印记基因PEG10 在葡萄胎组织中的表达以及意义

目的:通过免疫组化方法,探讨印记基因PEG10在葡萄胎组织中的表达及其在早期鉴别葡萄胎妊娠中的应用价值。方法:选取经病理组织学诊断为完全性葡萄胎、部分性葡萄胎、正常早孕、难免流产的标本共计156例,采用免疫组织化学技术检测PEG10在其中的表达,研究遗传印记基因PEG10在葡萄胎妊娠以及非葡萄胎妊娠中的表达。结果:PEG10在四组蜕膜组织中均有表达,在难免流产组呈弱阳性表达,在正常早孕组呈弱阳性和中度阳性表达,在部分性葡萄胎组中呈中度阳性和强阳性表达,在完全性葡萄胎组中呈强阳性表达。PEG10在葡萄胎妊娠组表达明显增多于非葡萄胎妊娠组,两组比较具有显著性差异(P0.01),部分性葡萄胎组表达增多于难免流产组,两组比较差异有显著性(P0.05)。结论:遗传印记基因PEG10在葡萄胎组织中的表达明显高于正常早期妊娠和难免流产组,PEG10基因表达上调与葡萄胎的发生可能有重要关系,是否可将其用于病理诊断鉴别困难时的辅助手段。     

难免流产蜕膜组织遗传印记基因PEG10的表达

采用半定量逆转录聚合酶反应(RT-PCR)、原位杂交、免疫印记(Western blot)及免疫组织化学技术检测了36例难免流产患者蜕膜组织PEG10 (Paternally expressed gene 10) mRNA及蛋白的表达与分布, 并以36例同期正常早孕妇女为对照, 研究遗传印记基因在难免流产蜕膜组织中的表达, 探讨其在自然流产中的作用。RT-PCR结果显示, PEG10在两组蜕膜组织中均有表达, 正常妊娠组平均表达水平为0.5994±0.049, 难免流产组为0.1783±0.037, 两组比较具有显著性差异(P<0.05)。原位杂交、免疫组化及Western blot分析也显示PEG10的表达规律与RT-PCR结果相吻合。研究结果表明, 遗传印记基因PEG10维持一定水平的表达对早期胚胎发育和正常妊娠的维持有重要意义, 而其表达下调可能是导致难免流产的原因之一。     

PEG10基因转染的树突状细胞疫苗对肝癌细胞的杀伤实验研究

目的:研究印记基因PEG10修饰的树突状细胞(DC)疫苗对肝癌细胞的杀伤效应,为肝癌的治疗提供新的策略。方法:将重组PEG10腺病毒rAd-PEG10感染HLA-A2阳性的人外周血来源的DC,制备PEG10基因修饰的DC疫苗,并在体外刺激HLA-A2阳性限制性的单个核细胞,酶联免疫斑点试验(Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT)和标准⁵¹Cr释放试验分别检测PEG10腺病毒感染的DC所诱导的特异性CTL活性,并检测对HLA-A2阳性的HepG2肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功制备了PEG10基因修饰的树突状细胞(DC)疫苗,并在体外能有效诱导抗原特异性CTL效应,对HepG2肝癌细胞有明显的杀伤毒性。结论:PEG10基因修饰的树突状细胞能有效激发出特异性CTL应答,并对HepG2肝癌细胞有明显的杀伤毒性,为肝癌治疗提供了新思路。     

外源GUS基因在PEG介导的花椰菜原生质体中的瞬间表达

为了将外源基因导入花椰菜原生质体获昨转基因植株,本文研究了ＰＥＧ介导的外源基因在花椰菜一上胚轴原生质体中的瞬间表达。（１）２０％ＰＥＧ将质粒ｐＢＩ２２１导入原生质体后ＧＵＳ表达比１３％ＰＥＧ导入的高,但易造成原生体损伤。（２）热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。（３）原生质体状况对表达有重要影响,５ｄ龄下胚轴原生质体比８ｄ龄的表达强。（４）不同质粒及启动子表达强度不同,质粒ｐ     

HOXD10和P53蛋白在肝细胞癌组织中表达及其临床病理学意义

目的:探讨同源异型盒基因HOXD10和P53蛋白在原发性肝细胞癌hepatocellular carcinoma,HCC组织中的表达及其临床病理学意义。方法:采用免疫组化法检测62例HCC及癌旁肝组织、20例肝脏良性病变组织中HOXD10、P53蛋白的表达,并分析HCC组织中HOXD10、P53蛋白的表达与HCC患者临床病理特征的关系。结果:低分化HCC组织中HOXD10蛋白的表达显著低于中、高分化HCC、癌旁及良性病变肝组织(P0.05)。而低分化HCC组织中P53的表达显著高于中高分化HCC组织(P0.05)。HCC组织中HOXD10蛋白的表达与脉管内癌栓呈负相关(r=-0.299,P=0.026),而HCC组织中HIXD10、P53蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、多结节、周边肝硬化均无显著相关性(P0.05)。结论:HOXD10的低表达和P53的高表达与低分化HCC密切相关,可能作为HCC治疗和预后预测的参考指标。     

转基因克隆牛胎盘中印迹基因PEG10的DNA甲基化水平

低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死亡是否与其胎盘中印迹基因的甲基化的重编程程度相关,文章通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)和亚硫酸氢盐联合限制性内切酶分析法(Combined bisulfite restriction analysis,COBRA),对印迹基因PEG10在围产期死亡且存在发育缺陷的转基因克隆牛的胎盘(死亡组)和存活的转基因克隆牛的胎盘(存活组)与正常对照牛胎盘(对照组)的DNA甲基化水平进行了详细的比较。结果发现,与对照组相比,PEG10基因在死亡组上表现出异常的超甲基化水平,而存活组与对照组相比无显著性差异。研究结果显示,胎盘中印迹基因的DNA甲基化表观重编程不彻底可能是导致转基因克隆牛发育异常进而死亡的主要原因之一。     

CRISPR-Cas9功能基因筛选技术在肝癌研究中的应用

肝癌是全球第四大致死肿瘤,对人类健康构成重大威胁。进展期肝癌缺乏有效靶点,以及目前标准疗法治疗效果有待进一步提高,是肝癌研究领域亟待解决的关键科学问题之一。CRISPR-Cas9功能基因筛选技术促进了肝癌生物学研究的发展,借助该技术,研究者发现了诸多参与肿瘤发生发展的靶基因。此外,无偏倚的CRISPR-Cas9功能基因筛选为探索耐药驱动机制和确定潜在治疗新靶点提供了基础。该文将系统阐述CRISPR-Cas9高通量功能基因筛选技术在肝癌研究领域取得的进展和突破,这些研究将有助于加深人们对肝癌的理解及开辟新的潜在治疗方案。     

HSP70和JNK信号转导通路在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨HSP70和JNK信号转导通路在肝癌组织中的作用,以及它们之间的关系。方法用SP免疫组化方法检测62例肝癌组织中HSP70、JNK1、JNK2和c-Jun的表达。应用SSPS统计软件进行数据处理。结果(1)HSP70蛋白1级染色16例(25.8%),2级染色25例(40.3%),3级染色21例(33.9%)。JNK1、JNK2和c-Jun蛋白低表达分别为40例(64.5%)、33例(53.2%)和36例(58.1%),高表达分别为22例(35.5%)、29例(46.8%)和26例(41.9%)。(2)HSP70蛋白表达与肝癌分化程度呈正相关(r=0.449,P=0.000),JNK1、JNK2和c-Jun蛋白表达均与肝癌分化程度呈负相关(r=-0.351,P=0.005;r=-0.303,P=0.017;r=-0.302,P=0.017)。(3)HSP70蛋白的表达与JNK1(r=-0.385,P=0.002)、JNK2(r=-0.309,P=0.015)和c-Jun(r=-0.302,P=0.017)蛋白的表达呈负相关。(4)Kaplan-Meier法生存分析发现HSP70和JNK1蛋白的表达与术后无复发生存时间密切相关(P<0.01)。(5)多因素Cox比例风险模型分析,结果HSP70与预后明显相关(P=0.004)。结论HSP70蛋白与肝癌的进展和预后密切相关。JNK信号转导通路与肝癌的分化有关。HSP70可能通过抑制JNK信号传导途径,而阻断由其介导的肝癌细胞的凋亡,提高了肝癌细胞在应激状态下的稳定性。     

HPX基因在肝癌中表达及与肿瘤细胞增殖的关系

[目的]探究HPX基因在肝细胞癌中的表达水平,阐述其表达水平与患者预后的关系以及其表达对肝癌细胞增殖的影响.[方法]利用Oncomine数据集探索HPX基因在肝癌肿瘤组织及癌旁正常组织的表达差异;用Kaplan-Meier法分析HPX表达水平对肝癌患者总生存期及无复发生存期的影响;实时荧光定量PCR法检测正常肝细胞和肝...     

MAPK和JAK—STAT途径中酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中的表达及意义

目的观察MAPK途径和JAK—STAT途径中重要酪氨酸蛋白激酶ERK、P38、C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达及其相互关系,探讨蛋白激酶表达与肝癌患者临床病理特征之间的关系。方法收集原发性肝癌手术切除标本30例,制作组织芯片,酪氨酸蛋白激酶在不同组织中的表达检测采用免疫组化SP法。结果ERK、P38、C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达平均光密度值显著高于肝硬化组（P〈0．01）。ERK与C-Jun、JAK、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达呈显著正相关,与P38呈显著负相关。JAK的过度表达与肝癌组织的分化程度有关,在低分化肝癌组织中表达率显著高于高中分化肝癌组织。结论MAPK和JAK—STAT通路的过度活化在肝癌发生发展过程中起重要作用,细胞信号转导系统失去正常的协调平衡可能是导致肿瘤发生的重要原因。     

肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的表达

为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是：在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象,表达的人源化单链抗体提供了免疫原性评价及临床应用的基础。     

凋亡诱导因子AIF在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨凋亡诱导因子（AIF）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学Envision法检测75例肝细胞癌组织及其相应癌旁肝组织、30例正常肝组织中AIF的表达,并分析其表达与肝细胞癌临床病理因素的相关性。结果：肝癌组织中AIF阳性表达率明显高于癌旁组织及正常肝组织,差异均具有统计学意义（P〈0.01）。AIF在肝癌组织中的表达仅与病理分级密切相关（P〈0.01）,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、肿瘤数目、有无肿瘤包膜和有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓均无关。结论：AIF表达可能参与了肝癌的发生和发展过程。     

外源GUS基因在PEG介导的花椰菜原生质体中的瞬间表达

为了将外源基因导入花椰菜原生质体获得转基因植株,本文研究了ＰＥＧ介导的外源基因在花椰菜下胚轴原生质体中的瞬间表达。（１）２０％ＰＥＧ将质粒ｐＢＩ２２１导入原生质体后ＧＵＳ表达比１３％ＰＥＧ导入的高,但易造成原生质体损伤。（２）热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。（３）原生质体状况对表达有重要影响,５ｄ龄下胚轴原生质体比８ｄ龄的表达强。（４）不同质粒及启动子表达强度不同。质粒ｐＫＩＷＩ１０１比ｐＢＩ２２１表达强３倍左右。     

大鼠白介素10真核表达质粒在大鼠体内外肝细胞中的表达及影响

目的探讨体外重组的大鼠白介素10（rIL-10）真核表达质粒能否在大鼠体内外肝细胞中表达及表达产物对肝细胞的影响。方法通过受体介导的脂介体转染法及尾静脉大容量注射法将rIL-10真核表达质粒分别转入大鼠BRL细胞及体内大鼠肝细胞中,采用RT—PCR法、ELISA法和免疫组织化学法检测体内外肝细胞rIL-10的表达情况,MTT法及流式细胞术检测rIL-10真核表达质粒转染对BRL细胞增殖与凋亡的影响。结果转染rIL-10真核表达质粒的BRL细胞及大鼠肝组织高表达rlL-10基因,BRL细胞培养上清与大鼠血清中rIL-10浓度分别为（12．78±O．94）ng／ml,（61．68±3．60）．g／ml。MTT法及流式细胞术显示rIL-10的表达对肝细胞有-定的保护作用。结论rIL-10真核表达质粒可在大鼠体内外肝细胞中表达并对肝细胞有-定的保护作用。     

IGFBP-rP_1在原发性肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth factor binding proteins-related protein 1,IGFBP-rP1)在原发性肝细胞肝癌(human hepatocellar carcinomas,HCC)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学法检测43例HCC、32例癌旁肝组织及9例正常肝组织IGFBP-rP1的表达。结果IGFBP-rP1在HCC的表达显著低于癌旁肝组织(P0.01)及正常肝组织(P0.01),但正常肝组织和癌旁肝组织IGFBP-rP1的表达无明显差异(P0.05)。IGFBP-rP1的表达强度与HCC的恶性生物学行为关系密切。结论IGFBP-rP1抑制HCC的进展,IGFBP-rP1表达下调在HCC的进展中起重要作用。     

凋亡诱导因子AIF在肝癌组织中的表达及临床意义*

目的:探讨凋亡诱导因子(AIF)在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测75例肝细胞癌组织及其相应癌旁肝组织、30例正常肝组织中AIF的表达,并分析其表达与肝细胞癌临床病理因素的相关性。结果:肝癌组织中AIF阳性表达率明显高于癌旁组织及正常肝组织,差异均具有统计学意义(P<0.01)。AIF在肝癌组织中的表达仅与病理分级密切相关(P<0.01),而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、肿瘤数目、有无肿瘤包膜和有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓均无关。结论:AIF表达可能参与了肝癌的发生和发展过程。     

DNAJC10基因在鼻咽癌中的表达及表达下调机制的研究

运用RT-PCR检测候选抑瘤基因DNAJC10在鼻咽癌组织中的表达,运用甲基化特异性PCR(MSPCR)技术、LOH和测序等技术分别检测DNAJC10基因在鼻咽癌组织中的甲基化状况、LOH和启动子突变情况.结果表明,DNAJC10基因在肿瘤组织中较对照慢性鼻咽炎组织表达明显下调(P<0.05).DNAJC10在鼻咽癌中不表现高甲基化,其LOH的缺失率为6.25%,突变率为66.7%.因此,DNAJC10基因的表达下调主要是其遗传改变(LOH和突变)所致.     

微小RNA在降低HCC分子靶向药物耐药性中的作用

肝细胞癌（HCC）是原发性肝癌的主要组织学类型,大多数患者初诊时即为晚期,生存率较低,一般为5年时间。分子靶向治疗作为晚期HCC患者的重要治疗手段,大部分HCC患者都会因产生不同程度的耐药性而导致肿瘤复发或转移。特异微小RNA通过影响多类信号传导通路参与HCC靶向药耐药的调控,已成为肿瘤及耐药机制研究的热点之一。文章对微小RNA调控HCC耐药性的最新研究进行了综述,以期为解决HCC分子靶向药物耐药性问题找到新的生物标志物和治疗靶点。     

CD68、CD133和TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义

目的研究CD68^+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、CD133^+肿瘤干细胞(CSCs)及TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义。方法选取2014年1月至2016年1月在中国医学科学院肿瘤医院综合科进行手术治疗的89例肝癌患者为研究对象。收集患者手术标本,进行免疫组化染色(IHC),采用半定量积分法对免疫组化分析正常、癌及癌旁组织中CD68^+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、CD133^+肿瘤干细胞(CSCs)及TGF-β表达情况,结合随访资料对其意义进行分析,其表达水平与临床病例资料之间关系采用c^2检验或Fisher确切概率法检验或Wilcoxon秩和检验,相关性分析采用Spearman检验。结果 CD68^+TAMs细胞在癌组织中阳性率为59.55%,癌旁组织为37.08%,差异具有统计学意义(Z=-3.182,P=0.001);CD133^+细胞在癌组织中阳性率为52.81%,癌旁组织中为57.30%,表达差异无统计学意义(Z=-0.558,P=0.557);TGF-β在癌组织阳性率为70.79%,癌旁组织中为56.18%,差异具有统计学意义(Z=-2.306,P=0.021)。CD68、CD133、TGF-β表达水平与患者肿瘤分化程度及淋巴结转移情况密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β表达水平与Child-Pugh分级相关,差异具有统计学意义(c^2=10.930,P=0.001)。HCC癌组织中CD68与TGF-β表达,CD133与TGF-β表达之间存在正相关关系,相关系数分别为(r=0.579、0.611,P=0.026、0.020)。Kaplan-Meier生存曲线分析可知,3种分子均无表达的患者中位生存时间最长,为23.4个月,3种分子均有表达的患者中位生存期最短,仅为6.3个月(P=0.021)。结论 CD68^+TAMs细胞与CD133^+CSCs细胞之间存在相关性,二者之间具体机制有待进一步研究,以便为肝细胞癌(HCC)治疗提供有力依据。     

基于大数据分析CAP2基因在肝细胞癌中的表达意义

[目的]研究CAP2基因在肝细胞癌中的表达及临床意义.[方法]对TCGA和Oncomine数据库中CAP2进行检索,并对所获取的数据二次分析.[结果]Oncomine数据库中共收集了33项(高表达14项、低表达19项)CAP2在肿瘤组织与正常对照组织中表达差异具有统计学意义的结果.肝细胞癌中CAP2高表达有5项,低表达...