脱氧胆酸钠体外对白色念珠菌菌丝相胞外磷脂酶抑制作用研究

目的观察脱氧胆酸钠体外对致病株白色念珠菌菌丝相胞外磷脂酶的抑制作用。方法在37℃下,用蛋黄平板法培养并测量菌株产生沉淀圈的大小,用沉淀圈比值（PZ值）比较磷脂酶活力的变化。结果对照组与脱氧胆酸钠不同浓度组（依次为0.1%、0.2%、0.3%和0.4%）的PZ值分别为0.389±0.049、0.778±0.098、0.882±0.077、0.912±0.049和0.888±0.093;脱氧胆酸钠各浓度组与对照组比较差异均有非常显著性（P〈0.001）。脱氧胆酸钠不同浓度组间PZ值比较,0.1%和0.2%、0.1%和0.3%、0.1%和0.4%组间差异有显著性（P〈0.05）。结论脱氧胆酸钠体外对白色念珠菌菌丝相胞外磷脂酶具有抑制作用。     

脱氧胆酸钠体外对新生隐球菌胞外磷脂酶的作用

目的比较观察脱氧胆酸钠体外对自然生长条件下的新生隐球菌新生变种(CZYD7)胞外磷脂酶的抑制作用。方法在37℃下,用蛋黄平板法培养并测量菌株产生沉淀圈的大小,用沉淀圈比值(PZ值)比较磷脂酶活力的变化。结果对照组与脱氧胆酸钠不同浓度组(依次为0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的PZ值分别为0.390±0.050,0.782±0.038,0.875±0.074,0.914±0.048,0.885±0.091;脱氧胆酸钠各浓度组与对照组比较均有显著差异(P<0.01)。脱氧胆酸钠不同浓度组间PZ值比较,0.1%和0.2%、0.1%和0.3%、0.1%和0.4%组间有显著差异(P<0.05)。结论脱氧胆酸钠体外对新生隐球菌新生变种CZYD7株胞外磷脂酶具有抑制作用。     

14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中两种去除蛋白方法的比较

目的苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除14型肺炎链球菌荚膜多糖中蛋白质的效果比较。方法将3批次14型肺炎链球菌发酵培养液经超滤、乙醇沉淀等方法初步纯化后,平分成两份,分别采用苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除蛋白,通过比较多糖收获量、多糖组分检定结果、多糖分子质量、多糖抗原活性、多糖核磁共振图谱,以此评价这两种蛋白去除方法的效果。结果与苯酚抽提法相比,脱氧胆酸钠沉淀法制备的14型肺炎链球菌纯化荚膜多糖除收获量较高,蛋白和核酸杂质含量较低外,氨基己糖含量、多糖分子质量、抗原活性和多糖核磁共振图谱的检定分析结果无显著性差异(P>0.1)。结论作为14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中的除蛋白方法,脱氧胆酸钠沉淀法优于苯酚抽提法。     

脱氧胆酸钠对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨脱氧胆酸钠(SD)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法:(1)以不同终浓度(0、0.015mg/mL、0.05 mg/mL、0.15 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL)的脱氧胆酸钠分别作用于人脐静脉血管内皮细胞,使用CCK-8检测细胞活力、TUNEL荧光染色检测细胞凋亡;(2)以终浓度为0.15 mg/mL的SD作用于HUVEC4、8、12 h后用Western blot检测Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化情况;(3)观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对0.15 mg/mL脱氧胆酸钠组的影响。结果:CCK8结果显示随SD浓度(0~1.0 mg/mL)及作用时间(0~12 h)增加,HUVEC活力降低,0.15 mg/mL时活力为80%,1.0 mg/mL时细胞活力仅不到10%;Tunel检测示随着SD浓度的增加HUVEC凋亡明显增多;Western Blot结果示SD作用于HUVEC后Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化明显增加;Z-DEVD-FMK明显抑制了0.15 mg/mLSD引起的PARP活化。结论:脱氧胆酸钠(SD)通过启动Caspase级联反应介导了人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

脱氧胆酸钠在副溶血性弧菌死活细胞叠氮溴乙锭PCR鉴别中的应用

[目的]通过将表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate,SD)与叠氮溴乙锭(Ethidium bromide monoazide,EMA)-PCR反应体系相结合,建立SD-EMA-PCR鉴别副溶血性弧菌死活细胞的检测方法.[方法]依次对加入检测体系中的脱氧胆酸钠最适浓度、EMA区分死活细胞DNA的浓度范围、EMA激活光解最佳曝光时间进行优化;确定SD-EMA-PCR方法检测副溶血性弧菌死活细胞混合体系中活细胞的最低检出限.[结果]当脱氧胆酸钠浓度≤0.5 g/L,EMA的浓度为3.2-34.0 mg/L,曝光时间为25 min时,SD-EMA-PCR检测体系仅对死细胞DNA扩增产生抑制作用.SD-EMA-PCR检测活菌细胞的最低检出限为10 CFU/mL.[结论]死活细胞混合体系的SD-EMA-PCR检测证明该方法能够明显降低EMA-PCR漏检的死菌对检测结果造成的影响,为完善食源性致病菌检测中死活菌细胞鉴别方法提供了一种有效途径.     

5型肺炎球菌荚膜多糖无乙醇无苯酚纯化工艺的建立

目的建立一种无乙醇无苯酚的5型肺炎球菌荚膜多糖纯化工艺,并进行工艺验证。方法 5型肺炎球菌发酵培养液采用脱氧胆酸钠法去除蛋白质,再利用层析法去除核酸等杂质,并对去除蛋白质工艺、层析工艺分别进行优化。采用优化后的方法纯化3批5型肺炎球菌发酵培养液,并对新工艺进行验证。结果去除蛋白质工艺的最适参数为:脱氧胆酸钠体积分数为0.5%,pH 4.3;层析工艺的最佳条件为:氯化钠浓度200 mmol/L,pH 8.0,上样流速150 cm/h,多糖质量浓度0.50 mg/mL。在上述工艺条件下,纯化的荚膜多糖各项指标均符合《欧洲药典》9.0版标准。结论该工艺稳定、可靠,可用于大规模生产,相比于传统的乙醇苯酚纯化工艺具有先进性。     

脱氧胆酸钠体系分离紫杉烷类化合物

以脱氧胆酸钠(SDC)为手性拆分剂,建立了紫杉醇、10-去乙酰基-紫杉醇、10-去乙酰基-7-表-紫杉醇、三尖杉宁碱、巴可亭Ⅲ、10-去乙酰基-巴可亭Ⅲ、10-去乙酰基-7-表-巴可亭Ⅲ等7种紫杉烷类化合物的胶束电动毛细管色谱分离方法.分离条件为67cm×75μm毛细管,分离电压25kv,温度25℃,UV检测器230nm,气动进样3s.缓冲液为脱氧胆酸50mm,Tris-HCl140mm,MeOH20%,pH8.5.     

反相HPLC法测定静注人免疫球蛋白中残余胆酸钠含量研究

用反相高效液相色谱法(R—HPLC)测定静注人免疫球蛋白(IVIG)中残余胆酸钠含量。首先用固相提取柱吸附、浓缩制品中残余胆酸钠,然后加入一定量胆酸钠,使样品中胆酸钠含量达到可检测水平后,依外标法进行测定。结果表明,用R—HPLC法测定胆酸钠准确性及重复性较好,是一种相对准确快速的方法。     

胡杨液泡膜H+-ATPase的部分纯化及其耐盐性研究

为了阐明液泡膜H^ -ATPase在盐胁迫下的作用和适应性机制,对悬浮培养的胡杨细胞在50mmol／L盐浓度下处理10d,结果表明液泡膜H^ -ATPase、焦磷酸酶的水解活性、质子泵活性增加。将通过差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心富积的液泡膜微囊先由脱氧胆酸钠(DOC)和n-辛基-β-D-葡萄糖(OG)分步破膜抽提,经蔗糖密度梯度离心分离,部分纯化的酶含V型H^ -ATPase的主要亚基。     

胆酸盐和十六烷基三甲基溴化铵混合胶束形成

实验结果表明,在０．０５ｍＮａＣｌ水溶液中,胆酸钠,ＮａＣ（或脱氧胆酸钠,ＮａＤＯＣ）和十六烷基三甲基溴化铵,ＣＴＡＢ形成了混合胶束。对这两种混合体系,最强的胶束化作用均发生在αＢｉｌｅ＝０．３。水溶液介质中的ＮａＣｌ降低了胆酸盐分子甾环上羟基的亲水性,从而破坏了亲水面结构,ＮａＣｌ还同时促进了两亲分子碳氢组份间的疏水相互作用,因而在０．０５ｍＮａＣｌ水溶液中胆酸盐分子以垂直于胶束表面,将羧基朝向水溶液的方式与ＣＴＡＢ组成混合胶束。由于胆酸盐分子的体积位阻,在它与ＣＴＡＢ的１：１体相溶液中未能生成等比例混合胶束。     

应用ELISA法检测风疹病毒IgG抗体

实验证明,将0.1％脱氧胆酸钠制备的风疹病毒粗制抗原,用于ELISA法检测风疹病毒IgG抗体,效果较满意,方法的特异性好,与常规血凝抑制试验(HI)的相关性也好,所测抗体的几何平均值为HI的4倍。用本法初步调查了北京市不同年龄人群的风疹感染率,证明随年龄增长风疹感染率迅速上升,18岁以上人群达94％。检测河北省沧州地区孕妇的风疹IgG阳性率为99％。用於风疹病人的血清学诊断,获得较好结果。     

饲料中添加胆酸钠对大口黑鲈生长及糖代谢的影响

为探究胆酸(Cholic acid, CA)作为饲料添加剂对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长及糖代谢的影响, 实验以饲料中添加300 mg/kg胆酸钠(Sodium cholate, CAS)作为胆酸钠组, 以不添加胆酸钠作为对照组。在饲养8周后, 分析胆酸钠对大口黑鲈生长性能、肠道菌群、糖代谢及与糖代谢相关酶的活性和基因表达的影响。结果显示: 与对照组相比, 胆酸钠组中大口黑鲈的生长指数和体成分的变化均没有显著差异; 胆酸钠组中大口黑鲈的肠道菌群组成无显著差异; 胆酸钠组中肝糖原含量和肝中糖原合成酶(Glycogen synthase, GCS)的活性显著增加, 肝中糖原分解酶糖原磷酸化酶a(Glycogen phosphorylase a, GPa)活性无显著变化, 而胆酸钠组中肌糖原含量、肌肉GCS与GPa的活性无显著差异; 胆酸钠显著促进肝中糖异生途径中果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-bisphosphatase, FBPase)和葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase, G6Pase)基因的表达; 胆酸钠显著降低肝中糖酵解基因丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)和肌肉中己糖激酶(Hexokinase, HK)基因的表达; 同时, 研究还发现饲料中胆酸钠的添加可以显著降低肝中胆汁酸受体法尼醇受体(Farnesoid X receptor, FXR)基因的表达量, 而不改变肠道FXR的表达量。研究表明: 在饲料中添加300 mg/kg胆酸钠可以促进大口黑鲈肝脏糖异生, 抑制肝脏和肌肉糖酵解, 并促进鱼体肝糖原的合成。这些糖代谢的变化与肠道菌群没有直接关系, 但可能与肝中FXR的表达量降低有关。     

不同转移表型肺腺癌细胞PI-PLC的比较研究

实验证明钙、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)及脱氧胆酸钠(DOC)对两种不同转移表型癌细胞磷脂酰肌醇特异的磷脂酶C(PI-PLC)的活性影响有明显差异。高转移性人肺腺癌细胞亚系(Anip_(973))比低或无转移性人肺腺癌细胞系(AGZY_(83-a))腹水型癌细胞PI-PLC活性高2.25—7.1倍。Anip_(1211)细胞培养液PI-PLC活性也大于AGZY_(83-a)。说明不同表型肺腺癌细胞具有不同性质的PI-PLC,且活性变化与转移表型密切相关。     

不同处理方法对肺炎链球菌基因组提取的影响

为了获得简便、高效的提取肺炎链球菌基因组DNA方法,分别采用不同处理方法(溶菌酶法和脱氧胆酸钠(DOC)法)、不同处理时间对8株不同血清型的肺炎链球菌进行破壁,同时菌株采用不同培养时间进行基因组的提取,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的质量。结果表明,菌株培养12~16 h、质量分数1%DOC处理2 h能提取出高质量的肺炎链球菌基因组DNA。该方法提取的肺炎链球菌基因组DNA具有质量高、完整性好的优点,为肺炎链球菌全基因组序列的测定提供了前提条件。     

苹果树腐烂病菌胞外蛋白提取方法

选择一种理想的蛋白提取方法,获得数量多、质量高的苹果树腐烂病菌Valsa mali胞外蛋白用于蛋白质组学分析,为全面解析该病原菌的致病机制奠定基础。采用冷冻干燥透析结合法、脱氧胆酸钠(DOC)-10%TCA沉淀法、硫酸铵沉淀法3种方法分别提取苹果树腐烂病菌的胞外蛋白,并筛选最适的硫酸铵浓度,利用Bradford法测定蛋白总量、SDS-PAGE检测蛋白条带分辨率及不同致病力菌株蛋白差异。结果表明,70%硫酸铵沉淀提取的胞外蛋白量最高、SDS-PAGE电泳可辨认蛋白条带最多。强弱致病菌株胞外蛋白的SDS-PAGE电泳图谱在37-50 kD有4条蛋白条带差异明显,由此表明,70%硫酸铵盐析法更适合用于苹果树腐烂病菌胞外蛋白质差异分析时蛋白质的提取。     

脱氧胆酸钠诱导型慢性胃炎大鼠肠道菌群结构分析CSCD

目的 探讨脱氧胆酸钠诱导型慢性胃炎Wistar大鼠肠道菌群结构的变化。方法 将40只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为对照组(CG组)和模型组(MG组),每组20只;MG组以20 mmol/L脱氧胆酸钠[2 mL/(只·d)]、60%的乙醇[1 mL/(只·3 d)]灌胃以及0.03%和0.05%氨水日常饮用,同时联合饥饱失常(2 d饱食1 d禁食),持续处理12周后,解剖大鼠,裸眼和H&E染色观察胃组织病理学变化;采用高通量测序和生物信息学技术分析肠道菌群结构和多样性改变。结果 与CG组大鼠比较,裸眼观察,MG组胃腔扩张,壁变薄,皱襞少而浅,胃黏膜略显苍白、色浅;H&E染色表明,胃黏膜腺体扩张,排列稀疏紊乱,上皮细胞排列不规则,伴坏死脱落,胃小凹结构破坏。Alpha多样性分析显示,Chao1、Ace和Shannon指数显著降低,Simpson指数显著升高,差异有统计学意义(t=11.217 3、10.615 2、7.981 8、12.684 9,均P<0.001)。从门水平而言,MG组大鼠肠道菌群中Actinobacteria(t=2.318 7,P=0.031 7)、Cyanobacteria(t=1.169 6,P=0.256 6)、Proteobacteria(t=2.178 6,P=0.042 2)、Firmicutes(t=0.329 8,P=0.745 1)和Verrucomicrobia(t=1.190 1,P=0.248 6)细菌数量增加;Bacteroidetes(t=1.918 4,P=0.070 2)、Patescibacteria(t=0.135 8,P=0.893 4)和Tenericutes(t=1.419 9,P=0.171 8)细菌数量下降。从属水平而言,MG组大鼠肠道菌群Firmicutes中的Eubacterium oxidoreducens group, Proteobacteria中的Aliihoeflea、Proteus,Actinobacteria中的Eggerthellaceae;nclassified的相对丰度较CG组增高(t=2.232 9,P=0.037 8;t=3.020 8,P=0.007 0;t=2.286 1,P=0.033 9;t=2.330 7,P=0.030 9);Firmicutes中的Eubacterium xylanophilum group、Acetitomaculum、Lachnospiraceae NC2004 group、Globicatella、Anaerovorax、Lachnospiraceae A2和Lachnoclostridium 5,Proteobacteria中的Citrobacter的相对丰度低于CG组(t=3.101 0,P=0.005 8;t=2.620 3,P=0.016 8;t=2.509 6,P=0.021 3;t=2.498 3,P=0.021 8;t=2.417 5,P=0.025 8;t=2.339 5,P=0.030 3;t=2.315 1,P=0.031 9;t=2.158 2,P=0.043 9)。结论 脱氧胆酸钠、乙醇、氨水和饥饱失常联合的慢性胃炎建模法可引起Wistar大鼠肠道菌群结构发生改变。     

木瓜微粉及其对胆酸钠和重金属吸附特性研究

研究了吸附时间对木瓜微粉吸附胆酸钠的影响,并分别对金属混合液浓度、模拟人体胃肠环境的pH条件、木瓜粉的粒径对木瓜微粉吸附混合液中Cu2+、pb2+、Cd2+、Hg2+的能力进行分析,以明确木瓜微粉及其体外对胆酸钠、Cu2+、Pb2+、Cd2+、Hg2+的吸附特性.结果显示:(1)随粉碎时间的延长,微粉所占的比例增大,粒径分布更加均匀,粉碎过程中存在粉碎一团聚一再粉碎的动态变化.(2)木瓜微粉对胆酸钠的吸附随吸附时间的延长,吸附量显著增加,粗粉和粉碎10、60 min得到的微粉A、C在30 min内对胆酸钠(0.2%)吸附达到了平衡,粉碎30 min得到的微粉B在吸附60 min时对胆酸钠仍有显著的吸附能力.(3)在试验范围内,木瓜微粉B对Cu2+、Pb2+、Cd2+、Hg2+的最适吸附浓度分别为3.00、3.00、1.00、0.01 μg/mL.(4)在pH为7时对Cu2+、Pb2+、Cd2+、Hg2+的吸附率分别比pH为2时高出40.85%、21.07%、27.33%、66.38%.(5)不同粒径的木瓜粉对Cu2+的吸附率随粒径的减小而降低,对Hg2+的吸附率则增加,但对Pb2+和Cd2+的吸附率没有显著差异.研究表明,木瓜微粉在体外具有良好的吸附胆酸钠、Cu2+、Pb2+、Cd2+、Hg2+作用,可广泛用于食品和药品中.     

肠道细菌相关代谢产物脱氧胆酸的 量效和时效对秀丽隐杆线虫生长发育的影响

目的观察脱氧胆酸对线虫生存和生长发育的影响,了解脱氧胆酸的作用。方法实验对象分为对照组和实验组,其中实验组分为低浓度组、中浓度组和高浓度组。将L1期线虫放于实验组中培养48 h后观察不同浓度的脱氧胆酸对线虫生长的影响,在D0期(幼年成虫期)、D4期(线虫成年后第4天)、D6期(线虫成年后第6天)观察不同浓度的脱氧胆酸对线虫运动能力、抗感染能力、寿命和生殖能力的影响。结果不同浓度的脱氧胆酸对线虫生长的影响未见明显差异。在不同时间、不同浓度脱氧胆酸的作用下,线虫运动能力随着剂量的增加和时间的延长而降低,中高浓度脱氧胆酸可缩短线虫的寿命和降低抗感染能力,并呈剂量依赖性。高浓度的脱氧胆酸可以减少线虫的子代及缩短线虫的产卵时间。结论脱氧胆酸不影响线虫的生长。大剂量的脱氧胆酸对线虫可能存在量效和时效的生殖毒性作用和慢性毒性作用,缩短线虫的寿命,降低线虫的运动及抗感染能力,其作用机制仍需进一步研究。     

从基因工程菌分离纯化心钠素

以高效表达的基因工程菌为材料,对以包涵体形式存在的目的产物——心钠素（ＡＮＦ）融合蛋白进行了酶切及分离纯化．先用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和低浓度尿素、盐酸胍洗涤,提高包涵体的纯度．再用高浓度的尿素处理,使蛋白变性溶解,脱氧胆酸钠对蛋白有明显的促溶作用．解决变性蛋白质去除变性剂时的聚合问题．在非变性条件下进行ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＦＰＬＣ系统纯化,得到目的融合蛋白．用凝血酶对融合蛋白作特异性切割,释放出ＡＮＦ小肽,经ＦＰＬＣ分离鉴定,与标准ＡＮＦ有相同的ＴＲ值,说明其纯度已达均一．生物活性检测表明：有明显的放免活性和舒张血管、利尿的生理活性     

细胞和组织中的O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷的脱甲基作用

为了探讨细胞和组织中的O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷的脱甲基作用,我们合成了[~3H]O~6-mGua DNA、O~6-mdGuo、O~6-mdGMP、O~6-mdGTP等底物,在体外利用高压液相色谱分析细胞和组织提取物去除鸟嘌呤基团第六位氧原子上甲基的能力。结果表明,在细胞和组织提取物中存在一种去甲基酶,它能去除O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷、O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷-磷酸上的甲基,生成脱氧鸟嘌呤核苷或脱氧鸟嘌呤核苷-磷酸,并伴随着甲醇的释放。它不同于DNA甲基转移酶。没有观察到它对O~6-甲基鸟嘌呤DNA、O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷三磷酸、O~4-甲基胸腺嘧啶核苷以及O~6-甲基鸟嘌呤的去甲基作用。