细菌VBNC态检测技术的研究进展

细菌在一些不良压力条件下会进入"活的非可培养状态"(viable but non-culturable,VBNC),其仍具有活力但不能采用常规的平板培养基进行培养,VBNC态细菌一旦培养条件适宜仍能继续生长繁殖,有些致病菌依旧具有毒力。如果检测方法不当,会造成假阳性或假阴性的结果,需要采取适合的检测方法进行检测。文章概述了几种检测VBNC态细菌的方法,如活菌直接计数法、核酸染料检测法、呼吸检测法、分子生物学法、免疫学法、流式细胞仪检测法等,并对检测方法的应用现状进行了评述。     

抗氧化多肽来源、提取及检测的研究进展

目前,由于人工合成抗氧化剂的一些缺陷,生物体内的抗氧化活性肽就成了研究的焦点.该文综述了抗氧化肽研究的最新进展,包括分类来源、作用特点、分离纯化以及检测活性方法等有关进展,对其检测方法做了简要概括,比较分析得出目前最能反映生物体内活性变化的方法是CAA法.同时,提出了新的分离抗氧化肽的方法,以期获得更高的产率.     

扩增子测序法筛选结核分枝杆菌的耐药突变

结核病是严重的公共健康问题之一,而耐药结核病的增加是控制结核病流行的难点之一。快速、准确的诊断是提高结核患者治愈率和降低死亡率的关键因素。本研究建立了基于二代测序技术的扩增子测序方法,对5种一线抗结核药物的17个耐药基因进行检测。在26个临床耐药结核菌株中共鉴定出65个突变,包括33个热点突变,9个稀有突变和23个新突变。对18个新发现的错义突变进行了蛋白质序列保守性和蛋白质局部结构的分析。结果表明,14个新的错义突变在9种分枝杆菌中显示出高度保守性,并且导致了该蛋白质局部结构的改变。根据本研究检测和分析结果,推测这些新发现的突变可能是潜在的耐药突变。在本研究中,构建了扩增子测序的检测方法,可同时检测10株临床结核菌株的17个耐药基因,是一种快速、准确并且全面的检测耐药结核分枝杆菌一线治疗药物耐药突变的方法,该方法不仅能检测热点突变和稀有突变,还能发现一些未报道过的新突变。该检测方法或可用于临床诊断和基础研究。     

毛细管电泳测定蛋白激酶A活力的新方法

建立了以毛细管电泳为基础的蛋白激酶Ａ活力测定的新方法,对其他一些激酶的活力测定具有一定的通用性。此方法是基于蛋白激酶Ａ的检测底物及其磷酸化产物容易在毛细管电泳中分开,并且可以通过在线检测进行积分定量。同时发展了连续进样技术,使能在一个电泳过程中分析十个以上的样品,大大节省分析时间和费用。     

硝酸盐/亚硝酸盐检测方法的研究进展

对国内外硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法进行综述。亚硝酸盐定量检测方法有光度法、荧光法、示波极谱法、色谱法,这些方法各有优缺点,目前使用最广的是分光光度法。亚硝酸盐快速检测方法也较多,有检测试纸、粉剂等新型检测方法,这些方法简单、方便,可应用于一些简单的定性检测,但对乳、豆浆等具有屏蔽作用的样品检测效果并不理想,因此建立灵敏、准确的硝酸盐/亚硝酸盐的快速检测方法具有重要的现实意义。     

转基因产品免疫学检测技术研究进展

目前转基因产品的检测主要有基于DNA的检测方法以及基于蛋白质的免疫学检测方法,简述了免疫学检测方法中的免疫印迹法(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和试纸条法的原理、特点、应用例子以及存在问题。对一些新的方法如免疫PCR法、生物传感器法也略作介绍。     

饲料中三聚氰胺的测定研究

本文就饲料中三聚氰胺的检测方法做一些探讨。目前对饲料中的三聚氰胺的检测,主要有酶免疫法,高效液相色谱法,高效液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法。本文就这些检测方法进行探讨,对其优缺点进行研究。在这些检测方法中,目前比较实用的方法是高效液相色谱-质谱法。     

在琼脂双向扩散中植物病毒非特异带的产生和消除

检测植物病毒,通常采用琼脂双向扩散、对流免疫电泳和酶联免疫吸附测定(ELIsA)等三种方法,而在研究一些植物病毒之间的亲缘关系方面,琼脂双向扩散则能提供其他方法所不能提供的免疫学图谱。我们在做琼脂双向扩散时发现,植物病毒的某些寄主与提纯病毒时所用磷酸盐缓冲液之间常能形成非特异带。本文报道非特异带的干扰现象及其消除方法。     

食品安全检测中微生物检测技术研究

近年来食品安全问题层出不穷且呈多样化趋势,传统的检测方法已无法满足当今食品检测的需求,因此需要从食品安全检测的技术手段入手,采取更加精密的检测技术,来确保食品的质量和安全性,避免产生食品安全问题。微生物检测技术作为现阶段开展食品安全检测工作的重要手段和方法,肩负检测食品安全的重任。文章旨在对食品安全检测中微生物检测技术进行研究,充分挖掘微生物检测技术在食品安全检测中的应用路径,希望能推动我国食品安全检测工作的开展,也能切实为食品安全生产保驾护航。     

类病毒的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳检测技术

类病毒为已知的最小的致病因子,只含核酸,不含外壳蛋白。类病毒能在若干高等植物上引起重要病害,在一些经济作物上造成损失。防治类病毒侵染,主要靠早期诊断。可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,生物学方法,以及分子杂交等方法检测类病毒。用生物学方法检测,即接种一定的鉴别寄主,周期长,费时费力;用分子杂交方法须用放射性同位素,探针的制备也较困难,在一般的实验室不大容易进行;以往     

一种快速简便检测TGF—β生物活性的细胞光度比色法

转化生长因子是一类影响细胞生长和表型的生物活性多肽。它在不同靶细胞和微环境下,不仅具有刺激或抑制细胞生长、诱导细胞分化和其它多种生物学效应,还能引起一些正常细胞失去接触抑制,转化成为锚着不依赖生长。通常利用这种特性使长在软琼脂上的成纤维细胞形成细胞集落来检测TGF-β活性。此法操作繁琐,周期长至一周以上。另一种检测TGF-β活性方法是利用TGF-β能抑制貂肺     

双色荧光多重PCR技术及在禽流感病毒检测中的应用

为快速检测7种亚型禽流感病毒,对引物进行双色荧光标记,建立双色荧光多重PCR(DFM-PCR)方法,通过运用DFM-PCR可一次检测出7种禽流感病毒亚型。此方法为应用于病毒或病原等一些要求快速、高通量的检测领域打下基础,而且为禽流感病毒检测以及其他种类病毒等病原检测提供了一种新型方法。     

生物组织中有机物检测的方法指导

生物组织中的有机物有糖类、蛋白质和脂肪等,研究对它们的检测,有利于掌握生物组织的性质,了解生物组织的特点。本文通过检测糖类、蛋白质和脂肪的实验,具体说明了检测生物组织的一些方法。     

抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用

目的:制备抗心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),并建立侧向免疫层析方法检测血浆中H-FABP。方法:用H-FABP蛋白免疫纯系Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人H-FABP的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水,纯化后得到特异性抗H-FABP单克隆抗体,进行效价、特异性、亲和力的鉴定分析,并在ELISA平台进行抗体配对,用所筛选到的抗体对初步建立了检测H-FABP的侧向免疫层析方法。结果:成功获得12株稳定分泌抗体的阳性细胞株,并筛选出能相互配对,并应用于侧向免疫层析平台的抗体3D1和5F4,检测临床样品与对照试剂比较总符合率为100%。结论:筛选能稳定分泌抗体的细胞株,配对抗体应用于侧向免疫层析检测方法中,能快速、特异、灵敏的检测出临床样品中H-FABP,为临床应用快速检测H-FABP指标提供了方法和关键材料。     

分子生物学技术在环境微生物监测中的应用

随着环境生物学的发展,对环境中复杂的混合微生物群落进行及时监测和准确鉴定变得越来越重要。但是传统的研究方法因为检测速度慢、准确性差等缺点,在某种程度上已经不适应于这方面的研究;而以ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）技术为主的一些分子生物学技术因具有快速、灵敏的特点,正被越来越多的人所采用。目前,这些分子生物学技术已能在ｒＤＮＡ测序和有关结构基因分析的基础上监测和定量复杂的混合微生物群落中的一些特殊的微生物,而且其中许多技术都是在ＰＣＲ扩增的基础上来检测混合微生物群落中原本…     

细菌巨大质粒的快速检测

本文报道了一种快速检测微生物巨大质粒的方法．该方法是通过对Ｅｃｋｈａｒｄｔ所报道的方法加以改进,使之能对根瘤菌、大肠杆菌、甚至链霉菌的大质粒进行快速检测．     

荧光原位杂交(FISH)技术检测水体中大肠菌群研究

大肠菌群广泛用作饮用水的细菌学检测指标。传统的检测方法有多管发酵法和滤膜法。这些方法存在一些缺点 ,如检测时间长、专一性差、干扰因素多。因此 ,迫切需要一些快速、灵敏的检测方法。FISH(fluorescentinsituhybridization)技术利用寡核苷酸探针检测特定细胞内的互补核苷酸序列。针对于Enterobacteriaceae的 1 6SrRNA分子区域专门设计的探针可以用于饮用水样品的微生物检测。FISH技术可以用于饮用水中大肠菌群的检测 ,并且在较短的时间内 ( 6～ 8h)给出定量分析结果 ,但该技术用于日常检测尚需更深入的研究。     

“还原糖的检测”中2个常见问题的探讨

指导学生做“还原糖的检测”实验时遇到一些问题。笔者尝试结合初中“葡萄糖的检验”方法做“还原糖的检测”实验,发现一些有趣的、值得探究的问题。     

用分子遗传学及免疫学方法控制鱼类寄生性甲藻

寄生性甲藻,例如Amyloodiniumocellatum,给鱼类养殖带来严重的危害。虽然,近年来针对Amyloodinium的药物治疗有一些新的进展,如使用氯喹、过氧化氢和3,N泛影葡胺拉沙洛西等,然而,含铜类药物仍然是最有效的。近年来分子遗传学和免疫学的进展,使得我们能够更好地了解寄生性甲藻的流行病学及其防治方法。分子系统学研究认为某些寄生性甲藻,如Amyloodiniumocellatum,可以聚类为高度同源性的一支;而其它的如Piscinoodiniumpillulare,则可以认为不止一种或更高的分类阶元。这些分子分析也发展出一些高灵敏的检测技术,可以检测出环境中极少量的寄生性甲藻。通过对Amyloodinium的免疫学研究表明,鱼类能对寄生物的感染产生强烈的高度特异的保护性免疫应答,其中主要是抗体介导的免疫应答。鱼体皮肤和鳃也能表达内源非特异性多肽抗生素(类组蛋白),它们能对Amyloodinium造成致命的破坏。利用这些特异或非特异的免疫防御,将更有助于我们控制这些具有严重危害性的寄生性甲藻     

多重PCR检测技术在食品微生物检测中的应用

现代食品行业,有很多有害的微生物严重危害食品的品质和人们的健康,甚至会引起一些严重的疾病。食品安全是对食品按其原定用途进行制作和(或)食用时不会使消费者受到伤害的一种担保。食品安全急需一些快速、敏感、特异的检测方法,以及时发现致病菌,控制污染及其可能对人体健康产生的危害。多重PCR检测技术具有快速、简便微量等优点,克服了传统检测方法操作繁琐,检测时间较长等缺点,目前正在被应用于微生物致病菌,转基因产品以及肉类品种的鉴定上,具有广阔的发展前景。本文主要是介绍了多重PCR检测技术在食品微生物检测中的原理和应用,以期望在食品微生物检测方面做出贡献。