微生物的保存方法(续六) 病原性细菌的保存方法(医学领域)

<正> 一、前言(一)病原性细菌菌株保存的目的保存病原性细菌的目的,有的是为了验证从临床材料分离的病原性细菌的各种性状;也有的是为了研究或生产菌苗而保存菌株,等等。细菌不同于其它生物,其形态特性极为单纯,所以,主要要靠生理生化学、血清学和遗传学的特性进行分类,这就需要性状清楚的标准菌株(type strain)来做为参考对照。但是,生物却具有一种随着逐代相传而发生遗传变异的特性;当然也并不是所有的性质都按相同机率而发生变异的。细菌的世代期限特别短,所以,应考虑在传代培养中或保存中性质上发生变异的可能性,必须择择适合保存目的的保存方法。     

微生物的保存方法(续二)

<正> (11)冷冻干燥法: 1.冻干法的原理及适用范围 (1)冻干法的原理 冻干法的原理简单,即首先使微生物冻结,然后在负压下进行升华、除水。菌体的水分大部分被除掉之后,则细胞的生活反应事实上即将停止,从而得以长期保持其生活状态。冻干有各种方式,这里将包括水升华过程的干燥法统称冻干法。 做为除水的手段,冻干法是个缓和的方法,但对于敏感的生物细胞,如果不加以充分注意,大部分细菌都有可能因冻干处理而死亡。关于菌种保存,可能被认为只要有一点菌活存下来就行了,但这只能是在万不得已的情况下的说法,而要想保持菌株的性质不发生变化,就必须设法尽量使更多的细胞活存下来。特别脆弱的菌另当别论,一般说来都希望活存率能保持在10％以上。 (2)适用范围 冻干法适用于大多数细菌及放线菌,同时病毒、噬菌体、立克次体、霉菌、酵母等,大部分约可用此法保存。     

微生物的保存方法(续五)

<正> (九)非冻干的其他干燥保存法 如前所还,冻干法的基本特征是首先使试料冻结,继而使冰升华。所以,同液态干燥法相比,具有下列优点:(1)可防止发生气泡;(2)操作的全过程可在低温下进行;(3)在干燥过程中保持着多孔状态,不会形成皮膜或干燥不均匀;(4)能保持原形不变,加水后容易溶解。所以,冻干法可以说是微生物干燥保存的主要方法。 但是,冻干法并非在任何情况下总是最好的方法。例如,试料的予冻就有可能对于某种微生物具有极大的伤害。因此,人们又设计了几种不通过结冰进行干燥的方法。这一节就介绍此类干燥保存方法。 用土、砂等也是一种干燥方法,是一向应用甚广的主要的微生物保存方法,即前述的载体保存法。     

医学微生物学教学用菌种保存方法的改进

细菌菌种的保存方法,目前以冷冻干燥法最好,但花费的代价太大。以前使用的半固体琼脂保存法,需要半学期转种一次,而且一些营养要求稍高的菌种还不能用此法保存。近几年我们试用鸡蛋斜面培养基保存细菌菌种,简便易行,效果较好。其配方为:新鲜全鸡蛋2份,     

纳米细菌的分离培养和保存方法探讨

目的 以钙化的胎盘组织为例,寻求在钙化组织中分离纳米细菌的最佳方法,以便更多疑似与纳米细菌感染有关的疾病得以准确分离出纳米细菌菌株,并探讨培养和保存纳米细菌的最适宜的条件.方法 (Ⅰ)胎盘钙化组织标本分别用盐酸脱矿与超声振荡脱矿的方法分离纳米细菌,计算其分离阳性率.(2)分离出的纳米细菌分别用细胞培养箱与细菌培养箱培养1个月,利用分光光度计记录两种条件下纳米细菌浓度的变化,并描绘生长曲线.(3)分别用4、- 20与- 80℃冰箱保存钙化组织和纳米细菌,记录纳米细菌分离和复苏的生长状况并绘制生长曲线.结果 (1)钙化组织用盐酸脱矿更易分离得到纳米细菌.(2)细胞与细菌培养环境下纳米细菌的生长速度并无明显差别.(3)4℃保存钙化组织和纳米细菌对于其分离和复苏都要优于- 20℃和- 80℃.结论 对钙化组织进行盐酸脱矿可以更好的分离出纳米细菌,并且可以在细菌培养箱内培养纳米细菌,新鲜钙化组织标本和纳米细菌可以短时间保存在4℃.     

拟南芥悬浮细胞系的玻璃化法超低温保存

悬浮培养细胞系是植物生理生化研究的好材料之一。为了保持细胞系的遗传稳定性,需要采用超低温保存技术。玻璃化法是一种不用程序降温仪的超低温保存技术。本文报道了从模式植物拟南芥建立悬浮细胞系并对其进行玻璃化法超低温研究。细胞经过合理的预培养处理和保护剂处理,直接投入液氮贮存。复温后的细胞能恢复生长,恢复生长的细胞保持着植株再生能力。国外,拟南芥悬浮细胞系的程序降温法保存和包埋脱水法保存已经报道,玻璃化法保存尚未见报道。     

谷子胚性细胞系的超低温冰冻保存

超低温冰冻保存是保存生物材料的一种方法。目前禾本科植物原生质体培养的主要问题之一是胚性细胞系的状态不稳定。试验比较了影响谷子(Setaria italica(L.)Beauv)胚性细胞系超低温冰冻保存的因素如：不同的冰冻保护液组成,不同培养时间的胚性细胞系以及细胞系的恢复生长和原生质体培养。结果表明：本实验采用超低温冰冻保存方法不会影响胚性细胞系原生质体的培养特性,能够保持或提高原生质体培养的植板率。     

真空冷冻干燥法保存菌种

我们测验了在室温(波动为5—36℃)贮藏4年半一8年,用脱脂牛奶作保护剂,真空冷冻干燥保存的559种20lo株细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌的存活力,以及其中部分菌株的主要生理特性。贮存在室温的真空冷冻干燥法保存的84种484株细菌,180种565株放线菌,59种459株酵母菌和236种502株丝状真菌的存活力分别是467(96·5％)、516(91．33％)、394(85．83％)和439(87·45％)。我们还观测了贮藏在5℃,1957年真空冷冻干燥法保存的细菌。在这种条件下保存16年的32种126株细菌,103株(81．74％)保持着活力,除个别菌株外,没有任何种的死亡。所测定的17株真空冷冻干燥保存的菌种的生理特性,与定期移植保存的同一菌株对比结果,除两株大肠杆菌,其中l株谷氨酸脱羧酶活力减退外,其他菌株都没有明显的变化。     

幽门螺旋菌保存方法的初步研究

幽门螺旋菌(HP)过去称它为幽门弯曲菌(CP)是近年来从人体胃组织中发现的一种细菌,自1982年首次培养成功以来,已做了大量的研究工作,它与胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系.幽门螺旋菌营养要求和培养条件都比较高,而且生物学特性,经多次传代比较容易产生变异,特别是菌种保存方面还存在不少问题,该菌的长期贮存很困难,而长期贮存对该菌的药敏,生物学特性的研究,动物模型的建立都是非常重要的。为了开展对幽门螺旋菌与慢性胃炎和消化性溃疡关系的基础研究,我们对临床胃及十二指肠患者粘膜分离出的幽门螺旋菌进行传代培养,在10％兔全血的布氏肉汤琼脂培养基上,在混合气体(10％CO_2,5％O_2,85％N_2条件下),4℃冰箱中保存于不同时间检查了存活情况,生物学特性的比较。实验表明,用这种方法保存细菌存活率,菌体形态生物学特性保存较好,取得了较满意的结果.     

介绍一种长期保存细菌的合成保养液

合成保养液具有细菌生存所需要的各种营养物质 ,并能提供新陈代谢中的能量 ,使细菌保存 1 0年之久 ,是一种长期保存细菌良好的培养基。     

固氮蓝藻的干燥保存试验

藻种或菌种的保存方法,在实验室中,一般是采用接种在固体培养基上,在较低的温度下进行保存,并需要经常进行移种培养;在生产上,固氮细菌一般是采用泥炭土等为基体混合保存,作为商品细菌肥料,体积重量都很大而所合的细菌数量有限,增加了运输上的困难。     

呼吸道合胞病毒的冻干保存

呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原之一。但该病毒很不稳定,常规法冻干保存往往丧失活性。因此,国内外多采用液氮保存,耗费大,运送不便。国内也有加等量甘油-20℃保存     

粪微生态制品保存方法

目的探索粪微生态制品体外保存方法,为粪微生态制品的保存及运输提供依据。方法将新鲜粪微生态制品按照加入甘油、蔗糖保护剂的不同以及制备冻干粉的方法分为6组,用10倍稀释法稀释粪菌液,微量点样法将各浓度的粪菌液涂于Wilkins-Chalgren培养基,30℃恒温箱中培养并计数。在保存2周、1个月、2个月、3个月时复苏部分微生态制品,用同样的方法培养并计数。结果粪微生态制品活菌数随时间递减,在2周内下降速度最快,递减105~107数量级。结论甘油、蔗糖这两种保护剂以及冻干粉的制备对粪微生态制品的保存差异不大,新鲜粪微生态制品仍为最佳选择。     

菌种保存方法对冰核细菌冰核活性的影响

本文测定了5种保存方法及3种保存温度,对4株代表3个属4个种(变种)的冰核细菌冰棱活性的影响。结果表明,不同保存方法对冰核细菌的存活力和冰核活性存在着不同程度的影响,保存温度越高,对冰核活性的影响越大,不同菌种对保存的敏感性不同。所适合的保存方法也不同。真空冷冻干燥和灭菌水于-20℃冷冻保存对各菌株的存活力和冰核活性的影响都较小,适用于一般冰棱细菌的长期保存。而10%甘油冷冻保存则不适用于冰核细菌的保存。     

菌种的麦粒保存法

我国长期以来民间就有用麦麸保存某些霉菌(如根霉,曲霉等)的习惯。国内菌种保藏机构曾用麦片成功地保存了一些放线菌达4年。但用灭菌小麦粒培养保存放线菌、细菌、酵母和不形成孢子的霉菌则国内未见报道。我们于     

自然博物标本保存法(第一卷)

怎样保藏各种珍贵动物标本,使之经久不变并保持其自然状态是从事研究工作与博物馆科学普及工作者以及学校教学各方面所面临着的一个问题。本书编者根据多年教学经验,从实际工作中深切体会到这种需要搜集文献资料并结合本人和其他作者尚未发表过的方法编著成书,先后三年间由于读者需要已出两版。第一卷是无脊椎动物标本制作保存法,此卷共分两个部分,第一部分划分21节,从原生动物起依照分类系统     

生物杀虫剂-昆虫病原线虫的培养技术

昆虫病原线虫是新型的生物杀虫剂,对钻蛀及土栖性害虫防效较好,具有部分替代化学农药的潜力。昆虫病原线虫的产业化培养是昆虫病原线虫商业化应用的基础。本文介绍了目前世界上常用的昆虫病原线虫的培养方法,包括活体培养、半固体培养和液体培养的技术,这些技术的应用有助于昆虫病原线虫的种质保存及培养,为拓展昆虫病原线虫的产业化生产和应用奠定了基础。     

空肠弯曲菌的保存方法研究

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)目前已被确认是重要的肠道致病菌之一。由于本菌生活力弱,易于死亡,不好保存,在一般常用的培养基上存活时间极短约3—5天,给实际工作造成不少困难,如何保存菌种是一个急待解决的问题。为了提供一种较好的保存空肠弯曲菌的方法,作者选用了五种培养基,比较观察了18株空肠弯曲菌保存在不同条件下的存话期及变异情况,其结果表明：用1、2号培养基的培养物保存若放置4一10℃冰箱,前者经130天,后者经80天其存活率均为100％;在保存210天时,两种培养基的     

呼吸道感染病原性细菌的临床检验研究

目的:研究分析呼吸道感染病原性细菌的临床检验工作。方法:使用常规的留取方法完成痰液的留取工作,同时选取不同的种类培养基完成培养分离工作。分析检测结果。结果:分离结果因为病原性细菌以及培养基的不同而不同,也就是说在不同培养基上的不同病原性细菌具有不同的分离结果,由多到少按照分离数排列得到,铜绿假单胞菌最多、副流感嗜血杆菌其次、再次是白色念珠菌、排行最后的是流感嗜血杆菌等。结论:药物敏感试验可以选取培养在患者痰液中的病原性细菌作为研究对象,在上述的基础上积极的帮助患者完成敏感抗菌药物的选取,为患者的临床诊断以及临床治疗创造一定的前提条件。     

细菌性抗原的快速检测方法

<正> 传统上,病原性微生物引起的感染,系将病原性材料接种于适宜的培养基上进行培养,当生长后再作进一步的试验进行鉴定。这些方法检测速度慢,取决于细菌的生长速度。最近以来,转向于直接由病理材料中检测细菌性抗原及其他产物的方法上来。如果使用的方法敏感性和特异性高,则可能不需要等待被检菌在人工培养基上生长即可作出鉴别。除了对敏感性试验方法和有关被检菌其他资料的需要外,这些方法一般不能代替培养法,而只能作为一种辅助性的方法使用。本文仅就由体液中检测细菌性抗原的一些免疫学方法和检测细菌成份及其代谢产物的一些非免疫学方法进行综述。