乙酰胆碱酯酶的别构作用——某些胆碱能效应剂与钙离子激活作用的关系

钙离子对纯化的黄姑鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的激活作用是依赖于底物浓度的。在钙离子存在时,表现最高活力的底物浓度在0.3mM 左右,随着底物浓度的增高,激活作用消失。钙离子与酶结合作用的表观解离常数为6×10~(-4)M 左右。钙离子浓度的增加并不解除底物对钙离子激活作用的抑制,表明钙离子似不可能结合在酶的外周底物结合部位。非竞争性抑制剂箭毒,在酶的外周阴离子部位有表现不同亲和力的两种结合作用,只有其中高亲和力的抑制作用为钙离子解除。在箭毒接近全抑制酶活性以后,再增加箭毒浓度,钙离子仍表现竞争作用。箭毒对酶的两种不同的抑制作用皆为底物所解除。竞争性与非竞争性混合类型抑制剂十甲鎓及1,5-双-(4-三甲铵苯)戍酮-3的抑制作用部份地为钙离子解除。讨论了包括钙离子及硫代丁酰胆碱、箭毒、十甲鎓、1,5-双(4-三甲铵苯)戊酮-3、季铵酚和六甲鎓在内的多种胆碱能配基在酶上三类部位的结合及配基间的相互作用。     

乙酰胆碱酯酶的别构作用——某些胆碱能效应剂与钙离子激活作用的关系

钙离子对纯化的黄姑鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的激活作用是依赖于底物浓度的。在钙离子存在时,表现最高活力的底物浓度在0.3mM左右,随着底物浓度的增高,激活作用消失。钙离子与酶结合作用的表观解离常数为6×10~(-4)M左右。钙离子浓度的增加并不解除底物对钙离子激活作用的抑制,表明钙离子似不可能结合在酶的外周底物结合部位。非竞争性抑制剂箭毒,在酶的外周阴离子部位有表现不同亲和力的两种结合作用,只有其中高亲和力的抑制作用为钙离子解除。在箭毒接近全抑制酶活性以后,再增加箭毒浓度,钙离子仍表现竞争作用。箭毒对酶的两种不同的抑制作用皆为底物所解除。竞争性与非竞争性混合类型抑制剂十甲鎓及1,5-双-(4-三甲铵苯)戊酮-3的抑制作用部份地为钙离子解除。讨论了包括钙离子及硫代丁酰胆碱、箭毒、十甲鎓、1,5-双(4-三甲铵苯)戊酮-3、季铵酚和六甲鎓在内的多种胆碱能配基在酶上三类部位的结合及配基间的相互作用。     

棉酚对鼠类生精细胞LDH-X活性的影响

本文测定了连续饲喂棉酚达6周的大鼠和小鼠的生精细胞的LDH-X活性。结果表明,棉酚能够明显地抑制大鼠成熟精子的LDH-X活性;而对睾丸LDH-X活性的抑制,与对照相比,无显著性差异。在小鼠中,未发现棉酚对成熟精子及睾丸生精细胞中的LDH-X活性产生具统计学意义的抑制作用。本文结合精子发生过程及LDH-X的特殊功能,对棉酚抗生育作用的可能机理进行了讨论。     

棉酚对几种动物精子ATP酶抑制作用的比较研究

本文比较了棉酚对几种动物精子ATP酶的抑制作用。实验所测为精子细胞的总ATP酶活力;采用的棉酚浓度为10μM至80μM。20μM时精子酶的相对活力为海胆7604％,大鼠74％,家兔51.6％;40μM时酶的相对活力百分数下降至海胆52.5,大鼠35和家兔29.7;达80μM时酶的相对活力进一步下降至海胆26.7,而大鼠及家兔仅余13.2。结果表明(1)棉酚对精于ATP酶的抑制作用是依赖浓度的变化;(2)各种动物精子ATP酶活力的下降情况显示,大鼠及家兔(哺乳动物)精子ATP酶对棉酚的敏感性比海胆(无脊椎动物)要高些。这种差异性可能对棉酚在临床上的应用具有一定的参考价值。     

棉酚对海胆精子鞭毛轴丝及力蛋白(Dynein)ATP酶的抑制作用

本工作观测了不同浓度棉酚(10—80μmol/L)对海胆精子鞭毛轴丝及力蛋白ATP酶的影响,发现棉酚对之具有剂量依赖方式的抑制作用。 实验对比了几种ATP酶抑制剂对轴丝ATP酶的作用,结果表明它们之间差别很大。使酶活力下降一半所需的各种抑制剂浓度分别为:钒酸钠17μmol/L;棉酚36μmol/L;槲皮酮450μmol/L,DCCD[双环已基碳化二亚胺(Dicyclohexylcarbodiimide)]1,600μmol/L;乌本苷>2,000μmol/L。 本文对棉酚的杀精机理,抑制强度及其控制生育的意义进行了讨论。     

大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶的纯化及某些性质的初步研究

<正> γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)属于质膜结合酶,广泛分布于哺乳动物各脏器组织,以肾脏含量最高。国外已有报道从许多正常组织及肝癌组织制备出高纯度的γ-GT制品。我们参照有关方法,结合本实验室条件成功地建成了大鼠肾脏γ-GT纯化制备方法,并对该制备物的某些特性进行了初步研究,报道如下:     

大豆胰蛋白酶抑制剂与棉酚或丹宁混用对棉铃虫中肠蛋白酶和生长率的影响

本文报告了大豆胰蛋白酶抑制剂(STl)与棉酚、丹宁酸单一和协同作用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hubner)幼虫中肠蛋白酶活性和生长速率的影响。在离体条件下,STI、棉酚和丹宁酸均对中肠蛋白酶有抑制作用,以STI的作用最强。活体试验表明,人工饲料中0.84%(干重)的S丁I对强碱性类胰蛋白酶活力有显著抑制作用;0.3%丹宁酸则对弱碱性类胰蛋白酶和总蛋白酶活力有显著抑制作用;0.3%棉酚对几种蛋白酶活力的影响均不显著。三者均能显著抑制幼虫的生长,而Sn与棉酚或丹宁酸的协同作用比三者的单独作用更能有效地抑制幼虫的生长发育和中肠蛋白酶活性。     

大豆胰蛋白酶抑制剂与棉酚或丹宁混用对棉铃虫中肠蛋白酶和生长率的影响

本文报告了大豆胰蛋白酶抑制剂(STl)与棉酚、丹宁酸单一和协同作用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hubner)幼虫中肠蛋白酶活性和生长速率的影响。在离体条件下,STI、棉酚和丹宁酸均对中肠蛋白酶有抑制作用,以STI的作用最强。活体试验表明,人工饲料中0.84%(干重)的S丁I对强碱性类胰蛋白酶活力有显著抑制作用;0.3%丹宁酸则对弱碱性类胰蛋白酶和总蛋白酶活力有显著抑制作用;0.3%棉酚对几种蛋白酶活力的影响均不显著。三者均能显著抑制幼虫的生长,而Sn与棉酚或丹宁酸的协同作用比三者的单独作用更能有效地抑制幼虫的生长发育和中肠蛋白酶活性。     

何首乌提取物对脂肪酸合酶的抑制作用

最新报道脂肪酸合酶 (FAS)是治疗肥胖症的潜在靶部位 ,但目前已知的FAS抑制剂还很少 .测定表明 ,中药何首乌提取物对FAS同时具有很强的快结合可逆抑制和慢结合不可逆抑制作用 .萃取的最佳溶剂为 4 0 %乙醇水溶液 .该提取物对FAS全反应的半抑制浓度为 0 .0 0 5mg ml(以萃取时中药重量计 ) ;不可逆抑制过程为两相 ,在 0 4 6mg ml浓度下在 0 5min内快相失活超过 5 0 % ,慢相在 32min时失活达 90 % .该提取物对FAS中的酮酰还原反应有强抑制 ,半抑制浓度为 0 0 18mg ml,对烯酰还原反应有弱抑制作用 .抑制动力学分析表明 ,何首乌提取物对FAS的抑制和底物NADPH之间呈非竞争性关系 ,和丙二酰辅酶A接近竞争性关系 ,而与乙酰辅酶A为反竞争性关系 .推测何首乌还含有作用于FAS中的丙二酰转酰酶的抑制剂 .用何首乌提取物口服饲喂大鼠 ,可明显减低大鼠摄食量和降低大鼠体重 ;实验结束时实验组大鼠肝脏FAS活性低于对照组 .以上结果表明 ,中药何首乌提取物对FAS有很强的抑制作用 ,其抑制能力明显强于已知抑制剂 ,其动力学表现也和已知抑制剂完全不同 ,预计为新的抑制剂 ,对研究FAS的作用机理及在防治肥胖症的应用上可能具有重要的价值     

氨基葡萄糖对酪氨酸酶的抑制作用

通过对酪氨酸酶催化底物L-DOPA反应速率的观察测定,研究了氨基葡萄糖（G-NH2）对酪氨酸酶的抑制作用。在反应液中加入50μL浓度为2.2 mg/mL G-NH2时（体系中G-NH2终浓度为36μg/mL）,酶抑制率为50%。GNH2对酪氨酸酶的抑制作用是个复杂的过程,酶反应呈先促进后抑制。分析酶抑制曲线Lineweaver-Burk双倒数图,得出G-NH2为混合抑制剂,进一步研究发现多巴醌生产量会减少,抑制类型是不可逆抑制。     

棉酚引起大鼠体内锌、铁、锰浓度的改变

给大鼠长期(90天)灌服棉酚,肝铁水平明显升高,而肝锌水平是有所降低。然而这种现象在短期(例如一个月)服棉酚大鼠肝中看不出来,考虑到服棉酚大鼠食量减少,因此必须以限制饲料量(使相当于服棉酚大鼠的食量)的大鼠为对照,结果发现单纯限制饲料量的大鼠肝中铁与锌浓度比不限制食量的正常大鼠要高得多。而服棉酚大鼠肝的铁与锌浓度是从限食对照组的高水平上降下来的。这表明服棉酚后肝中铁与锌浓度是降低了。锰的情况不同于铁和锌,但服棉酚后肝锰浓度也有统计上显著的降低。这表明棉酚在体内与这三种微量元素的代谢有关。 虽然服棉酚后睾丸与附睾的铁与锌浓度变化情况大致与肝相似,但不能排除是精子减少或阙如所致。因此导致灭精是否与这些微量元素——特别是锌——有关, 尚待进一步研究。 相对的纯种Wistar大鼠比杂种大鼠对棉酚的耐受性要好一些。幼龄大鼠比成年大鼠对棉酚的耐受性则要好得多。 棉酚与铁的关系已有不少的研究,而棉酚与体内其它金属离子,特别是两价金属离子的关系,报道很少。作为螯合物,总免不了在适当条件下与两价金属离子络合。本文目的在于观察较长时期服用棉酚的大鼠体内锌和铁浓度有无改变,在有些情况下也测定了锰。所测定的材料包括肝脏、睾丸、附睾和肌肉等。之所以关心睾丸与附睾,     

棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文)

 采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶活力抑制作用的IC50 为 35μmol L ;当其浓度达到 80 μmol L时 ,能够完全抑制PLA2 ( 4 11μmol L)对合成底物 2 硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC ,0 .2 5mmol L)的水解作用 .PLA2 的最大激发波长与发射波长分别为 2 75nm ,34 3nm ,荧光强度与酶浓度呈良好的线性关系 .棉酚对PLA2 的荧光具有较强的淬灭作用 .由于PLA2 与男性生育密切相关 ,棉酚对PLA2 活力的影响可能是其避孕作用及伴随的副作用的一种新的重要机制     

醋酸棉酚对大鼠睾丸HCG反应性及其受体功能的影响

给大鼠灌服醋酸棉酚30 mg/kg/d,每周6次,持续4周。给药2周后,血浆睾酮水平显著下降并持续至第4周,同时间质细胞呈萎缩性改变。醋酸棉酚明显抑制成年大鼠对HCG反应性,使睾丸LH/HCG受体亲和力下降,受体数目略有减少。结果提示,醋酸棉酚抑制大鼠睾丸酮的产生及降低成年大鼠睾丸对HCG的反应性,推测其机制是由于醋酸棉酚干扰了睾丸HCG受体功能而造成的。     

肾脏 γ 谷氨酰转肽酶的纯化、生化性质及免疫组织化学研究

用Triton X100提取、菠萝蛋白酶处理、硫酸铵沉淀、DEAE Cellulose 52离子交换柱层析及Sephadex G150凝胶柱层析,从人正常肾脏、大鼠肾脏成功地制备了γ谷氨酰转肽酶(γ-GT),其纯化倍数为713.5,比活性264U/mg蛋白,达到了匀质化纯度。用此酶作抗原免疫家兔得到了高效价兔抗人、兔抗鼠γ-GT抗血清,再纯化制成相应的γ-GTIgG,检查其纯度和特异性均给出满意的结果。在此基础上又建立了免疫化学、免疫组织化学的研究方法,并用于实验性肝癌的研究中。     

棉酚对大鼠前列腺细胞增殖的影响

我们从体内及体外二个方面研究了棉酚对大鼠前列腺细胞的影响。在体内研究中,给成年SD大鼠口服棉酚对其前列腺作组织学观察;在体外研究中,将棉酚溶液直接加入培养系统中,对包括组织学结构、细胞生长速度、DNA合成状态及细胞分裂周期等多项指标进行分析。实验结果指出,在形态学上,经棉酚处理的大鼠前列腺的体积及重量均下降,与对照组有明显差异;二组前列腺的腺泡在组织学结构上也有明显不同:对照组前列腺的腺泡中充满突出的褶襞,由饱满的立柱形的上皮细胞构成这些褶襞及腺泡壁;而在实验组的腺泡中褶襞较少,构成褶襞及腺泡壁的为方形或扁方形的细胞。而腔内具有褶襞的腺泡总量实验组低于对照组约14%。根据体外实验的结果,可见随着棉酚浓度的增加,细胞增殖水平和DNA合成水平也相应下降,而呈剂量及时间的相关效应,其中10μg/ml的剂量能引起最大的抑制作用。根据对细胞分裂周期的分析,在棉酚组细胞进入S期的比例仅为全部细胞的31%,而对照组则为41%,这进一步说明了由于棉酚阻碍细胞进入S期从而抑制了细胞的增殖。     

单宁酸对甜菜夜蛾幼虫生长发育及酚氧化酶活性的抑制作用

采用摄食毒力法研究了单宁酸对甜菜夜蛾[Spodoptera exigua (Hübner)]幼虫生长发育的影响及毒力作用,并分析了单宁酸对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制动力学.结果表明,不同质量浓度单宁酸对甜菜夜蛾初孵幼虫具有较强的毒杀作用,对3龄幼虫的体质量以及蛹质量、化蛹及羽化过程也均有明显的抑制作用(P<0.05).随单宁酸质量浓度的提高或处理时间的延长,甜菜夜蛾初孵幼虫的校正死亡率逐渐增大,单宁酸的抑制生长效应逐渐增强,处理第7天,单宁酸对试虫的半致死浓度(LC50)为3.772 3 g·L-1;8 g·L-1单宁酸对3龄幼虫体质量增长的抑制率最高(35.09%);16 g·L-1单宁酸对蛹质量和羽化率的影响最明显.单宁酸能明显抑制甜菜夜蛾酚氧化酶的活力,且随单宁酸浓度的提高,酚氧化酶相对活力下降趋势明显趋缓,单宁酸对甜菜夜蛾酚氧化酶活性的半抑制浓度(IC50)为0.234 3 mmol·L-1;在加入不同浓度单宁酸的反应体系中,酚氧化酶的活力与酶液量呈明显的线性关系;不同浓度单宁酸对甜菜夜蛾酚氧化酶抑制作用的Lineweaver-Burk双倒数图为1组横轴截距不变的直线;另外,单宁酸和半胱氨酸均可将多巴醌还原为多巴,且还原量均随反应时间的延长而增加.研究结果说明,单宁酸对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用是可逆的,为典型的非竞争性抑制剂,抑制常数(Ki)为0.193 8 mmol·L-1;单宁酸对甜菜夜蛾酚氧化酶二酚酶的抑制作用与L-多巴氧化产物的还原有关.     

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力及其对棉酚敏感性的变化

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力发生明显下降,酶活力的变化形式存在着种间差异。大鼠附睾体及附睾尾精子的ATP酶相对活力分别为附睾头的55.7％及59.6％,而羊则为92.1％及59.8％。 大鼠及羊附睾各区域精子的ATP酶对棉酚抑制作用的敏感程度不同。在5μmol/L的低棉酚的浓度下,大鼠附睾头、体及尾部精子的ATP酶活力分别降至对照组的40.8％、62.7％及81.4％;当棉酚浓度增至40μmol/L时,羊附睾头、体、尾部精子的ATP酶活力才分别降至对照组的63.8％、83.7％及90.7％。作者提出如能使药物作用于附睾精子的敏感区域以干扰其成熟,可能是一条有发展前景的抗生育新途径。     

胆碱脱氢酶的动力学性质

本文对增溶胆碱脱氢酶的稳态初速度及产物抑制动力学做了。底物胆碱和ＰＭＳ的相互影响：变化一个底物的浓度,另一个底物的Ｋｍ及Ｖｍａｘ均变化。该酶的产物三甲胺 地 制表现为对底物胆碱非竞争性而地ＰＭＳ竞争性,在胆碱饱和的情况下,三甲胺乙醛对酶的抑制仍表现为对ＰＭＳ竞争性。这些结果表明增溶胆碱脱氢酶的催化机制搂双底物双产物乒乓机制。１－ＰＣ与９－ＡＣ对增溶胆碱脱氢酶均有抑制作用,且均为混和型抑制,Ｋ１分别     

棉酚对DNA酶某些性质的影响

DNase用棉酚处理后,经聚丙烯酸胺凝胶平板电泳与对照相比,电泳度无明显差异,均呈单一区带,表明棉酚对DNase所带电荷及分子量无影响。棉酚可改变DNase在225nm和280nm波长处的吸收,对DNase的荧光有粹灭作用,表明棉酚破坏了DNase的空间构象。棉酚与DNase的浓度(W/V)为1:1以上时,酶活性受到显著影响,呈现出反竞争性抑制作用。     

陆地棉叶形及棉酚腺体变异的遗传研究

阔叶、有棉酚腺体陆地棉干种子经250Gy^60 Coγ射线辐照,在M1代筛选到鸡脚叶γ-1、γ-2和γ-5突变体。3株突变体自交后代（M2）中,阔叶：鸡脚叶：超鸡脚叶的分离比例符合1：2：1;γ—1和γ-2自交后代中的所有棉株均有棉酚腺体;γ-5自交后代中,有棉酚腺体株：无棉酚腺体株的分离比例符合3：1,阔叶、有棉酚腺体株：阔叶、无棉酚腺体株：鸡脚叶、有棉酚腺体株：鸡脚叶、无棉酚腺体株：超鸡脚叶、有棉酚腺体株：超鸡脚叶、无棉酚腺体株的分离比例符合3／16：1／16：6／16：2／16：3／16：1／16。该结果表明,3株突变体的叶形变异由1对不完全显性基因控制,γ-5的无棉酚腺体基因由1对隐性基因控制,且γ-5的叶形基因与棉酚腺体基因为独立遗传。通过对γ-5自交后代各种变异株的SSR标记研究表明,BNL3649、BNL2440度BNL1414为候选标记。为进一步对突变基因进行定位奠定了基础。