不同地域来源乳粉及乳制品中乳铁蛋白含量分析

目的：考察不同地域来源的乳产品中乳铁蛋白的含量,为指导生产企业和消费者合理选择乳制品提供科学依据,也为国家市场监管部门制定乳制品中乳铁蛋白最低限量国家标准提供数据基础。方法：采用质谱绝对定量方法对103批次国内外乳原料及乳制品中乳铁蛋白含量进行分析,通过合成特异性标准多肽,进行内标法定量。结果：国内外乳原料、乳粉和液态乳中乳铁蛋白含量平均值分别为63.0、54.6、6.4mg/100g。中国国产乳原料、乳粉和液态乳中乳铁蛋白含量平均值分别为67.8、58.6、8.1mg/100g,均高于本次分析国内外样本量的平均值。另外,本研究还发现了不同地域来源的同类型乳产品中乳铁蛋白含量相差悬殊,同品牌的相似产品也存在较大差异。结论：不同地域来源乳粉及乳制品中乳铁蛋白含量差异较大,生产企业及消费者应合理选择乳制品摄入,未来,市场监管部门应尽快制定乳粉产品中乳铁蛋白最低限量的国家新标准。     

桂皮醛亚微乳注射剂中桂皮醛的含量测定研究

目的:建立桂皮醛亚微乳注射剂中桂皮醛含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法,按照固定相为色谱柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈:0.5%冰乙酸水溶液(60:40),检测波长为288 nm,流速为1.0 m L·min~(-1),柱温为25℃,进样量为10μL的进样条件,测定桂皮醛亚微乳注射剂中桂皮醛的含量。结果:桂皮醛在5~100μg·mL~(-1)浓度范围内呈良好的线性关系,标准曲线方程为Y=1703 X-1996(r~2=0.999,n=6)。在低、中、高三个浓度下,一天内连续3次和连续3天测定样品,测定的RSD值均小于2.0%,精密度良好。加速试验中,在温度30℃,相对湿度60%的条件下放置6个月,样品测定结果与0天相比无变化。本实验中3批桂皮醛亚微乳注射剂中桂皮醛含量的均值为19.89μg·mL~(-1),平均回收率为100.98%,RSD为1.45%。结论:本方法操作简便、快速准确,稳定性高,系统重现性良好可有效控制桂皮醛亚微乳注射剂中有效成分含量。     

粪便乳铁蛋白评价溃疡性结肠炎活动性的临床价值

目的:探讨粪便乳铁蛋白作为溃疡性结肠炎活动性标志物的可能性。方法:选取溃疡性结肠炎患者42例,对照组炎症性肠病患者20例,采用酶联免疫吸附试验法测定粪便乳铁蛋白的含量,同时测定实验室指标白细胞计数、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CPR)的水平。结果:1)溃疡性结肠炎组活动期粪便乳铁蛋白的含量显著高于缓解期和对照组,且活动期组轻、中、重度三级之间差异有统计学意义;粪便乳铁蛋白的含量随着内镜的分级程度的增高而增高,但与溃疡性结肠炎内镜分级之间相关性不明显r=0.4199(P=0.0517)。2)粪便乳铁蛋白对判断溃疡性结肠炎的活动性的特异性和敏感性显著高于外周血白细胞计数、C反应蛋白、红细胞沉降率。结论:粪便乳铁蛋白对溃疡性结肠炎活动性的判定价值显著高于白细胞计数、C反应蛋白、红细胞沉降率,但是否可以作为理想的替代肠镜的炎症性标志物还有待进一步的大样本研究。     

运用HPLC-MS对鸦胆子油自微乳给药系统肠吸收的研究

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法检测油酸和亚油酸含量的方法,从而对鸦胆子油自微乳给药系统中鸦胆子油的肠吸收进行研究.方法:以甲醇-水(95∶5 v/v)为流动相,流速为0.4 mL/min,柱温为35℃作为高效液相色谱的检测条件.利用大鼠小肠膜建立体外药物扩散体系研究鸦胆子油的肠吸收特性.结果:油酸和亚油酸的保留时间分别为10.46± 0.02和8.55±0.01 min,线性范围分别为0.50～50.0 ng/mL和5.06～101.2 ng/mL,平均绝对回收率分别为97.49±3.11％和105.76± 3.13％.日间和日内精密度都小于5％.在肠吸收实验中,鸦胆子油自微乳体系中测得油酸和亚油酸含量是单独给予鸦胆子油测得量的2.8和4.1倍.结论:该方法高效、灵敏、选择性高,可以用于鸦胆子油及鸦胆子油自微乳肠吸收中油酸和亚油酸的质量测定.     

猪乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中的表达及抑菌活性比较

为了获得优化的猪乳铁蛋白乳杆菌表达系统,并比较重组猪乳铁蛋白的抑菌活性,根据乳杆菌使用密码子的偏嗜性优化合成猪乳铁蛋白成熟肽编码序列,将其克隆到乳杆菌表达载体pPG612.1的XhoⅠ/BamHⅠ位点,获得了plf乳杆菌表达载体质粒pPG612.1-plf。将获得的重组质粒分别电转化入干酪乳杆菌ATCC393、戊糖乳杆菌KLDS1.0413、植物乳杆菌KLDS1.0344和副干酪乳杆菌KLDS1.0652细胞内,获得4种表达猪乳铁蛋白的重组乳杆菌。经木糖诱导,通过Western blotting和激光共聚焦检测重组猪乳铁蛋白的表达,用ELISA方法检测和比较4种重组菌上清中表达猪乳铁蛋白的量,并用琼脂孔穴扩散抑菌法检测4种重组乳杆菌表达乳铁蛋白的抑菌活性。结果表明,乳铁蛋白在4种重组乳杆菌中均得到正确表达,其产物分子量约73 kDa,重组干酪乳杆菌、重组戊糖乳杆菌、重组植物乳杆菌和重组副干酪乳杆菌的重组猪乳铁蛋白表达量分别为9.6μg/mL、10.8μg/mL、12.5μg/mL、9.9μg/mL。重组猪乳铁蛋白对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌和李氏杆菌均有一定的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,且4种重组乳杆菌中重组植物乳杆菌表达产物的抑菌效果优于其他重组菌的表达产物。结果表明在4种乳杆菌中重组猪乳铁蛋白的最佳表达系统为植物乳杆菌,该结果为猪乳铁蛋白的乳杆菌表达系统进一步开发与应用奠定了基础。     

高效液相色谱法测定细菌发酵液中的糖、甘油和乙醇的研究

目的：建立一种用高效液相色谱快速测定细菌发酵液中糖、甘油和乙醇的方法。方法：酌情取细菌发酵液样品适量(1—9mL)于10mL容量瓶中,加入10mg/mL的甘露醇内标物1．0mL,用水定容到刻度,取2mL用4．5μm滤膜过滤,进样2μL分析,糖、甘油和乙醇以Waters Suger—Park—1钙型阳离子交换柱为固定相,0．05g／L EDTA钙钠水溶液为流动相分离,示差折光仪为检测器检测测定。结果：一次进样可同时测定细菌发酵液样品中的糖、甘油和乙醇;方法RDS在0．52％-0．85％之间,标准回收率在99—102％之间,结果满意。结论：该方法简便、快速、结果可靠,为发酵法生产甘油过程中的质量监控提供了方法。     

乳与乳制品、婴幼儿配方食品中茶多酚、咖啡因的测定方法研究

本文研究了测定乳与乳制品、婴幼儿配方食品中EC、ECG、EGC、EGCG、C、GA以及咖啡因的方法。本文探讨了样品提取的方法、色谱条件的选择，考察了该方法的专属性、稳定性、线性关系、检出限与定量限、回收率与精密度。该方法操作简便、灵敏、准确，扩大了检测范围。     

HPLC法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量

建立了高效液相色谱法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖的含量。样品经离心除去多糖后,采用阳离子交换柱分离,外标法定量分析。该法线性相关系数大于0.9999,回收率为98.8%,成品测定的CV值为1.2%(<2%),该法定量准确,重复性好,适于对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行快速检测。     

用高效液相色谱法测定粗制核黄素中的抗坏血酸

R.C.Williams用高效液相色谱法(阴离子交换剂和C_(1(?))反相)测定抗坏血酸维生素C。但本文采用阳离子交换柱,以pH5的磷酸盐稀溶液作淋洗液。用紫外检测器检测,可在5分钟内完成分离与测定,其回收率为95±8.7％,且无杂峰,因此优于S.P.Sood等人的色谱法。用本法已测定五批粗制核黄素中微量抗坏血酸,结果与比色法基本一致,但本法较比色法快速、简便。仪器日立635A型高效液相色谱仪,检测器为紫外单波长分光光度计;0.56记录仪,834型数字处理机;不锈钢柱内径为4毫米,长为500毫米;填充剂     

乳铁蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的：通过对乳铁蛋白生物学特性的研究,分析其在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法：通过免疫组化方法测定10例非肿瘤脑组织和46例胶质瘤（其中低级别胶质瘤27例（I级和II级）和高级别胶质瘤19例（III级和Ⅳ级）中乳铁蛋白的表达情况并分析二者的相关性。用RT—PCR技术及Westem—blot方法测定非肿瘤脑组织、低级别组胶质瘤和高级别胶质瘤组乳铁蛋白的表达量并分析二者的相关性。结果：乳铁蛋白在非肿瘤脑组织及不同级别胶质瘤中的表达情况不同,其在低级别胶质瘤中有表达,略低于非肿瘤脑组织;而在高级别胶质瘤中表达显著减少或者表达不明显,明显低于低级别胶质瘤和非肿瘤脑组织（免疫组化、RT．PCR及Western．Blot的P值分别为P=0．001、P=0．003、P=0．004）。结论：乳铁蛋白在非肿瘤脑组织和不同级别胶质瘤中的表达有差异,提示乳铁蛋白参与了人脑胶质瘤发生与发展的过程。高级别胶质瘤的高度恶性和高侵袭性可能与乳铁蛋白表达的下调从而丧失对肿瘤细胞的抑制作用相关。     

应用PMA-qPCR方法快速准确检测发酵乳制品中副干酪乳杆菌活菌的研究

目的 建立快速、准确检测发酵乳制品中副干酪乳杆菌活菌的方法.方法 发酵乳制品中副干酪乳杆菌先经PMA处理后,采用沸水浴的方法提取副干酪乳杆菌基因组,然后通过qPCR方法检测发酵乳制品中的活菌.结果 副干酪乳杆菌经90℃处理6 min,即为膜损伤菌:PMA能够抑制107 CFU/mL死菌DNA的扩增,而不影响活菌DNA的扩增;PMA-qPCR能够准确检测到样品中活菌.结论 建立了一种快速、准确的方法检测发酵乳制品中的副干酪乳杆菌活菌.     

云南省乳品中乳杆菌的鉴定

从云南省各种乳制品的88份样品中,共分离鉴定出29种、217株乳杆菌。检查了我省乳制品及其自然发酵剂中乳杆菌的种类,其中许多菌株产酸、产香等性能良好。有一定开发应用价值。     

圈养大熊猫乳中氨基酸组成的研究

为了认识大熊猫乳中氨基酸的组成特点,将大熊猫乳经6 mol/L盐酸水解后,用高效液相色谱测定了不同泌乳阶段的20个乳样的氨基酸组成.结果显示,大熊猫初乳中含量最高的氨基酸是谷氨酸,约为5.2 g/L;常乳和干乳期乳腺分泌物中含量最高的是脯氨酸;总氨基酸含量在泌乳2～10 d内变化不明显,平均值约为34 g/L;干乳期乳中氨基酸含量变化显著.     

重组人乳铁蛋白对食管癌细胞体外增殖的影响

目的:研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对体外培养的食管癌细胞的生长特性的影响.方法:MTT法评定rhLF对人食管癌细胞Eca-109、人肝脏细胞L0-2、CHO中国昌鼠细胞系的生长抑制作用.结果:重组人乳铁蛋白对人食管癌细胞系Eca-109的增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对正常细胞无抑制作用.结论:重组人乳铁蛋白作为新的抗肿瘤化学治疗荆,可以抑制食管癌细胞Eca-109的增殖.     

高效液相色谱法测定1,25- 二羟基维生素D2纳米乳注射液的含量

目的:建立高效液相色谱法测定1,25-二羟基维生素D_2纳米乳注射液含量。方法:采用C18-STⅡ色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水=85:15(V/V);流速:1.5 m L/min;检测波长:274 nm;温度:室温;进样量:200μL。结果:该方法专属性好,平均回收率99.96%(RSD为0.63%,n=9);溶液在冷藏(2~6℃)保存24 h稳定(RSD=0.98%,n=7);在0.06μg/m L~4.0μg/m L范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=201098 X-8412.5(R2=0.9998,n=9)。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高、专属性强,可用于该注射液的含量测定。     

高效液相色谱法测定乳清蛋白中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白及其改性降敏

牛乳过敏是由牛乳中的致敏蛋白引起的一种不良反应,而乳清蛋白是从牛奶中分离的高营养价值的蛋白。本研究中,笔者建立了一种高效液相色谱技术定量检测乳清蛋白中主要致敏蛋白α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的方法;与现行标准(T/TDSTIA 007—2019)相比,本方法采用应用更广泛的Sepax-C8(4. 6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以0. 1%的三氟乙酸水溶液(A)和0. 1%的三氟乙酸乙腈溶液(B)作为流动相进行梯度洗脱,色谱柱在温度28℃、波长280 nm检测条件下对目标蛋白进行分离检测。定量分析结果表明,致敏蛋白在0. 125～2. 000 mg/m L范围内与蛋白峰面积线性关系良好(R2 0. 99),蛋白平均回收率为92%～96%,α-乳白蛋白和β-乳球蛋白检出限分别为0. 078和0. 090 mg/m L。该检测方法重复性好,可用于α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的定量分析测定。此外,考察了胰蛋白酶对2种致敏蛋白改性的影响,采用智能可视化优化方法预测出酶解最优条件,结果表明在45℃下加入2000 U/g的胰蛋白酶水解30 min后,水解率高达78. 9%,2种致敏蛋白含量占牛乳总蛋白的22. 7%,大大降低了乳制品中的致敏蛋白含量。     

阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体的电荷异质性

目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWCX-10"弱阳离子交换柱,利用盐梯度洗脱的方法依次洗脱出m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体及碱性电荷变异体;对方法的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性进行验证。结果阳离子交换高效液相色谱分析重组人源化抗CD52 m Ab各电荷变异体的保留时间在14~21 min之间,其中酸性电荷变异体的保留时间在14~17 min,中性电荷变异体的保留时间在17~18 min,碱性电荷变异体的保留时间在18~21 min之间。专属性验证显示空白辅料对照色谱图在样品出峰位置无干扰。线性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体相关系数R2均0.99。准确性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体回收率分别为99.3%~99.9%、99.8%~100.4%和99.3%~99.7%。仪器重复性、样品重复性和中间精密度验证中,各电荷变异体的RSD均5%。耐用性验证中,流动相p H在8.0±0.1、流动相中盐浓度为100 mmol/L±5 mmol/L、柱温在(30±2)℃变化时各电荷变异体的RSD均5%。结论阳离子交换高效液相色谱可以有效分离重组人源化抗CD52 m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体,且该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性。     

反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸

用不同浓度的乙醇溶液提取烟样中的游离氨基酸 ,结果显示 ,存在最佳的乙醇溶液浓度 ,使烟样中被提取的游离氨基酸总量最大 ;对比了活性炭、乙醚、5 %磺基水杨酸、阳离子交换柱的纯化效果 ,发现阳离子交换柱的纯化效果较其它三种试剂要好。在提取和纯化之后 ,采用OPA、FMOC联合在线衍生反相高效液相色谱法测定了烟样中的游离氨基酸 ,该方法使烟样中的氨基酸和亚氨基酸能被同时测定 ,并且分析方法的重现性和回收率均令人满意。最后用该方法对云南B2 F98(上部、橘黄、二等烟叶 ,98年产 )烟叶中的游离氨基酸进行了测定 ,有 15种氨基酸被测出 ,其中Pro含量最高 ,约占总量的 2 5 % ,Thr含量最低 ,约占总量的 1%。     

高效液相色谱法测定毛豆中吡虫啉残留量

采用高效液相色谱法测定毛豆中吡虫啉农药残留。试样用二氯甲烷超声波提取,中性氧化铝柱净化,石油醚去除脂类杂质,以0.2%冰乙酸水溶液-乙腈(70:30,体积比)为流动相,配备Agilent TC-c18柱、高效液相色谱紫外检测器检测(HPLC-UV),外标法定量。实验表明,毛豆样品中吡虫啉添加回收率为84.0%~102.8%,相对标准偏差(n=6)为6.8%~10.9%,样品中吡虫啉最低检测浓度为0.003 mg/kg。     

高压液相荧光检测法检测血浆同型半胱氨酸

目的:建立高压液相荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的方法.方法:应用Symmetry ShieldTMRP18色谱柱,0.08 mol/L醋酸钠1%甲醇为流动相,与巯基特异结合的荧光物质SBD-F衍生巯基来检测血浆中的同型半胱氨酸浓度.结果:该法的平均回收率为95.8～100.8%,相对标准差为1.2～2.0%.结论:本检测法方法准确,可用于实验室样品的测定.