植醇与寡糖对红花悬浮培养细胞的生长及α-生育酚积累的效应

在红花细胞悬浮培养基中加入α-生育酚的前体植醇能显著增加α-生育酚的积累,较高浓度的植醇(50～100 ppm)能同时促进细胞的生长。在培养基中加入抗氧剂角鲨烯也能提高α-生育酚的积累。诱导因子寡糖对细胞的生长和α-生育酚含量均有提高作用,其中以寡糖F_(11)效果较佳。悬浮细胞培养基中同时加入15ppm的寡糖F_(11),75ppm的植醇和100 ppm的角鲨烯,细胞生长速率可提高23.81％,α-生育酚含量及产率分别比对照提高2.8倍和3.6倍。     

诱导子人参寡糖对红花培养细胞的生理效应

从人参(Panax ginseng)培养细胞中分离纯化出不同寡糖。这些寡糖能促进红花(Car-thamus tinctorius)培养细胞的生长及提高细胞中α-生育酚的含量。其中以Ⅶ、Ⅷ、Ⅵ等三种寡糖的效果较为显著。这三种寡糖的最适浓度在愈伤组织培养(5—8 mg/L)中要比在细胞悬浮培养(1—2mg/L)中高。对Ⅶ、Ⅷ两种寡糖不同时期加入的效应进行了试验,结果发现,加入寡糖后1—3天,α-生育酚的含量即提高。在红花细胞悬浮培养过程中同时加入2mg/L 的寡糖Ⅵ和寡糖Ⅶ及1mg/L 的寡糖Ⅷ,可使红花细胞生长速率提高18.11%,α-生育酚含量比对照提高3.5倍,其产率比对照提高4.3倍。     

寡糖素对红花及三七培养细胞的生理作用

三种寡糖素,即来自人参(Panax ginseng)培养细胞的人参寡糖素、红花(Carthamus tinctorius)培养细胞的红花寡糖素、黑节草(Dendrobium candidum)植物的黑节草寡糖素对红花及三七 (Panax notoginseng)的培养细胞的生长及代谢产物的含量均有显著的促进作用。寡糖素可耐高温高压(121℃、1.2bs／cm2)灭菌15分钟而不失活,其对植物培养细胞的影响与利用过滤方法灭菌的效果相似。红花寡糖素对红花悬浮培养细胞作用的适宜浓度是5-10mg/L,而在愈伤组织中为15mg/L,在三七培养细胞进入生长旺盛(培养至22天)时加入黑节草寡糖素,再培养2天后其生长即提高。黑节草寡糖素均能缩短红花及三七培养细胞生长的延缓期,提前进入对数生长期及指数生长期。并且使红花培养细胞中a-生育酚在细胞生长最活跃的指数生长期大量积累,最终增加了培养细胞及代谢产物的产率。     

寡糖素对红花及三七培养细胞的生理作用

三种寡糖素,即来自人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）培养细胞的人参寡糖素、红花（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）培养细胞的红花寡糖素、黑节草（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）植物的黑节草寡糖素对红花及三七（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）的培养细胞的生长及代谢产物的含量均有显著的促进作用。寡糖素可耐高温高压（１２１℃、．ｂｓ／ｃｍ＾２）灭菌１５分钟而不失活,其对植物培养细胞的     

人参寡糖素对三七悬浮培养细胞生长的效应

从人参培养细胞的细胞壁中分离纯化到不同分子量的单体人参寡糖素。试验结果表明命名为人参寡糖素Ⅶ和人参寡糖素Ⅷ的两种寡糖素对三七悬浮培养细胞的生长具有明显的促进作用,其增长率分别为１９．３４％和１０．５８％,人参寡糖素Ⅶ的适宜浓度为５—１０ｍｇ／ｌ。在高浓度下（大于２５ｍｇ／ｌ）稍抑制培养细胞生长。在细胞培养２２天（指数生长期）后．加入１０ｍｇ／ｌ的人参寡糖素Ⅶ．然后再培养２天。其生长速率即提高,加入人参寡糖素Ⅷ后．缩短了三七细胞悬浮培养生长的延缓期．提前进入对数生长期和指数生长期,并在对数生长期和指数生长期作用最明显,因而最终收获时培养细胞的产率增加。     

红花愈伤组织诱导、生长及其α-生育酚的产生

通过TLC和HPLC初步分析和鉴定,证明从红花(Carthamus tinctorius)无菌苗的胚根、胚轴及子叶和花蕾中诱导出的愈伤组织均具有合成α-生育酚的能力。其中以胚轴的愈伤组织和悬浮培养细胞的生长速率及α-生育酚的含量较高,分别达到0.35、0.39克干重/升·天和0.62、2.28毫克/100克干重样品。对红花细胞生长较适宜的培养基为MC培养基。培养基中附加10％椰子汁或0.1％酪蛋白氨基酸可使细胞生长显著提高,分别达到0.45和0.41克干重/升·天。     

细胞培养生产人参寡糖素降低成本的途径

在人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）细胞悬浮培养中,以无离子水代替重蒸馏水,细胞生长速率和寡糖素产率分别降低２．３％和２．９％。用白糖代替蔗糖,细胞生长速率和寡糖素产生率分别降低１．７４％和１．２３％。综合上述两方面结果,以无离子水和白糖分别替代原培养基中的重蒸馏水和蔗糖组成替代培养基,用替代培养基培养人参培养细胞,其生长速率可达０．５０９ｇＤＷ／Ｌ．ｄ．寡糖素产率可达１．４４３ｇ／Ｌ,和原培养基相     

高产人参寡糖素培养细胞变异克隆系的筛选

用２ｍｍｏｌ／Ｌ的ＭＮＮＧ处理经过滤的人参悬浮培养细胞１小时后,细胞存活率下降显著,细胞克隆植板率只是对照组的１０．１２％。经细胞平板克隆共获得克降系１５１株,其中很多克隆系转移培养中生长缓慢,甚至不生长而死亡,经分析可供测定的克隆系生长的寡糖素含量的差异,对１１株寡糖素含量较高克隆系经连续１０代继代培养观察,选出一株稳定高产人参寡糖素优良克隆系ＰＧＭＢ－３７,其平均生长速率是０．５５８ｇＤＷＬ＾     

寡糖素对西洋参和人参愈伤组织培养的影响

红花、人参和黑节草寡糖素(简称CO、GO和DO)分别加入到培养基中,均能影响西洋参和人参愈伤组织生长和皂甙的合成。CO、GO和DO促进西洋参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、15ppm和10ppm,皂甙产率分别为14.89mg/flask、11.24mg/flask和14.53mg/flask,均明显高于对照(8.22mg/flash).CO、GO和DO促进人参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、20ppm和5ppm,皂甙产率分别为11.79mg/flask、11.20mg/flask和10.48mg/flask,均明显高于对照(6.65mg/flask),它们在适度浓度下对人参愈伤组织的生长均有促进作用。     

高产人参寡糖素培养细胞克隆系的筛选

人参（ＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇＣ．Ａ．Ｍｅｙ．）培养细胞经细胞平板克隆,获得近３００个克隆系。克隆系在细胞生长速率和寡糖素含量及产率上均存在显著差异,且寡糖素产率和细胞生长之间有明显的相关性。经１１代连续继代培养观察及过氧化物酶同工酶谱特征分析,筛选到一株寡糖素产率高且稳定的克隆系ＰＧ－１８０,其平均生长速率是０．４９５ｇ于重／Ｌ·天,为原始株系的１．３９倍,平均寡糖素含量为１４．６９％干重,是亲本的１．６５倍,平均寡糖素产率是２．１８３ｇ／Ｌ,为原始株系的２．３２倍。比较克隆系ＰＧ－１８０和原始株系细胞悬浮培养时间进程发现,由人参培养细胞生产寡糖素的最佳细胞收获期为３周左右。     

高产人参寡糖素培养细胞克隆系的诱变筛选

紫外辐射能显著地降低人参培养细胞单细胞克隆的植板率。当紫外辐射悬浮细胞３０ｓ后,细胞克隆的植林率是对照组的２１．４３％。细胞克隆平板培养６０ｄ,挑取克隆连续转移培养３次,共获得克隆系１２２株。对所有克隆系进行变异分析并经１０代连续继代培养,从中筛选到一株稳定的高产寡糖素克隆系ＰＧＵＡ－０８,而且它的过氧化物酶同工酶谱特征也保持稳定。克隆系ＰＧＵＡ－０８的生长速率为０．５３７ｇＤＷＬ－１ｄ－１,是亲本的１．４６倍,寡糖素含量为１７．１６％ＤＷ,是亲本的１．８１倍,寡糖素产率为２．７６４ｇ／Ｌ,是亲本的２．６２倍。     

α-生育酚对脑皮层神经元线粒体的保护作用

目的探讨α-生育酚对神经元线粒体的保护作用。方法将神经元细胞进行分组,分为：（1）正常对照组,（2）单纯氧自由基损伤组,（3）α-生育酚保护组。利用Fenton反应造成神经元细胞氧自由基损伤,用激光共聚焦显微镜观察各组神经元JC-1染色结果,并检测各组神经元琥珀酸脱氢酶（SDH）和细胞色素氧化酶（CCO）活性。结果（1）JC-1染色结果分析：α-生育酚保护组神经元线粒体功能强于单纯氧自由基损伤组。（2）SDH和CCO酶活性分析：α-生育酚保护组神经元SDH和CCO酶活性高于单纯氧自由基损伤组。结论α-生育酚可以有效对抗氧自由基对神经元线粒体的损伤。     

壳寡糖对乳酸杆菌体外生长的影响

目的:研究壳寡糖对乳酸杆菌体外生长的影响。方法:将乳酸杆菌MRS培养基中的葡萄糖替换为壳寡糖及向原培养基中加入适量的壳寡糖,通过测定OD值比较乳酸杆菌的生长状况。结果:以壳寡糖完全代替葡萄糖的培养基中乳酸杆菌的生长状况不如MRS培养基,而少量壳寡糖与葡萄糖协同的培养条件使乳酸杆菌的生长适应期明显减短,促进其生长。结论:乳酸杆菌对壳寡糖的利用不如对葡萄糖的利用,1g/l壳寡糖与葡萄糖协同作用时可明显缩短乳酸杆菌的生长适应期,促进细菌生长。     

真菌激发子对人参悬浮培养细胞的生长和人参皂甙生物合成的影响

真菌诱导子处理人参悬浮培养细胞后,人参皂甙的合成有明显增加,诱导处理改变人参皂甙的积累时程,促进人参细胞培养物中次生产物的外泌,同时增强细胞对蔗糖的摄取、吸收并引起细胞H~ 流的变化。     

巯基蛋白酶抑制肽对体外培养细胞生长的影响

本文研究了鸡巯基蛋白酶抑制肽C二型——CPIc-Ⅱ对NC3 H10,TC3 H10,2BS,SHR,WKY和乳鼠心肌细胞的生长的影响,发现CPIc-Ⅱ对所有研究过的细胞都有促生长作用,无一例外。促进作用表现为三方面:(1)促进细胞总蛋白量增加;(2)促进DNA合成:(3)促进细胞数增加。并且转化细胞均比相应的正常细胞对CPIc-Ⅱ更敏感,至此可以得到初步的结论,CPIc-Ⅱ在细胞代谢调节方面是一个正调节因素。