人血清脂蛋白(a)中纤维蛋白溶酶原位点测定

用单克隆抗载脂蛋白(a)抗体为包被抗体,酶标抗纤维蛋白溶酶原(Pg)抗体为检测抗体建立了人血清脂蛋白(a)［Lp(a)］中Pg位点的酶联免疫吸附试验法.方法特异,测定范围为28～880 mg/L,变异系数批内为4%～6%,批间为7%～9%.检测了正常人、冠心病(CHD)和肾衰血透患者(CRF)血清Lp(a)、Lp(a)中Pg位点和Pg/Lp(a)比值.结果示正常人血清Lp(a)水平分别同Pg、Pg/Lp(a)呈正、负相关.CHD和CRF患者Lp(a)、Pg位点和Pg/Lp(a)比值明显高于正常人,认为Lp(a)中Pg位点测定对于动脉粥样硬化的病理生理研究具有特殊的价值.     

脂蛋白(a)的赖氨酸结合异质性对人动脉SMC增殖的影响

为探讨脂蛋白 ( a) [Lp( a) ]的赖氨酸结合功能在致动脉粥样硬化中的作用 ,利用短时超速离心结合凝胶层析分离纯化 Lp( a) ,以 Lysine- Sepharose4B亲和层析分离出能与柱结合的 Lp( a)Lys+ 和不能与柱结合的 Lp( a) Lys-.采用 MTT比色法、流式细胞仪分析细胞增殖状况 ,同时以ELISA法检测细胞培养液中转化生长因子β( TGF-β)的活化水平 ,观察了两种 Lp( a)对培养的人动脉平滑肌细胞 ( SMC)增殖的影响 .结果表明 :Lp( a)、Lp( a) Lys+ 较 Lp( a) Lys-能有效地促进SMC增殖 ,刺激细胞从 G0 /G1期进入 S和 G2 /M期 ,并显著降低培养液中 TGF- β活化量 .提示 :Lp( a) Lys+ 可能是 Lp( a)促人 SMC增殖的主要组分 ,其机制可能与干扰纤溶酶原活化 ,从而抑制TGF-β活化有关 .     

降脂蛋白(a)研究

脂蛋白(a)[Lp(a)]是由载脂蛋白(a)(apo(a))与载脂蛋白B100(apoB100)通过共价键连接的脂蛋白。高血浆水平Lp(a)是心血管疾病的独立风险因子,Lp(a)的血浆水平主要受遗传因素调控,主要有LPA[lipoprotein,Lp(a)]基因的三环结构域kringle IV/2拷贝数和单核苷酸多态性(SNP)。欧洲动脉粥样硬化协会(EAS)和美国心脏病协会(AHA)建议对于高Lp(a)的人群应当考虑降高Lp(a)的治疗。目前已有多种降高Lp(a)的药物和方法,如血浆分离置换法、雌激素治疗、反义核苷酸治疗、类法尼醇X核内受体(farnesoid X receptor,FXR)激动治疗等,但应用于临床的降高Lp(a)的药物和方法依然缺乏。本文拟就降Lp(a)的药物和方法进展情况进行综述。     

脂蛋白(a)的分离纯化及其抗血清的制备

脂蛋白(a)简称Lp(a),是血清中一种具特殊结构、抗原成分和生理功能的脂蛋白,近年来国外学者高度重视Lp(a)的研究并确定为动脉粥样硬化危险因素的良好指标,为了探索有关动脉粥样硬化防治的新领域,我们进行了Lp(a)的分离纯化及其抗血清的制备。     

猴肝细胞膜脂蛋白(a)受体的研究

猴肝细胞膜蛋白经 SDS- PAGE和蛋白转移电泳后用免疫印迹法测定 ,硝酸纤维素膜分别与抗牛肾上腺皮质 LDL受体的抗体、LDL、Lp( a)和 PLG温育后见有 3条不同的蛋白条带 ,分子量分别为 370 kd、2 90 kd和 80 kd.用酶标法测定猴肝细胞膜蛋白 ,发现经 Lp( a) + PLG温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + PLG温育后用 PLG抗体反应的结果比单独用 PLG温育后用 PLG抗体反应的作用强 ;同样经 Lp( a) +LDL温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与经 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + LDL温育后用 LDL抗体反应比单独经 LDL温育后用 LDL抗体的反应强 ,排除Lp( a)与 PLG和 LDL的交叉反应 ,实验认为猴肝细胞膜上可能同时存在 LDL受体、PLG受体和Lp( a)受体     

重组不可分型流感嗜血杆菌E蛋白与血浆脂蛋白(a)的相互作用

目的:E蛋白(Protein E,PE)是不可分型流感嗜血杆菌(Nontypeable Haemophilus influenza,NTHi)表面的一种纤溶酶原(plasminogen,Plg)受体,其C末端含有两个赖氨酸残基。NTHi可通过其表面的PE与Plg结合,从而利用机体的纤溶系统深层入侵宿主。基于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]中载脂蛋白(a)[Apolipoprotein(a),Apo(a)]与Plg高度的同源性,拟证明Lp(a)是否会与重组表达的PE(r PE)结合。方法:原核表达并纯化r PE及敲除C末端两个赖氨酸残基的r PEΔKK,密度梯度离心结合阴离子交换层析分离人血浆Lp(a),通过ELISA、Pull down、Western blot等方法研究r PE与Lp(a)的相互作用。结果:r PE与Lp(a)结合,但不与LDL结合,且r PEΔKK与Lp(a)的结合能力明显低于r PE;赖氨酸类似物6-氨基乙酸(EACA)能有效抑制r PE与Lp(a)的结合;Lp(a)对r PE与Plg的结合具有微弱的抑制作用。结论:r PE能够与Lp(a)结合,其中r PE的C末端赖氨酸残基和Apo(a)的赖氨酸结合位点(lysine binding sites,LBS)是r PE与Lp(a)结合的主要位点。     

载脂蛋白(a)单克隆抗体的制备及其性能研究

载脂蛋白(a)简称 apo(a),是脂蛋白(a)(Lp(a))中特征性蛋白成分,分子量在400—700kD,apo(a)以二硫键与低密度脂蛋白(LDL)的载脂蛋白 B100相连构成 Lp(a),分子量在1 200—1 500kD。近年来国内外学者认为 Lp(a)和 apo(a)是研究动脉粥样硬化危险因素的重要指标。我们为了探索脂质代谢紊乱引起的心血管系统疾病,进行了apo(a)的单克隆抗体研究。apo(a)提取的脂蛋白 Lp(a)经密度为     

重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以通过赖氨酸结合位点(LBS)与Plg相结合。脂蛋白(a)[Lp(a)]中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,即两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo(a)的KIV10含有强的LBS。因此本实验提出了Lp(a)应该能够与S.aureus表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制S.aureus与Plg结合的假说。本研究克隆了S.aureus的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL21中表达了该重组蛋白(rIMPDH)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot对rIMPDH与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以通过LBS与Lp(a)和rKIV10发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,然而本研究并未发现Lp(a)和rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。     

铜绿假单胞菌二氢硫辛酸酰胺脱氢酶的重组表达及其与脂蛋白(a)的相互作用

【目的】二氢硫辛酸酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,Lpd)是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)表面的一种纤溶酶原(Plasminogen,Plg)受体,旨在研究Lpd与脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),Lp(a)]以及Plg之间的相互作用。【方法】用大肠杆菌表达rLpd及其突变分子(rLpd K476A、rLpd K477A、rLpdΔKKR),用酶联免疫吸附实验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot等技术检测rLpd及其突变分子与Lp(a)、Plg的相互作用。【结果】ELISA及亲和色谱层析实验结果表明,rLpd可以与Lp(a)结合但不与LDL结合,Lp(a)与rLpdΔKKR的结合能力显著低于其与rLpd的结合能力。1 mmol/L的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)对rLpd与Lp(a)的结合有显著的抑制作用。1 000μg/L的Lp(a)对rLpd与Plg的结合起到显著的抑制作用。【结论】Lpd能够与Lp(a)特异性结合,其476和477两个相邻的赖氨酸残基是与Lp(a)结合的主要位点,Lp(a)可以竞争性地抑制rLpd与Plg的结合。     

不受纤维蛋白溶酶原干扰的脂蛋白(a)酶联免疫吸附测定法

实验证实脂蛋白(a)和纤维蛋白溶酶原之间具有免疫同源性,据此建立了不受Pg干扰的酶联免疫吸附法(ELISA)检测Lp(a)。a.根据Lp(a)含有apo(a)、apoB两种抗原位点,设计了抗apo(a)-Lp(a)-酶标抗apoB法;b.抗apo(a)经Pg亲和层析柱吸附处理后的抗apo(a)-Lp(a)-酶标抗apo(a)法。同时以火箭电泳为参考,经比较后,方法间相关性良好。     

前蛋白转换酶枯草溶菌素9抑制剂降低脂蛋白(a)作用的机制

脂蛋白(a)(lipoprotein(a),Lp(a))在结构上与低密度脂蛋白相似,是动脉粥样硬化性心血管疾病发病的独立危险因素和潜在的治疗靶点。前蛋白转换酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)抑制剂可有效降低Lp(a)的循环水平并减少心血管事件风险。本文综合近年来的相关研究,阐述PCSK9抑制剂减少Lp(a)合成和促进其降解的相关机制,分析该领域所面临的挑战和未来的发展方向。     

原发性及狼疮性肾病综合征患者血清PAI-1、Lp(a)水平变化及其临床价值探讨

目的:探讨原发性及狼疮性肾病综合征患者纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)和血清脂蛋白a[Lp(a)]的水平变化及其检测的临床应用价值。方法:选取病理类型明确,临床初诊为肾病综合征的患者138例。其中原发性肾病综合征70例,为PNS组;系统性红斑狼疮继发性肾病综合征患者68例,为LNS组。同期选取本院健康体检正常者64例,为正常对照NC组。全自动生化分析仪检测各组血清Lp(a)和血脂等指标;酶联免疫吸附(Elisa)法测定血清PAI-1水平。结果:1与NC组比较,血清Lp(a)和PAI-1水平在PNS和LNS两组中均显著升高(P0.05),PNS组比LNS组升高更为明显,差异有统计学意义(P0.05);2LP(a)与PAI-1秩相关系数(rs)分析,在PNS组中r_s=0.328,P=0.006,LNS组中r_s=0.439,P=0.006;3二元logistic回归分析表明,LP(a)和PAI-1均是PNS和LNS的危险因素;4ROC曲线分析表明,血清Lp(a)、PAI-1对PNS和LNS诊断的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))分别为0.895、0.874和0.848、0.813,两者联合检测对PNS和LNS诊断的AUC~(ROC)分别为0.947和0.919。结论:血清Lp(a)与PAI-1水平在PNS和LNS患者体内均明显升高,PNS患者升高更为显著;Lp(a)与PAI-1水平在PNS和LNS患者中均显著正相关;LP(a)和PAI-1均是PNS和LNS的危险因素,两者水平的变化与PNS和LNS的发生相关。联合检测Lp(a)与PAI-1水平对PNS和LNS的诊治具有一定的临床应用价值。     

Lp(a)在糖尿病血管并发症中的表达与机制

2型糖尿病患病率逐年上升,糖尿病血管病变是主要的慢性并发症之一,是糖尿病致死率、致残率居高不下的重要原因。脂蛋白a[lipoprotein(a),Lp(a)]是2型糖尿病及血管并发症的有效预测因子与危险因素,通过促进动脉粥样硬化、促进血栓形成、抗血管生成、诱导炎症和氧化应激等机制参与胰岛素抵抗和脂代谢异常的进程,Lp(a)与凝血功能、肾功能等相关指标有明显相关性,有望成为糖尿病血管并发症早期诊断和评估预后的潜在生物学标志物。该文旨在对Lp(a)在糖尿病血管并发症的表达与机制作一综述,以期提高其临床应用价值。     

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响

通过研究重组apo(a)KringleⅣ 10 (KⅣ 10 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]致动脉粥样硬化机理研究提供依据 .将含apo(a)野生型KⅣ 10 ((wild typeKⅣ 10 Trp72 ,wt KⅣ 10 Trp72 )和突变型KⅣ 10 (mutate typeKⅣ 10 Trp72 ,mut KⅣ 10 Arg72 )基因片段重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析柱进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力 .再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothe lialcells ,HUVEC)结合的影响 .结果显示 :在E .coliDH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S 转移酶(glutathioneS transferase ,GST) KⅣ 10 Trp72 (GST wt KⅣ 10 Trp72 )融合蛋白和突变型谷胱甘肽S 转移酶 (GST mut KⅣ 10 Arg72 )融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异 .其中GST wt KⅣ 10 Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 10 Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用 .结果     

急性ST段抬高型心肌梗死患者血清Lp(a)、UA、GGT与冠状动脉病变和PCI术后主要心血管不良事件的关系研究

摘要 目的：探讨急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者血清脂蛋白(a)[Lp(a)]、尿酸（UA）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）与冠状动脉病变和经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后主要心血管不良事件（MACE）的关系。方法：选取2019年1月～2022年7月安徽医科大学第二附属医院心血管内科收治的100例接受PCI术治疗的急性STEMI患者为STEMI组,根据Gensini积分将其分为非重度病变组56例和重度病变组44例,PCI术后随访3个月,根据是否发生MACE分为MACE亚组和非MACE亚组,另选取同期50名冠脉造影检查排除冠心病者为对照组。收集急性STEMI患者的临床资料,并检测血清Lp(a)、UA、GGT水平。分析急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平与Gensini评分的相关性及PCI术后MACE的影响因素。结果：与对照组比较,STEMI组血清Lp(a)、UA、GGT水平升高（P＜0.05）。重度病变组血清Lp(a)、UA、GGT水平高于非重度病变组（P＜0.05）。Spearman相关系数分析显示,急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平与Gensini评分呈正相关（P＜0.05）。随访3个月,100例急性STEMI患者PCI术后MACE发生率为21.00％（21/100）。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、KILLIP心功能分级≥Ⅲ级和Lp(a)、UA、GGT升高为PCI术后MACE的独立危险因素,左心室射血分数（LVEF）升高为独立保护因素（P＜0.05）。结论：急性STEMI患者血清Lp(a)、UA、GGT水平升高,与冠状动脉病变严重程度和PCI术后MACE密切相关,可能成为急性STEMI患者PCI术后MACE的辅助预测指标。     

cDNA cloning of two novel T-superfamily conotoxins from Conus leopardus

The full-length cDNAs of two novel T-superfamily conotoxins,Lp5.1 and Lp5.2,were clonedfrom a vermivorous cone snail Conus leopardus using 3'/5'-rapid amplification of cDNA ends.The cDNA ofLp5.1 encodes a precursor of 65 residues,including a 22-residue signal peptide,a 28-residue propeptide anda 15-residue mature peptide.Lp5.1 is processed at the common signal site -X-Arg- immediately before themature peptide sequences.In the case of Lp5.2,the precursor includes a 25-residue signal peptide anda 43-residue sequence comprising the propeptide and mature peptide,which is probably cleaved to yield a29-residue propeptide and a 14-residue mature toxin.Although these two conotoxins share a similar signalsequence and a conserved disulfide pattern with the known T-superfamily,the pro-region and mature peptidesare of low identity,especially Lp5.2 with an identity as low as 10.7% compared with the reference Mr5.1a.The elucidated cDNAs of these two toxins will facilitate a better understanding of the species distribution,the sequence diversity of T-superfamily conotoxins,the special gene structure and the evolution of thesepeptides.     

老年人冠状动脉狭窄程度与超敏C反应蛋白及脂蛋白(a)水平的研究

目的:探讨老年人冠脉狭窄程度与超敏C反应蛋白(hs-CRP)及脂蛋白(a()LP(a))水平的关系。方法:分析研究260例年龄>60岁的经行冠脉造影检查明确诊断冠心病的患者的冠脉狭窄程度,以及术前空腹采血测定其hs-CRP及LP(a)的水平。结果:①冠脉病变组(186例)与对照组(76例)比较,冠脉病变组Lp(a)和hs-CRP水平分别为(3.30±4.30)mg/L和(146.30±3.21)mg/L,对照组分别为(1.32±2.32)mg/L和(40.26±2.44)mg/L,二者存在差别(P<0.01),差别有统计学意义。②各个亚组病与对照组比较各亚组(单支病变组、双支病变组、三支病变组)hs-CRP和LP(a)与对照组相比较存在明显差异,单支病变组51例,双支病变组72例,三支病变组63例。单支病变组hs-CRP和Lp(a)水平分别为(2.11±1.31)mg/L和(41.58±2.32)mg/L,双支病变组分别为(2.97±2.11)mg/L和(47.12±1.21)mg/L,三支病变组分别为(3.42±2.16)mg/L和(60.13±3.54)mg/L,P<0.05,差别有统计学意义,且随着病变支数的增加,hs-CRP和LP(a)呈增高趋势。并行单因素相关分析,hs-CRP和LP(a)与冠脉病变支数有正相关关系(P<0.05)。③男性病变组(107例)和女性病变组(79例),男性组hs-CRP和LP(a)水平分别为(1.87±2.11)mg/L和(43.60±2.18)mg/L,女性病变组hs-CRP和LP(a)水平分别为(3.33±1.70)mg/L和(50.77±2.47)mg/L,二者存在差别,P>0.05,差别无统计学意义。结论:老年人冠脉狭窄程度与血清Lp(a)和hs-CRP水平变密切相关,呈正相关,老年男性冠心病患者与女性冠心病患者相比,血清Lp(a)和hs-CRP水平无显著差异。     

松龄血脉康胶囊联合立普妥对老年高血压患者血清Fibulin-3、Lp(a)、MCP-1水平的影响

目的:研究松龄血脉康胶囊联合立普妥对老年高血压患者血清细胞外基质蛋白-3 (Fibulin-3)、脂蛋白a (Lipoprotein(a),Lp(a))、单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平的影响。方法:选择2015年04月至2017年12月在我院治疗的老年高血压患者72例,按照随机数字表法为观察组和对照组,对照组采用立普妥口服治疗,观察组在对照组的基础上联用松龄血脉康胶囊口服治疗,观察和比较两组临床治疗效果,治疗前后血脂、动态血压及Fibulin-3、Lp(a)、MCP-1水平的变化情况。结果:治疗后,观察组总有效率为88.89%,明显高于对照组(69.44%,P0.05);观察组血清血清总胆固醇(Serum total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(nonesterified fatty acid,FFA)、Lp(a)、MCP-1等水平均显著低于对照组(P0.05),而血清HDL-C、Fibulin-3水平明显高于对照组(P0.05);治疗后,观察组动态血压水平降低范围较对照组更明显(P0.05);观察组患者生活愉快、心理健康及认知功能等方面评分均显著高于对照组(P0.05)。结论:松龄血脉康胶囊联合立普妥治疗老年高血压患者的临床疗效显著优于单用立普妥口服治疗,其能更有效维持动态血压的正常水平,且显著改善Fibulin-3、Lp(a)、MCP-1水平,降脂效果良好。     

不同性别间颈动脉粥样硬化相关危险因素差异的研究

目的:探讨中年人群中不同性别间颈动脉粥样硬化相关危险因素的差异。方法:将104例中年颈动脉粥样硬化患者作为研究对象,其中男53例,女51例,比较两组体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、空腹血糖(FBG)、血尿酸(UA)、超敏CRP(hs-CRP)的差异。结果:男性组BMI、TG、UA较女性组高,HDL-C、Lp(a)较女性组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:有些颈动脉粥样硬化相关危险因素在不同性别中年人群中具有差异。     

脂代谢的测定对老年2型糖尿病患者临床意义

目的探讨老年2型糖尿病与血脂、载脂蛋白、脂蛋白(a)之间的关系及其临床测定的意义。方法对97例老年2型糖尿病患者及65例老年对照组进行了血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)及脂蛋白(a)[Lp(a)]的测定。结果老年2型糖尿病患者血清TC、TG、LDL-C、ApoB及Lp(a)水平均显著高于老年对照组。而血清HDL-C和ApoAI水平老年2型糖尿病组显著低于老年对照组。结论老年2型糖尿病患者由于体内胰岛素相对不足及胰岛素抵抗,使血脂、载脂蛋白、脂蛋白浓度和组成成分发生变化及功能发生异常,从而促进动脉粥样硬化,并伴随着血管并发症的发生。因此,在对老年糖尿病并发症的预防和控制上,应在控制血糖的基础上减少脂肪的摄入,以降低高脂血症的发生,从而降低血管并发症的发生。