过程中炎性体激活的研究进展

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)感染可导致人和动物李斯特菌病的发生,当机体受到单增李斯特菌感染后,胞质中的模式识别受体如NOD样受体和DNA/RNA感受器通过识别细菌的病原相关分子模式和毒力因子形成炎性体进行免疫防御。研究证实,细胞内的NLRP3、AIM2、NLRC4、RIG-I、NOD1/NOD2炎性体可分别感知单增李斯特菌的溶血素O、细菌DNA、鞭毛蛋白、菌体RNA及细菌肽聚糖碎片后被激活,促进促炎性因子白细胞介素(Interleukin,IL)-1β和IL-18的表达、成熟和分泌,诱导组织炎症和细胞的免疫应答,同时导致细胞快速死亡。本文对上述问题就国内外最新研究进展进行综述和探讨。     

国内分离的犬布氏菌的电镜观察

本文报告了用电镜对国内分离的{株犬布氏菌和W．H. O.的4种对照菌(包括犬布氏菌、猪布氏菌、羊布氏菌和牛布氏茵)进行的电镜观察结果。所有上述菌株的形状和大小基本一致,均为球杆状,其球状体直径为0.70—0．73μm;杆状体长1.0一1.46μm,宽0.5--0.7μm。细胞壁均由外膜和肽聚糖两部分组成,具有革兰氏阴性细胞壁的特征。国内株犬布氏菌的细胞表面,经常产生乳头状突起,它包有外膜,内含肽聚糖,实际上是细胞壁的一部分。外胰主要由脂多糖(LPS)组成,因此乳头状突起有可能是细菌释放内毒素(Endotoxin)的一种形式。这一现象在W．H．O．菌株中比较少见。细胞分又生长,在布氏菌中比较普遍,尤以W．H．O．菌株更为多见。超薄切片的结果表明,细胞分又是由杆状细菌的侧分裂形成的。但 是,一般报道多认为细菌的繁殖方式是横分裂。     

单核细胞增生性李斯特菌及其快速检测

李斯特氏菌是一类人畜共患病的病原体 ,其中以单核细胞增生性李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏ ｇｅｎｅｓ ,ＬＭＯ)为人们所重视 ,这种菌可引起多种畜禽和人类疾病 ,本文从ＬＭＯ的生物学特性、流行病学角度出发 ,来介绍ＬＭＯ的传播特性及其预防、快速检测方法。1　ＬＭＯ生物学特性和流行病学特性ＬＭＯ是革兰氏阳性短小杆菌 ,需氧或微嗜氧 ,2 0～ 2 5℃时有动力 ,对温度适应性较强 ,1～ 4 5℃内均可繁殖 ,较低温度下比其他细菌长得更好 ,并且毒性更大 ,该菌耐热 ,经过巴氏消毒后 ,部分细菌仍可存活 ,对亚硝酸盐、食盐及低 …     

细菌菌影疫苗的研究进展

细菌菌影疫苗(Vaccine of bacterial ghost)作为一种新型疫苗,既可诱导机体产生细胞免疫,又能诱导机体产生体液免疫和黏膜免疫。近年来,利用细菌菌影递送载体的特性,构建重组多价疫苗、DNA疫苗及药物递送的应用越来越受到人们的重视。