Über den quantitativen histochemischen Nachweis von basischen Kernproteinen mit Gallocyaninchromalaun

Zusammenfassung Es wird eine Technik entwickelt, um basische Proteine der Zellkerne nach Anlagerung von Metaphosphorsäure mit basischen Farbstoffen nachzuweisen. Die Ergebnisse wurden mit der Fastgreenfärbung pH 8,2 und biochemischen Daten verglichen. Die Metaphosphorsäure-Gallocyaninchromalaunfärbung ergibt an Bullenspermien, Thymuslymphozyten und Hühnererythrozyten (Ausnahme Forellenerythrozyten) gleiche Meßwerte wie die Fastgreenfärbung. Nach Desaminierung (Nachweis von Arginin) stimmen die zytophotometrischen Ergebnisse beider Färbungen gut mit den biochemischen Werten überein. Bei sukzedaner Färbung mit Gallocyaninchromalaun (bzw. Toluidinblau oder Fluoreszenzfärbungen) und nachfolgender Metaphosphorsäure-Gallocyaninchromalaunfärbung wird eine erhöhte Farbstoffbindung beobachtet, die auf einer unspezifischen An-färbung (Anlagerung an die DNS ?) beruht.Stipendiat der Alexander-v.-Humboldt-Stiftung.Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft.     

Über den Nachweis von Wuchsstoff in Wurzeln

Ohne ZusammenfassungMit 1 Textabbildung.     

Über den Nachweis von hydrolytischen Enzymen in Lipopigmenten

Zusammenfassung Mit histochemischen Methoden lassen sich in Lipopigmenten (Lipofuscin und Ceroid) hydrolytische Enzyme, und zwar saure Phosphatase und unspezifische Esterase nachweisen.Bei den Lipofuscinen erfolgt die Pigmentbildung hauptsächlich in Parenchymzellen, und zwar offenbar an Stellen im Cytoplasma, welche im Stoffwechselgeschehen eine besondere Rolle spielen und von vornherein eine ausgesprochene Enzymaktivität besitzen oder ganz selektiv zur Fermentbildung befähigt sind.Das Ceroid wird dagegen anscheinend in Phagozyten abgelagert, welche primär keine deutliche Fermentaktivität besitzen. Offenbar ist hier die Enzymaktivität eine Reaktion auf die Ablagerung von Fettstoffen.Der Deutschen Forschungsgemeinschaft danken wir für die Unterstützung dieser Arbeit.     

Über den topochemischen Nachweis von freiem und verestertem Cholesterin

Zusammenfassung Bei dem Feiginschen Verfahren können große Mengen an freiem Cholesterin dem topochemischen Nachweis entgehen, weil die Originalvorschrift keine quantitativen Angaben über das zur Extraktion benützte Alkohol-Äther-Gemisch enthält. Außerdem sprechen unsere Ergebnisse dafür, daß die durch das Eisenalaun katalysierten Autoxydationen am Cholesterindigitonid weniger prompt ablaufen als am ungebundenen freien Cholesterin. In vitro löst l ml des Alkohol-Äther-Gemisches 0,8 mg Cholesterindigitonid (entspricht 0,19 mg Cholesterin). Ein formalinfixierter Gefrierschnitt der Größenordnung 0,02 mm × 100 mm² aus dem menschlichen Großhirnmark besitzt aber beispielsweise nur etwa 0,1 bis 0,08 mg freies Cholesterin. Dagegen führt das alkoholische Digitoninreagens (in 40% igem Alkohol) zu keinen nennenswerten Cholesterinverlusten. — Unter den zur Diskussion stehenden primären Autoxydationsprodukten gibt das 7-Oxo-Cholesterin als Reinsubstanz keinerlei Farbreaktion mit dem Schultzschen Eisessig-Schwefelsäure-Gemisch.Mit 3 Textabbildungen, davon 2 farbigenHerrn Prof. Dr. Dr. h. c.Max Bürger in Verehrung zuggeeignet.     

Über den histochemischen Nachweis der β-Glueosidase mit 1-Naphthyl-β-glucopyranosid

Zusammenfassung Es wird eine einfache simultane Azokupplungsmethode zur Darstellung der -Glucosidase im Dünndarm verschiedener Säuger beschrieben und mit anderen histochemischen Verfahren zum Nachweis dieses Enzyms verglichen. Eine intrazelluläre Lokalisation der -Glucosidase ermöglichen nur die Indigogen-und die hier angegebene Technik, nicht dagegen die bisherigen Azofarbstoffmethoden mit 6-Br-2-Naphthyl--glucopyranosid als Substrat und p-Rosanilin zur Simultanoder Fast Blue B zur Postkupplung.Das Inkubationsmedium des neuen Verfahrens enthält 4,5–9,0 mg 1-Naphthyl--glucopyranosid (gelöst in 0,4 ml Dimethylformamid) und 0,4–0.8 ml 2% hexazotiertes p-Rosanilin in 9,0 ml 0,1 M Citronensäure-Phosphat-Puffer, pH 5,5. —Mikrochemische Messungen mit dem gleichen Substrat zeigen, daß die -Glucosidase durch p-Rosanilin in ähnlichem Ausmaß wie durch Ferricyanid im Indigogen-Medium gehemmt wird.Wegen der fraglichen Verwandtschaft von -Glucosidase und neutraler -Galactosidase wurde dieses Enzym mit obigem Ansatz und 1-Naphthyl--galactopyranosid als Substrat untersucht.

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On the histochemical demonstration of -glucosidase with 1-naphthyl--glucopyranoside

Summary A simple simultaneous azo coupling method for the demonstration of -glucosidase in the small intestine of various mammals is described and compared with other histochemical techniques for this enzyme. Strong evidence occurs that a correct intracellular localization of -glucosidase can only be obtained by means of the indigogenic and the assay presented here: the azo dye methods published so far with 6-Br-2-naphthyl--glucopyranoside as substrate and p-rosaniline for simultaneous or Fast Blue B for postcoupling are not able to reflect the true binding sites of intestinal--glucosidase.The recommended incubation medium consists of 4.5–9.0 mg 1-naphthyl--glucopyranoside (dissolved in 0.4 ml NN-dimethyl formamide) and 0.6–0.8 ml 2% hexazonium-p-rosaniline in 9.0 ml 0.1 M citric acid-phosphate buffer, pH 5.5.— Microchemical measurements using the same substrate show that p-rosaniline inhibits -glucosidase to a similar extent as ferricyanide in the indigogenic medium.Because of the presumed relationship between -glucosidase and neutral -galactosidase the latter enzyme has been demonstrated with the above mentioned assay replacing the 1-naphthyl--glucoside by the corresponding -galactopyranoside.The strongest -glucosidase and -galactosidase activity can regularly be observed in the jejunum of rats, mice and guinea-pigs where both enzymes are localized in the brush border region of the enterocytes. In comparison with -galactosidase the -glucosidase reaction is always more intensive and the azo dye production in the microvillous zone of suckling rats and guinea-pigs is far higher than in the intestine of adult animals. Furthermore both enzymes react in a similar way to inhibitors, experiments (thirst, hunger) and pregnancy and do not split naphthol AS BI -glucopyranoside respectively -galactopyranoside.Bloc fixation in formol-calcium and especially in glutaraldehyde improves the localization of the azo dye considerably; but microchemistry reveals that aldehyde fixation supresses the -glucosidase to ca. 50%. The basis activity of the enzyme following pretreatment with formol is reached within the first minute of fixation.

     

Über den Schmelz von Beuteltieren

Ohne ZusammenfassungFrühere Zahnstudien erschienen in dieser Zeitschrift von H. Marcus und seinen Schülern.     

Über den Farbwechsel von Hyla arborea

Journal of Comparative Physiology A -     

Über den Nachweis des Thyroxins in hyperthyreoidisierten Mäusen mit Hilfe des Axolotlversuches

Ohne ZusammenfassungHerrn Professor Dr.Romeis bin ich fÜr die Anregung zu dieser Arbeit, wie fÜr seine Hilfe bei ihrer DurchfÜhrung und Niederschrift zu großem Danke verpflichtet.     

Über den histochemischen und mikrochemischen Nachweis der β-Galactosidase mit 1-Naphthyl-β-galactopyranosid

Zusammenfassung Es wird ein simultanes Azokupplungsverfahren zur intrazellulären Darstellung der sauren (Hetero-) und neutralen -Galactosidase (Lactase) in verschiedenen Organen von Ratte, Maus und Meerschweinchen beschrieben.Das Inkubationsmedium enthält 4,5–9mg 1-Naphthyl--galactopyranosid (gelöst in 0,4ml NN-Dimethylformamid) und 0,5–0,8ml 2% Hexazonium-p-rosanilin in 9 ml 0,1 M Citrat-Puffer, pH 5 (Hetero--galactosidase) oder 5,5 (Lactase).Unter allen Organen reagiert die saure -Galactosidase am kräftigsten in den Lysosomen von Nebenhoden, Niere, Nebenniere, Schilddrüse, Glandula präputialis und inguinalis, Milz, Colon und Plexus chorioideus; die neutrale -Galactosidase kommt in mittlerer Aktivität nur im intestinalen Stäbchensaum vor.Die intralysosomale Darstellung der löslichen Hetero--galactosidase erfordert Blockfixation in Glutaraldehyd; die Lactase kann an frischen oder gefriergetrockneten Schnitten untersucht werden. Im proximalen Tubulus der Rattenniere wird die saure -Galactosidase durch Formol unabhängig von der Konzentration des Fixans verglichen mit Glutaraldehyd stärker gehemmt. Spätestens 10 min nach Beginn der Fixation hat das Enzym seine Basisaktivität erreicht. Spülen in hypertoner Zuckerlösung macht die Inhibition der Hetero--galactosidase teilweise rückgängig.Die mit dem Azokupplungs- und Indigogen-Verfahren gewonnenen Befunde sind weitgehend identisch.

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On the histochemical and microchemical demonstration of -galactosidase by means of 1-naphthyl--galactopyranoside

Summary A simultaneous azo coupling method for the intracellular demonstration of acid (hetero-) and neutral -galactosidase (lactase) in various organs of rats, mice and guinea-pigs is described.The recommended incubation medium consists of 4.5–9 mg 1-naphthyl--galactopyranoside (dissolved in 0.4 ml NN-dimethylformamide) and 0.5–0.8 ml 2% hexazonium-p-rosaniline in 9 ml 0.1 M citrate buffer, pH 5.0 (hetero--galactosidase) or 5.5 (lactase).Among all organs investigated the strongest acid -galactosidase reaction regularly occurs in the lysosomes of the epididymis, kidney, adrenal, thyroid, preputial and inguinal gland, spleen, colon and chorioid plexus; the neutral -galactosidase can only be detected in the intestinal brush border exhibiting a moderate activity.Because hetero--galactosidase is a highly soluble enzyme bloc-fixation using glutaraldehyde becomes necessary to achieve a precise intralysosomal localization; for the demonstration of lactase fresh or freeze-dried cryostat sections are suitable. —In the proximal tubule of the rat kidney independent of their concentration the inhibition of acid -galactosidase following treatment with formol surpasses that of glutaraldehyde. Within the first ten minutes of fixation the enzyme reaches its basis activity. The recovery rate of renal hetero--galactosidase considerably increases in the course of washing in hypertonic sugar solution.In comparison with the indigogenic technique nearly identical results can be obtained with the azo coupling procedure.