抗生素AGPM发酵过程中蛋白质表达差异的研究

由土壤中筛选到一能产生新型抗肿瘤抗生素AGPM的藤黄灰链霉菌株,应用蛋白质双向电泳方法,比较了藤黄灰链霉菌在发酵24h与72h蛋白质表达的差异,发现在发酵72h有17个蛋白质差异点出现,此外还发现一些蛋白质的含量明显高于24h的同种蛋白含量,这表明这些蛋白可能与抗生素AGPM的合成以及和菌体的生长等有关。     

新型抗生素AGPM产生菌藤黄灰链霉菌的诱变育种

从土壤中分离得到一株藤黄灰链霉菌的新菌株099,该菌株能产生一种具有显抗肿瘤活性的新型抗生素AGPM。产生菌经紫外线单因子诱变、紫外线加氯化锂(LiCl)复合诱变等两种诱变方式诱变处理后,其AGPM产量达到了18．7μg/mL,较出发菌株提高了1．2倍。研究发现最忧的紫外辐射时间和氯化锂浓度分别是30-60s和0.05-0.09mol/L,并且由于氯化锂的协同效应,菌株在经氯化锂处理后,对紫外线的敏感性明显增强了。30L发酵罐发酵试验表明,利用高产突变株发酵,AGPM产量能达到18．5μg/mL;而利用出发菌株发酵,AGM产量仅为8．5μg/mL。     

新型抗生素AGPM产生菌藤黄灰链霉菌的诱变育种*

从土壤中分离得到一株藤黄灰链霉菌的新菌株 0 99,该菌株能产生一种具有显著抗肿瘤活性的新型抗生素AGPM。产生菌经紫外线单因子诱变、紫外线加氯化锂 (LiCl)复合诱变等两种诱变方式诱变处理后 ,其AGPM产量达到了 1 8 7μg/mL ,较出发菌株提高了 1 2倍。研究发现最优的紫外辐射时间和氯化锂浓度分别是 30～ 6 0s和 0 0 5～ 0 0 9mol/L ,并且由于氯化锂的协同效应 ,菌株在经氯化锂处理后 ,对紫外线的敏感性明显增强了。 30L发酵罐发酵试验表明 ,利用高产突变株发酵 ,A     

抗生素AGPM生物合成途径的初步研究

采用前体添加实验法、静息细胞培养法以及酶抑制剂法对藤黄灰链霉菌中抗生素AG PM生物合成途径进行了初步探讨。研究表明能转化成聚酮合成所需活性前体的氨基酸如异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、谷氨酸等以及短链脂肪酸乙酸、丙酸、丁酸盐对抗生素AGPM合成均有明显促进作用 ;另外 ,在培养基中添加脂肪酸和聚酮生物合成途径的专一性抑制剂浅蓝菌素 (2 5μg mL)或脂肪酸合成抑制剂碘乙酰胺 (0 5mmol L)时 ,菌体生长不受影响 ,而抗生素AGPM合成受到强烈抑制 ,分别为对照的 35 3 %和 2 6 2 % ;     

灰黄霉素高产菌F208发酵过程蛋白质表达差异的研究

目的 为探寻灰黄霉素生物合成过程中的关键酶,以蛋白质组学技术手段分析灰黄霉素高产菌F208发酵过程蛋白质表达差异.方法 通过双向电泳联用质谱技术对F208发酵过程蛋白质组图谱进行比较分析.结果 研究发现灰黄霉素产生期( 192 h)F208表达的蛋白质与产生前期(72 h)有较大差异,并鉴定出在灰黄霉素产生高峰期蛋白表达量明显增加的两个特异点是丝氨酸羟甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸合成酶.结论 成功建立灰黄青霉菌丝体总蛋白双向电泳技术体系.并鉴定出两个蛋白特异点,极可能与灰黄霉素生物合成有关.     

白喉毒素A链基因在植物中的表达能抑制蛋白质合成

利用原生质体瞬间表达系统证实,即使用大量蓖麻毒素A链基因DNA导入诸葛莱(Ory-chophoragmus violaceus)原生质体,其蛋白质合成仍不被抑制。但是诸葛菜和灰叶烟草(Nicotiana plumbagenifolia)原生质体的蛋白质合成却容易被表达的白喉毒素A链所抑制。用CaMV 35 S启动子和Kozak序列控制的白喉毒素A链嵌合基因DNA在3h内能完全中止灰叶烟草原生质体蛋白质合成,此期间蛋白合成总量仅为正常时5%左右。     

嗜热链霉菌质粒的研究

从分属于12个种的28株嗜热链霉菌中检测到热灰紫链霉菌(S.thermogriseoviolaceus)T272带有3个质粒(pST1,pST2,pST3),热藤黄链霉菌(S.thermoluteus)T422带有1个质粒(pST4),经电镜观察得到证实,并按经验公式求得其分子量分别为27、8.3、6.9、25.7kb。实验数据表明,T272与利福平抗性有关的基因可能位于质粒pST1;而pST4可能与rRNA甲基化酶合成有关,推测该酶使T422具有红霉素、螺旋霉素、林可霉素抗性。未发现这些质粒与宿主的高温生长特性有关。     

沙葱对牛瘤胃体外发酵参数和产气量的影响

目的探究添加沙葱对牛瘤胃体外发酵和产气量的影响。方法实验分为对照组(以玉米秸秆为发酵底物)和沙葱处理组(在发酵底物中添加沙葱),每组设置3个重复,于不同时间节点记录2组的产气量,并在发酵72 h后对发酵液的pH值、氨态氮以及挥发性脂肪酸进行测定。结果 12、24和72 h时,2组产气量具有一定差异,在12 h时沙葱处理组显著高于对照组(t=3.717,P=0.020 5),而24 h及72 h时沙葱组产气量极显著高于对照组(t=4.832,P=0.008 5;t=4.953,P=0.007 7)。发酵72 h时对发酵液pH值及氨态氮进行测量发现沙葱组pH值显著高于对照组(t=3.949,P=0.017 0),而对照组的氨态氮含量极显著高于沙葱组(t=-4.806,P=0.009 0)。2组挥发性脂肪酸的含量差异无统计学意义。结论在体外发酵条件下添加沙葱对瘤胃微生物发酵状态具有一定的调节作用,沙葱作为反刍动物使用的植物提取物饲料添加剂具有潜在价值。     

可改良棉粕蛋白的菌株选育及其发酵

棉粕蛋白质含量高达38％~50％,然而作为饲料其蛋白质品质较差,饲料利用率较低。为提高其蛋白质利用率,从自然界筛选出了能够高效降解棉粕大分子蛋白质的优良菌株4株,经生化与分子生物学试验鉴定为Bacillus subtilis(2株,编号为H1和H7),Bacillus cereus (1株,编号为H9)和Aspergillus niger (1株,编号为P1)。通过单菌及组合发酵实验比较发现:最适宜菌种组合为B. subtilis(H1)和A. niger (P1)。两菌株组合发酵后,棉粕TCA-NSI(三氯乙酸氮溶指数)提高了25.34%,小分子多肽含量提高了11%,游离必需氨基酸提高了24%,蛋白质的体外消化率由44.56%提高到了78.61%,明显高于其他菌种组合,研究结果表明其组合发酵可有效改良棉粕蛋白品质,显著提高棉粕蛋白的饲用价值。     

嗜酸乳杆菌S-层蛋白联合抗生素对Escherichia coli和Staphylococcus aureus的抑制作用研究

旨在检测嗜酸乳杆菌S-层蛋白以及S-层蛋白与抗生素联用对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用。采用液体发酵培养法获得嗜酸乳杆菌菌体,LiCl法提取S-层蛋白粗提物,凝胶过滤层析法纯化S-层蛋白,分别用E.coli和S.aureus处理Caco-2细胞2 h后,考察S-层蛋白在不同浓度和不同作用时间条件下对E.coli和S.aureus的抑制作用,并考察S-层蛋白联合抗生素对E.coli和S.aureus的抑制作用,实验分组:(1)空白对照;(2)嗜酸乳杆菌组;(3)S-层蛋白组;(4)抗生素组;(5)嗜酸乳杆菌+抗生素组;(6)S-层蛋白+抗生素组。结果显示,液体发酵得到嗜酸乳杆菌菌体,提取并纯化得到S-层蛋白;S-层蛋白对E.coli和S.aureus有很好的抑制效果,具有浓度依赖性,高浓度下抑制率达到42.2%和31.7%,差异极显著(P<0.01),且在E.coli和S.aureus作用的短时间内干预效果明显,0 h时的抑制率分别达到59.3%和48.4%;S-层蛋白联合抗生素的抑菌率分别达到81.7%和79.3%,差异极显著(P<0.01),效果优于单独使用抗生素。嗜酸乳杆菌S-层蛋白具有较强的抑菌作用,可以与抗生素联用,有望开发称为一种新型的抗菌药物。     

蛹虫草金属硫蛋白分离纯化及性质研究

研究探讨锌离子胁迫下蛹虫草Cordyceps militaris金属硫蛋白的产生及性质。蛹虫草菌丝体以15g/L Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体（干重）,细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到蛹虫草金属硫蛋白纯品。利用Bradford法进行蛋白质含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱（AAS）测定MT含量,发酵终点处金属硫蛋白含量为12.876mg/g菌丝体（湿重）。用电喷雾质谱法测得金属硫蛋白的分子量为7 390Da,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得每分子蛋白质含有14个巯基、结合5个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸。以上表明,研究中的蛹虫草金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异较大,但与酵母菌金属硫蛋白结构组成类似。     

食用真菌发酵豆浆过程中对豆浆中几种生物活性物质的影响

本实验以灵芝、金耳以及冬虫夏草作为发酵菌种,选用豆浆为基本原料配制培养基,在发酵过程中定时取样并测定其中几种生物活性物质的含量,分析各生物活性物质在发酵过程中的变化。研究结果表明,三种食用真菌发酵豆浆的发酵液中总游离型大豆异黄酮含量在发酵过程中均缓慢上升并分别在发酵72 h、24 h和36 h达到最高,与发酵初期相比分别增加了31.81μg/m L、19.05μg/m L和15.71μg/m L;三种食用真菌发酵液中蛋白质含量随着发酵时间的推移而降低的同时氨基酸含量均有增加,且发酵液中的肽主要是分子量范围在300 Da~1 500 Da之间的具有较高生物活性的小分子肽,发酵液中的必需氨基酸含量以及占总氨基酸含量的比值均有增加。本实验探究了食用真菌发酵豆浆过程中生物活性物质的变化,为日后的富集游离型大豆异黄酮、多肽以及氨基酸等生物活性物质实验提供依据,并为工业化生产提供实践基础。     

红平红球菌复苏促进因子基因克隆及功能域分析

复苏促进因子(Rpf)广泛存在于高G+C含量的革兰氏阳性细菌中,与细菌生长及抵抗不良环境有关,不同细菌Rpf种类和数量有一定差异。红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)KB1分离自石油污染土壤,具有高效石油降解能力和环境适应性。为探索Rpf在红平红球菌KB1适应环境过程中作用,设计了复苏因子基因特异引物,从红平红球菌KB1基因组DNA扩增出4种rpf基因。序列分析发现4种基因分别与藤黄微球菌(Micrococcus luteus)rpf基因,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)rpfB、rpfC及链霉菌(Streptomyces coelicolor)rpfB相似性较高。4个rpf基因编码蛋白都有一个类似Mt细胞复苏促进因子Rpf域,由大约70个氨基酸组成。其中Rpf-1与结核分枝杆菌、链霉菌RpfC相似,只含1个Rpf结构域;Rpf-2与结核分枝杆菌RpfB相似,含有1个Rpf域、1个G5域和2个DUF348;Rpf-3与链霉菌RpfB相似,含有1个Rpf域、G5域和3个DUF348;Rpf-4与藤黄微球菌Rpf相似,含1个Rpf域和1个LysM域。Rpf-2、Rpf-3含信号肽序列,Rpf-1、Rpf-4不含信号肽。     

嗜线虫致病杆菌产生抗生素的培养基及条件

本对嗜线虫致病杆菌（Xenorhadbus nematophilus）产生抗生素的发酵培养基和发酵条件进行了研究,同时对该菌代谢过程pH值、还原糖、总糖、氨基氮与抗生素产量的关系进行了分析,通过筛选该菌对碳源和氮源的要求,用正交试验初步确定了该菌产素的最佳发酵培养基和条件为：玉米粉1％,大豆粉3％,蔗糖1％,蛋白胨1.5％,KH2PO40.02％,MgSO40.2％,活化剂T0.1％;发酵培养基的起始pH值在6.0－8.0,种龄16h,接种量4％,500mL摇瓶装量15－150mL的条件下培养72h可获得较高的抗生素产量;产素量与菌代谢过程中pH、还原糖、总糖和氨基氮的变化有一定关系,通过培养基和培养条件的研究使该菌的产抗生素能力提高了56.3％。     

环境变异对青稞热稳定蛋白质含量及蛋白质Z的影响

热稳定蛋白是衡量麦芽品质的重要指标,为探明青稞籽粒和麦芽热稳定蛋白的含量、蛋白质Z的组成特征以及影响条件。本研究以3份青稞和1份对照大麦品种Gairdner为试验材料,对青稞籽粒及其麦芽的热稳定蛋白进行分析与鉴定,研究了不同生态环境下青稞热稳定蛋白质含量和蛋白质Z的组成特征,同时筛选出了优异啤用品质青稞品种(品系)。结果表明,青稞发芽温度为20℃,发芽时间为72 h,培养溶液PH为5时,发芽及焙焦条件下最有利于青稞热稳定蛋白总含量及蛋白质Z的累积。利用该发芽条件筛选种植于西宁、湟源和海晏的青稞资源,发现种植于西宁的青稞种子和发芽后热稳定蛋白质总含量最低,但是焙焦后热稳定蛋白质和蛋白质Z含量最高;同时从150份青稞资源中筛选出热稳定蛋白质含量及蛋白质Z条带清晰、含量高的优异资源15份。本研究结果为酿造青稞品种选育、啤用青稞和麦芽质量评价指标提供理论依据。     

发酵条件对纤维素分解菌酶活性的影响研究*

研究了4株可用作饲料添加剂的纤维素分解菌,在不同发酵时间、发酵温度和厌氧发酵条件下,菌体蛋白含量、纤维素酶和半纤维素酶活性等的变化。结果表明发酵20h酶活性最高;供试菌都适宜在28℃恒温发酵;在厌氧条件下,39℃士2℃发酵12h、24h、36h,供试菌均可在PDA平板上正常生长,发酵48h供试菌生长和酶活均受不同程度的影响。研究为菌株的生产、保存和应用提供了重要依据。     

斑蝥素合成期的芫菁蛋白质表达差异分析

研究斑蝥素大量合成期的芫菁体内可溶性蛋白,有助于阐明斑蝥素合成相关酶蛋白的种类和合成机理.本研究采用SDS-PAGE、双向电泳技术,分析了苹斑芫菁Mylabris calida Palla在斑蝥素合成前期、大量合成早期和末期的蛋白质组成的变化.SDS-PAGE电泳分析显示,芫菁从羽化1 h到25 d过程中分子量约为80 kDa,45 kDa,30 kDa的蛋白组分存在着显著地表达差异.进而通过双向电泳分析,发现合成前期蛋白质与其它时期有明显差异:蛋白质大多分布在Pl值4～7,分子量20～80 kDa的区域,其中20～45 kDa蛋白质差异明显.芫菁羽化后1h、2d、4d的蛋白质点数目分别为471个、569个、645个;大量合成早期和合成末期为827个和999个,增长25%以上.研究结果显示:3个时期蛋白质组成的变化趋势恰好与芫菁合成斑蝥素含量显著峰值变化相吻合,表明芫菁体内斑蝥素的合成是多种蛋白参与的复杂过程,这些蛋白分子量范围在20～45 kDa.     

抗人参真菌病害的链霉菌的摇瓶发酵试验

比较对植物病原真菌有拮抗活性的 3株放线菌 0 7,0 8,0 9,以其中 1株为发酵对象 ,选择豆饼粉含量 2 %、饴糖含量 1%、玉米淀粉含量 2 %为主的培养基进行发酵 ,综合总糖利用、pH、抑菌活性以确定发酵时间 72h。     

急性高渗胁迫对中华绒螯蟹雄蟹组织中可溶性蛋白质、血蓝蛋白、血糖与肝糖原含量的影响

实验以淡水(0.3‰)处理组为对照,研究了急性高渗胁迫(盐度16‰和30‰)对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)雄蟹血淋巴和肝胰腺中可溶性蛋白质、血蓝蛋白、血糖及肝糖原含量的影响。结果显示,与对照组相比,进入16‰及30‰盐度后,蟹的血淋巴中可溶性蛋白质含量从6—48h显著降低(P<0.05),至72h时显著增加(P<0.05),而机体肝胰腺的可溶性蛋白质含量从12h开始至96h显著降低(P<0.05);血蓝蛋白含量在前24h显著降低(P<0.05),48h开始显著升高(P<0.05);肝糖原含量在6—96h与对照组相比有显著的降低(P<0.05);16‰盐度组蟹的血糖含量在24—48h时显著下降(P<0.05),到72h开始逐渐恢复(P>0.05),而30‰盐度组其血糖含量早在6—12h时就有显著的下降(P<0.05),到24h则开始逐渐升高。研究表明,在急性盐度胁迫下,糖类和蛋白质对中华绒螯蟹渗透压调节起重要的作用,其优先利用糖类的分解获得所需的能量,其中盐度越高,机体内葡萄糖的消耗越快,血糖水平的恢复也相应较快。对蛋白质的利用稍次之,机体可利用蛋白质的分解获得其渗透压调节的效应物游离氨基酸以维持渗透压平衡。     

低温环境下兔放火器复合伤早期血浆蛋白质及器官功能变化的研究

目的:探讨低温环境下放火器复合伤后血清蛋白质含量及器官功能的变化规律.方法:制备低温环境下兔肢体放火器复合伤动物模型,分别于致伤前及致伤后4、8、16、24、48、72 h测定血浆中蛋白质含量及Cr、BUN、ALT、AST、GGT、ALP、CK、LDH、ACP含量,并同时观察生命体征的变化.结果:低温环境下兔放火器复合伤后,4、8、16、24、48、72h血浆TP、ALB和GLB含量较致伤前均显著下降;血浆Cr、ALT、AST、CK和LDH含量于致伤后4、8、16、24、48、72h显著升高.致伤后16h时血浆BUN含量显著升高,随后24、48、72h显著下降.血浆GGT含量于致伤后4h显著升高,8、16、24、48、72h显著下降.血浆ALP和ACP含量于致伤后4、8、16、24、48、72h显著下降.结论:低温环境下放火器复合伤对兔重要器官功能具有损伤早、损害严重的特点,并具有明显进行性加重的趋势.