检测抗体生成细胞的方法——几种溶血空斑试验及其改良法

溶血空斑试验(Plaque-forming cell Assay简称PFC试验)是体外检测和计数产生IgM及其他类型Ig的抗体生成细胞的一种方法。由于PFC试验具有特异性高,检测力强、直观等特点,故可作为判断机体免疫功能的指标,藉以观察免疫应答的动力学变化,除适用     

一种新的病毒空斑技术

本文报道了一种不同于Dulbecco细胞单层法和Cooper琼脂细胞悬浮法的病毒空斑技术——速成单层法病毒空斑试验。用24孔细胞培养板,不经预先制备细胞单层,将Vero细胞和水泡性口炎病毒Indiana株同时加入培养孔内,使细胞在贴壁的同时被病毒吸附,继后在营养凝胶下,细胞形成单层的同时病毒产生空斑。结果表明,此法简单快速,稳定可靠,经济节约,方便易行。用于单纯疱疹病毒分型的鸡胚细胞空斑形成试验,亦获得满意结果。     

标记抗体染色病毒空斑计数技术的研究

用细胞病变阳性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ,ＣＰＥ＋ ）病毒马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ, ＭＤＶ）血清１,２,３ 型以及细胞病变阴性（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ,ＣＰＥ－ ）病毒猪瘟病毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）强毒与弱毒和鸡新城疫病毒（Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ． ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ 毒株及其对应的异硫氢酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的特异抗体为试验材料,以免疫荧光抗体技术（ＦＡ）为基础、并加以改进,建立了标记抗体染色病毒空斑计数技术． 该技术不仅能克服常规病毒空斑计数技术不能计数细胞病变阴性病毒和一种样品含有两种或两种以上病毒的各自空斑数的缺点,能迅速准确计数出ＣＰＥ－ 病毒和多病毒样品中病毒各自空斑数及其空斑总数,具较高敏感性、良好的可重复性．     

SARS-CoV细胞空斑试验

目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS．CoV空斑试验方法。方法SARS－CoVl0倍系列稀释接种Vero－E6细胞,用0．6％琼脂糖覆盖中性红着色（琼脂糖．中性红法）或覆盖1％甲基纤维素,4％甲醛固定,结晶紫染色（甲基纤维素－结晶紫法）,空斑计数。结果琼脂糖－中性红法病毒滴度为6．14Lg pfu／mL,甲基纤维素－结晶紫法病毒滴度为6．57Lg pfu／mL。结论二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异。甲基纤维素－结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖－中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存。     

分光光度定量溶血法检测大鼠脾脏抗体生成细胞活性

本文建立了分光光度定量溶血法检测大鼠脾抗体生成细胞活性的实验手段,并对其影响因素进行了探讨。大鼠脾细胞经 DU-7HS 分光光度仪自动扫描,最佳吸收波长为413nm,且随免疫脾细胞量的增加(2×10~6—1×10~7),吸光度值相应提高,呈正相关(r=0.997);补体浓度(1:5—1:40稀释)呈负相关(r=-0.982);绵羊红细胞浓度则随加入量的增加(0.2%—1.0%),介导溶血反应明显上升。此方法简便准确、灵敏度高、重现性好,可作为免疫功能检测的一个重要指标。     

一种改良的细胞计数方法

库尔特计数器(Coulter Counter)是国内实验室较为常用的仪器,多用于血细胞计数,也可做其它细胞或颗粒的计数。库尔特计数器工作的基本原理是将需要计数的颗粒或细胞悬浮在可导电的介质溶液中,并将测定管浸于此悬浮液。测定管下端有一微孔,管内充满同种介质溶液。管的内外各有一电极(见图1)。测定时外加一定的真空度,从而迫使一定量的细胞     

肿瘤宿主的免疫状态——Ⅰ.几种带瘤小鼠脾脏溶血空斑形成细胞的动态观察

本文应用改良的Jerne氏方法测定小鼠脾脏溶血空斑形成细胞。用此方法测定一株实体瘤(在津白小鼠上移植之肉瘤180)和四株腹水瘤(津白小鼠上移植之肉瘤180,615小鼠上移植之肉瘤180,以及C57BL小鼠上移植之肝癌和艾氏癌)带瘤动物免疫状态的动态变化。结果表明,随着肿瘤进行性生长,小鼠脾脏溶血空斑形成细胞逐渐减少,到晚期几乎不能测得。带瘤小鼠的脾脏普遍增大,病理组织学观察提示带瘤小鼠溶血空斑反应之低下与其脾脏的病理学改变相关。     

辅酶Q_(10)的毒性试验及对溶血空斑形成细胞的刺激效应

辅酶Q_10（以下简称CoQ_(10)）是生物体内普遍存在的一类生物活性物质,具有重要的生理、生化作用。它是细胞呼吸链中主要的递氢体,在生物能量转化中占重要地位,它又能作为非特异性免疫增强剂,增强机体的防御能力,因此人们对于CoQ_(10)的临床研究越来越受到重视（中国科学院昆明动物研究所,1979）。 我们结合我国具体情况,独创地从提取细胞色素丙的猪心残渣中分离制备了CoQ_(10), （许以盛等,1985）,并与有关生产及临床单位协作,于1977年12月通过了鉴定,为我国的生化药物填补了一项空白。     

一种高效率细胞同步化方法的改良与运用

本实验改良了Rao的高压N_2O气阻断方法,获取高同步率和收获率的4个周期时相细胞,并进行了测定分析。将指数生长的细胞用过量TdR(2.5mmol/L)预处理后,放在新设计的高压罐内,并直接将罐放入恒温箱内,经高压N_2O气处理,细胞被阻断在有丝分裂中期。收集M期细胞在37℃下孵育释放2小时,细胞即可进入G_1期;在中G_1期再次用过量TdR处理与释放,于不同时间分别收集S期与G_2期细胞。各时相细胞通过膜表面ConA受体再分布也表现进显著的时相差异性。每个时相细胞均能继续贴壁生长,活力高,适于各种相关实验研究。     

流行性乙型脑炎病毒血清抗体半微量空斑抑制法的改进

本文报道一种检测流行性乙型脑炎(简称乙脑)中和抗体的简化空斑抑制试验方法,用BHK21传代细胞在24孔塑料板上进行试验,在细胞未形成单层时,将病毒直接接种在刚消化的细胞悬液内,孵育后加甲基纤维素复盖物,再培养,细胞层经染色后即可计算空斑数。 用该法检查47名儿童乙脑疫苗免疫前后的中和抗体,与常规的鸡胚细胞全量法或BHK21传代细胞微量中和试验法作了比较,结果表明本法与其它常规法的敏感性一致,且具有简便快速、节省人力和原材料、空斑形成率高的优点,便于大量血清学检测。     

为何一个B细胞克隆只产生一种特异性抗体

介绍了B细胞在骨髓中的发育、接受刺激被激活等知识点,解释了源自同一个初始B细胞的子细胞虽然有可能合成不同种类的抗体,但结合同一种抗原决定簇的特异性不会改变。     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

加拿大科学家研究出一种改良马铃薯的技术

加拿大的一些科学家研究出一种能改良马铃薯的细胞融合技术。Ontaria公司(Allelix)的一些研究人员设法将两个遗传类型上远缘的马铃薯进行杂交,这是正常的杂交育种所做不到的。     

检测流行性出血热病毒滴度和中和抗体效价的半微量空斑法

建立了检测流行性出血热病毒滴度和中和抗体效价的半微量空斑法。小牛血清与胎牛血清的培养效果无差异。7株不同来源的出血热病毒均能在E6细胞上形成空斑。接种的病毒浓度与形成的空斑数呈直线关系。用空斑法测得的病毒滴度稍低于荧光TCIE50滴定法。空斑减少中和试验的敏感性较荧光中和试验高30倍左右。同时还初步表明了本方法可用于流行性出血热病毒的抗原性分析。     

双链抗体--一种新型基因工程抗体

双链抗体（Ｄｉａｂｏｄｙ）,是一种新型基因工程抗体。“Ｄｉａｂｏｄｙ”一词最早由Ｈｏｌｉｇｅｒ等于１９９３年提出［１］,他们的解释是,双链抗体乃是一种小分子的双价双特异性抗体片段。我们将“Ｄｉａｂｏｄｙ”试译为“双链抗体”的理由有二：（１）前缀“Ｄｉ...     

一种改良鞭毛染色法

鞭毛染色是一项常用而又难达到预期效果的技术。欲使染出鞭毛结构清晰、形态完整、本底干净需反复摸索染色条件。现有的鞭毛染色方法,有些烦琐且结果不稳定。我们所用的改良鞭毛染色法,方法简便易行,染色效果亦较好。现将具体的染色方法及染色结果报告如下：     

速成单层法病毒空斑技术的影响因素

本文建立了不需预先制备细胞单层的速成单层法病毒空斑技术(简称速成法)。将细胞和病毒同时加入培养孔内,使细胞在贴壁的同时被病毒吸附。细胞形成单层的同时病毒产生空斑,简单快速,经济方便,重复性好,敏感性高。为了进一步探讨速成法的最佳实验条件,使其能应用于更多的病毒—细胞系统,本文以骨髓灰质炎病毒Ⅰ型Mahoney株(PV1)为代表。观察了细胞种类、细胞数量和病毒吸附、细胞贴壁