八种常见国产蛇毒对白血病细胞杀伤作用研究

用体外细胞培养的方法,观察了我国常见的八种蛇毒（眼镜蛇毒、蝮蛇毒、眼镜王蛇毒、竹叶青蛇毒、蝰蛇毒、烙铁头蛇毒、银环蛇毒及金环蛇毒）对人白血病Ｔ淋巴细胞系ＣＥＭ细胞、人单核细胞白血病Ｕ９３７细胞及人早幼粒细胞白血病ＨＬ６Ｏ细胞的生长曲线、存活率及分裂指数的影响。结果发现八种常见蛇毒中眼镜蛇毒对白血病细胞的杀伤作用最强,蝮蛇毒次之（与空白对照组相比,Ｐ值均小于０．０１）,其余六种蛇毒的作用则很弱。但无论是眼镜蛇毒还是蝮蛇毒,其杀伤淋巴细胞白血病、单核细胞白血病及早幼粒细胞白血病细胞的作用之间无显著差异。     

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

蛇毒含有多种酶类和不同生理与药理活性蛋白。经研究证实它具有抗肿瘤作用 ,能对多种肿瘤细胞有杀伤和抑制作用。作者为研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病 Jurkat细胞凋亡作用并探讨其机理 ,采用 MMT法测定半数抑制浓度( IC50 )及生长曲线 ,用流式细胞仪 ( FCM) AnnexinV FITC/PI法检测细胞凋亡率 ,PI染色法检测细胞周期 ,用流式细胞计 FCM及 Western- blot检测Jurkat细胞 Bcl- 2蛋白表达。结果 :浙江蝮蛇毒处理后 Jurkat细胞生长受到明显抑制 ,且呈剂量依赖关系。 48h IC50 值为 ( 9.78± 0 .38) μg/ml。给浙江蝮蛇毒 5μg/ml能诱导…     

蛇毒细胞毒素抗肿瘤作用的研究进展

蛇毒细胞毒素是蛇毒的主要毒性组分之一,约占蛇毒总蛋白含量的25%～60%,具有广泛的生物学活性,能引起可兴奋性细胞如骨骼肌、心肌和神经组织去极化,可促进细胞膜通透性,轴突传导阻滞,以及溶解肿瘤细胞等。自从1936年Sarker从眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中分离出一个能使离体猫心停搏的毒素以来,多种类似的毒素如心脏毒素、细胞毒素、骨骼肌去极化因子、眼镜蛇碱、直接溶血因子等相继被分离出来,基于这些碱性多肽都作用于细胞膜的共性,又被称为膜毒素(Membranetoxin)或膜活性多肽(Membraneactivepolypeptide),有足够的证据表明,这些物质或是…     

几种蛇毒与鲎试剂产生凝胶反应的实验研究

目的探讨蛇毒能否与鲎试剂产生凝胶反应．建立中药及有效成分抗蛇毒作用的试验途径。方法采用鲎试剂试管凝胶反应法。结果不同的蛇毒能使鲎试剂产生凝胶反应的浓度不同,眼镜蛇毒与竹叶青蛇毒为5μg／ml．五步蛇毒0．32μg／ml．蝮蛇毒37．5μg／ml,蝰蛇毒2．5pg／ml。结论蛇毒能与鲎试剂产生凝胶反应。     

大力王藤抗蛇毒及细菌内毒素的实验研究

目的探讨大力王藤药材抗蛇毒与细菌内毒素的作用。方法采用鲎试剂凝胶法测试大力王藤抗蛇毒及细菌内毒素的效果。结果大力王藤药液浓度为2 g/ml时,有抗眼镜蛇、竹叶青蛇、五步蛇毒和细菌内毒素的凝集作用;药液浓度为1.6 g/ml时,有抗蝰蛇毒的凝集作用;药液浓度为0.8 g/ml时,有抗蝮蛇毒的凝集作用。结论大力王藤有一定的抗蛇毒与细菌内毒素作用。     

蛇伤药酒体外抗5种蛇毒的实验研究

目的探讨蛇伤药酒抗五步蛇、竹叶青蛇、眼镜蛇、蝰蛇、蝮蛇蛇毒的效果。方法采用鲎试剂试管凝集反应法。结果蛇伤药酒浓度为1.0 ml/ml时,对5种蛇毒均有破坏产生凝胶反应的作用;浓度为0.5ml/ml时,对五步蛇、竹叶青蛇、眼镜蛇蛇毒有破坏产生凝胶反应的作用;浓度为0.3 ml/ml时,仅对五步蛇毒有破坏产生凝胶反应的作用;浓度降至0.1 ml/ml时,对5种蛇毒均无破坏产生凝胶反应的作用。结论蛇伤药酒有较好的抗蛇毒作用,且对五步蛇毒作用最强。     

南蛇簕抗眼镜蛇毒的实验研究

目的探讨南蛇簕抗眼镜蛇毒的作用。方法抗眼镜蛇毒采用鲎试剂试验法。结果眼镜蛇毒与0.5EU/ml鲎试剂产生凝集反应的浓度在7.81μg/ml以上;南蛇簕提取液(含生药)为0.5g/ml浓度时可抗10倍量眼镜蛇毒的凝集反应。结论草药南蛇簕有较强的抗眼镜蛇毒作用。     

广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒的 体外抑菌作用

目的初步研究广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒的体外抑菌作用,并比较各种蛇毒对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌的抑菌效果。方法观测4种菌的生长情况。采用微量肉汤稀释法检测广西眼镜蛇、银环蛇和五步蛇蛇毒对4种细菌的抑菌作用,分析比较不同蛇毒的抑菌效果和孵育时间对抑菌效果的影响。结果广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌均有一定的抑制作用,而银环蛇蛇毒未见明显抑制作用(1 280μg/mL)。广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒对于4种菌孵育48、72 h的MIC_(80)、MIC_(50)值均比孵育24 h提高2倍或以上。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌的抑菌效果:广西眼镜蛇蛇毒五步蛇蛇毒银环蛇蛇毒;甲型溶血性链球菌的抑菌效果:五步蛇蛇毒广西眼镜蛇蛇毒银环蛇蛇毒。结论广西眼镜蛇和五步蛇蛇毒均具有一定的体外抑菌作用,且对于不同种类的细菌抑菌活性不同,银环蛇蛇毒未发现有明显的体外抑菌作用。     

黑皮蛇、山白菜抗五种蛇毒的实验研究

目的研究黑皮蛇、山白菜抗五种蛇毒的药理作用。方法采用鲎试剂凝胶法对黑皮蛇、山白菜抗五种蛇毒的作用进行实验研究。结果黑皮蛇药液浓度在0.4g/ml以上、山白菜药液浓度在0.2g/ml以上,均能抗五种蛇毒与鲎试剂的凝集反应。结论黑皮蛇、山白菜有较强的抗眼镜蛇毒、竹叶青蛇毒、蝰蛇毒、蝮蛇毒和五步蛇毒作用。     

GnRH-PEⅡ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测

目的：制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素（GnRH Ⅰ）为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ（PEⅡ）为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶（rEK）切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa、A549、HepG-2、SP2/0和鸡胚成纤维细胞（CEF）的体外细胞毒作用。结果：成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94％。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa、A549、HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml、13.74μg/ml、16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论：重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。     

实验证明三种蛇毒有抗癌作用

中国科学院昆明动物研究所的研究人员近年来将眼镜蜿科的蛇毒对腹水癌细胞的作用进行研究,经过动物体外试验、体内试验和接种率试验观察发现,眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒有抗癌作用,其中以眼镜王蛇毒、金环蛇毒和金环蛇毒细胞毒素抗癌作用最强,     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1对多药耐药K562/A02细胞株作用研究

目的从眼镜蛇毒组分CⅡ中寻找抗肿瘤有效组分并研究其对多药耐药K562/A02细胞的杀伤作用。方法用SephadexG-75、SephadexG-25层析法从蛇毒中分离、纯化抗肿瘤有效组分,经SDS-PAGE电泳、HPLC分析、鉴定,用MTT法观察细胞毒性作用。结果CⅡ-3-1(近似电泳纯)的LD50为(0.622±0.007)mg/kg。CⅡ-3-1对耐药K562/A02及敏感K562细胞均有抑制作用。结论中华眼镜蛇毒中组分CⅡ-3-1对K562及K562/A02细胞都有显著杀伤作用。     

TRAIL与顺铂联用对人骨肉瘤细胞杀伤作用的实验研究

目的探讨TRAIL与顺铂联合应用对人骨肉瘤细胞的杀伤作用.方法将TRAIL与顺铂单独及联合应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞,采用MTT法测定细胞抑制率,于倒置相差显微镜、荧光显微镜、扫描及透射电镜下观察细胞的形态学改变及超微结构变化.结果 50ng/ml的TRAIL与5μg/ml顺铂合用于OS-732细胞24小时后,细胞抑制率为84.37%,明显高于单用TRAIL(50μg/ml)时的9.68%及单用顺铂(5μg/ml)时的24.39%(P<0.01).细胞的形态与超微结构观察均显示,合用比单用促凋亡效应更显著.结论 TRAIL与顺铂合用,可高效杀伤人骨肉瘤细胞,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的.     

眼镜蛇毒抗炎成分研究概况

<正>蛇毒是一种天然的生物学资源,是由蛇毒腺分泌的混合物,主要用于防卫和消化捕获的食物。蛇毒具有特殊的腥味,弱酸,其中含有多种生物活性物质,属于生物毒素。主要含神经毒素、心脏毒素、蛇毒因子和神经生长因子等,不同蛇种分泌的蛇毒成分也有所差异。蛇毒含水量在70%左右,每100ml毒汁中可得干毒20~29g。蛇毒的干物质中90%以上是蛋白质,是其毒性和生物学活性的主要成分。祖国传统医学认为,眼镜蛇及其毒性成分可通经络,祛风湿,并具有强     

眼镜蛇毒神经生长因子抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡

目的:从眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF),观察眼镜NGF对肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡活性的影响,进一步为蛇毒NGF在抗肝纤维化治疗提供依据。方法:采用shephadex G-75和CM Sepharose CL-6B二步柱色谱对眼镜蛇毒NGF进行纯化分离;PC12细胞测定各洗脱峰的活性,再用SDS-PAGE鉴定具有NGF活性洗脱峰的纯度和相对分子质量。实验设立空白对照和NGF处理组,分别作用于HSC-T6,培育相应时间,MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞活力影响;HE染色、紫外激光显微镜与透射电镜观察HSC-T6细胞的形态学变化;TUNEL、流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响。结果:眼镜蛇毒经PC-12细胞鉴定第Ⅵ峰具有NGF活性;SDS-PAGE检测为电泳纯,相对分子质量为22.3KD;NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(2μg/ml NGF的抑制率为49.66%±6.50%,P<0.05;6.25μg/ml NGF的抑制率为71.33%±1.53%,P<0.05);TUNEL法检测发现NGF干预组的凋亡率28.71%±1.59%(2ug/ml NGF)和34.4%±2.49%(5μg/mlNGF)明显高于对照组的15.85%±1.58%(P<0.05);流式细胞仪也有同样的发现,NGF干预组的凋亡率16.12%±3.02%(2 ug/mlNGF)和21.15%±3.31%(5μg/ml NGF)明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05)。结论:眼镜蛇毒NGF能抑制肝星状细胞HSC-T6增殖并诱导其凋亡。     

10种广东本地清热解毒中草药体外抗蛇毒作用的实验研究

目的 研究10种广东本地清热解毒中草药的抗蛇毒作用.方法 采用鲎试剂试管凝集反应法.结果 10种广东本地清热解毒中草药的药液浓度在0.5 g/ml以上时均有抗五步蛇、眼镜蛇、竹叶青蛇、蝰蛇、蝮蛇蛇毒的作用;降低药液浓度后,不同的药物对不同蛇毒抗毒作用有所不同.结论 广东土牛膝等10种本地清热解毒中草药对5种蛇毒有直接的...     

广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

目的对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A2(PLA2)进行分离纯化,测定其对肝星状细胞HSC-T6的增殖抑制作用。方法采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA2活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA2对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,确定其凋亡的最小毒性浓度。结果 Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA2活性,且达到电泳纯,经NanoLCESI-MS/MS鉴定其为PLA2,分子量约为14.06kD;PLA2在0~1μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4~16μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数降低。结论采用Sephadex G-50、CM-Sepharose CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA2活性的磷脂酶A2;广西眼镜蛇毒PLA2对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA2对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml。     

金枝蛇伤药酒体外抗蛇毒与抗菌的实验研究

目的探讨金枝蛇伤药酒抗5种蛇毒与4种细菌的效果。方法采用鲎试剂试管凝集反应法检测金枝蛇伤药酒对蝰蛇、竹叶青蛇、五步蛇、眼镜蛇、蝮蛇蛇毒的抗毒效果,采用滤纸片法检测金枝蛇伤药酒对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌的抑制效果。结果金枝蛇伤药酒浓度为1.0ml/ml时,可抑制以上5种蛇毒;浓度为0.5ml/ml时,可抑制五步蛇、竹叶青蛇、眼镜蛇蛇毒;浓度为0.3ml/ml时,仅能抑制五步蛇蛇毒;浓度为0.1ml/ml时,无抑制作用。金枝蛇伤药酒对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌抑制作用较强,对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌也有一定的抑制作用。结论金枝蛇伤药酒有较好的抗蛇毒与抗菌的作用。     

乌梢蛇血清对白眉蝮等3种蛇毒解毒作用初探

目的 探讨乌梢蛇血清对孟加拉眼镜蛇、白眉蝮、莽山烙铁头3种毒蛇的解毒作用。方法 给18～22g昆明小鼠分别注射盂加拉眼镜蛇毒、白眉蝮蛇毒及莽山烙铁头蛇毒后,随机分组注射不同浓度的乌梢蛇血清,并观察对3种蛇毒的解毒效果。结果 发现（1）乌梢蛇血清对盂加拉眼镜蛇毒有解毒作用．且注射蛇毒与4ml／kg的血清混合液的解毒作用最好,但随着间隔时间的延长,解毒作用逐渐减弱;（2）乌梢蛇血清对白眉蝮蛇毒有解毒作用,且注射量为1ml／kg和2ml／kg时出现了拮抗作用;（3）乌梢蛇血清对莽山烙铁头蛇毒有解毒作用,但莽山烙铁头蛇毒对血清注射量和间隔时间不敏感,在血清注射量为2ml／kg时和注射蛇毒10min后,再注射4ml／kg的血清时出现了拮抗作用。（4）只给小鼠注射不同量的乌梢蛇血清,发现乌梢蛇血清对小鼠无明显的毒副作用。结论 乌梢蛇血清对3种蛇毒均有解毒作用。     

《动物学研究》增刊简介

《动物学研究》第2卷第4期增刊(1981) 本期增刊为“蛇毒研究与蛇伤治疗”。主要内容是:福建产圆斑蝰蛇(Vipera russclli siamensis)蛇毒磷酯酶A的分离纯化及部分性质;毒性磷酯酶A_2的氨基酸组成和N-末端部分氨基酸顺序测定;浙江蝮蛇毒碱性磷脂酶A的分离纯化及性质;我国10种蛇毒磷脂酶A活力比较;广东金环蛇细胞毒素Ⅷ的化学组成和部分一级结构;眼镜蛇膜毒素对菠菜叶绿体光合膜的影响;中华眼镜蛇毒膜毒素对鼠肝线粒体的作用;眼镜王蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离纯