动物组织及细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ提取及解结活性的比较研究

 本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及组织的状态均对酶活力有影响。     

DNA拓扑异构酶Ⅰ生物学活性的比较研究

测定了3T3细胞、人和大鼠一些组织中DNA拓扑异构酶Ⅰ的活性;估计了核酸内切酶对拓扑酶Ⅰ松弛活性测定的干扰程度;发现增殖组织全细胞抽提液中酶比活高于正常分化组织,而且在异常增殖组织中酶比活的增高更为显著。     

DNA拓扑异构酶ll和某些抗癌药物的关系

 <正> 长期以来,人们一直在寻找抗癌药物的靶子,以阐明抗癌药物的作用机理,从而为设计更有效的抗癌药物提出理论根据。近来,发现不少抗癌药物,无论是与DNA嵌合的药物或不与DNA嵌合的药物都可以通过DNA拓扑异构酶Ⅱ(DAN Topoisomerase Ⅱ)的作用,形成稳定DNA-酶复合物(此酶作用的中间产物),从而导致处于S期或G_2期的DNA断裂,达到杀死细胞的目的。DNA拓扑异构酶Ⅱ可使DNA的双链同时断裂且在瞬间又接连起     

Topotecan对癌细胞系SUD4和DOHH2的拓扑异构酶(Ⅰ,Ⅱ)的毒性作用

Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ（ＴＰＴ）是类似天然抗癌药物喜树碱的半合成新药．为了阐明ＴＰＴ对拓扑异构酶的毒性作用,将癌细胞系ＳＵＤ４及ＤＯＨＨ２培养在不同浓度ＴＰＴ的培养基中,分别在培养８ｈ、１８ｈ后取样进行测试．结果表明：ＴＰＴ不仅作用于拓扑酶Ⅰ,也作用于拓扑酶Ⅱ,尽管对酶Ⅱ的影响非常小．应用新的流体细胞测量仪（ＦＡＣＳ－Ｖａｎｔａｇｅ）及免疫分析法对细胞培养时间、ＴＰＴ的浓度与拓扑酶中毒程度的动力学关系进行了研究．上述研究显示ＴＰＴ能影响拓扑异构酶Ⅱ（新观点）,同时强调在抗癌化学治疗中应结合使用酶Ⅰ及酶Ⅱ抑制剂．     

核多角体病毒感染昆虫细胞的DNA拓扑异构酶性质的研究

核多角体病毒(Nuclear polyhedrosis virus)的核酸是双股环状DNA,在病毒颗粒中呈超螺旋状态。超螺旋DNA复制时,一般皆有超螺旋解旋过程。为了解这一机制,本文报道了从NPV感染的家蚕中肠组织中分离细胞核,经过羟基磷灰石、磷酸纤维素柱层析,ssDNA-纤维素亲和层析,纯化了DNA拓扑异构酶I,SDS-PAGE测定分子量为47kd,最适Mg~(++)浓度约为5mM。AcNPV感染的TN368细胞DNA拓扑异构酶I总活力较正常细胞酶活力高1～3倍,且活力的提高与病毒增殖平行。讨论了昆虫细胞DNA拓扑异构酶I的性质及其与NPV复制的关系。     

蛋白质磷酸化和脱磷酸化对DNA拓扑异构酶Ⅰ活力调节的研究

本文以小鼠正常肝和H_(22a)腹水型肝癌细胞为材料,从中分离出纯度较高的拓扑异构酶Ⅰ和细胞质酪氨酸蛋白激酶(TPK)来研究磷酸化和脱磷酸化对拓扑异构酶Ⅰ活力的调节。结果表明TPK能活化拓扑异构酶Ⅰ。另外还发现PKA和碱性磷酸酶(CIP)能分别活化和抑制拓扑异构酶Ⅰ。     

用人DNA拓扑异构酶Ⅰ单克隆抗体探测此酶的不均一性

 从慢性淋巴性白血病人的周血白细胞中纯化了DNA拓扑异构酶Ⅰ,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,以蛋白质染色只有一条100kD的肽链,而用此酶的单克隆抗体探测同一纯化的酶则出现100kD,90kD,83kD,80kD和74kD五条肽链,并从部分纯化的酶制剂中检测到一条34kD的小分子具有相当高的酶活性。用此抗体进一步探测了不同类型白血病人周血白细胞的DNA拓扑异构酶,发现明显的差异,不同分子量仍具有此酶的活性,说明不同细胞固有DNA拓扑异构酶Ⅰ的不均一性。     

TopoⅡα在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）在乳腺癌组织中的表达规律以及在乳腺癌化疗的预测价值。方法：应用SP免疫组织化学方法,检测资料完整的126例浸润性乳腺癌组织标本。结果：拓扑异构酶Ⅱα在126例浸润乳腺癌组织中表达的阳性率为49.2%,其与乳腺癌淋巴结转移、HER-2蛋白表达密切相关（P〈0.05）,而与患者年龄、月经情况、肿瘤大小、临床分期、ER、PR状态无相关（P〉0.05）。结论：拓扑异构酶Ⅱ在乳腺癌组织中的高表达与乳腺癌的发生发展转移密切相关,TopoⅡα可作为指导乳腺癌化疗的重要指标和判断乳腺癌预后的参考指标。     

新生霉素抑制拓扑异构酶Ⅱ对多瘤病毒DNA合成的影响

本文报告了Ⅱ型拓扑异构酶抑制剂——新生霉素对多瘤病毒DNA合成的抑制作用,发现新生霉素对细胞和病毒DNA的体外合成具有不同的抑制曲线。新生霉素在复制过程中抑制复制中间物转变成成熟的病毒DNA分子的过程,同时影响病毒DNA分子的负超螺旋密度。本文结果提示Ⅱ型拓扑异构酶是病毒DNA复制末期所必须的酶。     

酶消化对肿瘤浸润淋巴细胞活力影响的研究

本文系统地研究了酶消化（胶原酶Ⅳ、胶原酶Ⅱ、透明质酸酶和胰蛋白酶）对肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）活力、增殖力等影响,并用单个酶消化法与Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ法比较。结果提示：胶原酶Ⅳ或胶原酶Ⅱ消化肿瘤组织块时对ＴＩＬ细胞活力、增殖力损伤小;透明质酸与胰蛋白酶消化对ＴＩＬ细胞活力、增殖力损伤大。在３７℃,１ｈ消化组与４℃,２４ｈ消化组对同一来源肿瘤组织酶消化配对比较中,结果提示同一酶４℃,２４ｈ消化比３７     

DNA拓扑异构酶的研究进展

<正> 七十年代以来,发现了一类能改变DNA拓扑性质的酶,称之为拓扑异构酶(简称拓扑酶)。拓扑酶在许多与DNA有关的遗传功能中具有重要的作用。因此,对拓扑酶的研究一直非常活跃。这类酶的活性表现在体外系统中催化DNA的各种拓扑异构化反应。然而在体内,特别在动物细胞中,拓扑酶的生物学功能仍不清楚。虽然在体外测定系统中,拓扑酶可以单独催化DNA的各种拓扑异构化反应,但近年来的结果显示,其体内活性似乎需要其他蛋白的参与,同时可能存在共价修饰的调控机制。笔者的工作涉及一种动物温度敏感变     

酶消化对肿瘤浸润淋巴细胞活力影响的研究

本文系统地研究了酶消化(胶原酶Ⅳ、胶原酶Ⅱ,透明质酸酶和胰蛋白酶)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)活力、增殖力等影响,并用单个酶消化法与Rosenberg法比较。结果提示:胶原酶Ⅳ或胶原酶Ⅱ消化肿瘤组织块时对TIL细胞活力、增殖力损伤小;透明质酸酶与胰蛋白酶消化对TIL细胞活力,增殖力损伤大。在37℃,1h消化组与4℃,24h消化组对同一来源肿瘤组织酶消化配对比较中,结果提示同一酶4℃,24h消化比37℃1h消化对TIL细胞增殖力损伤小,与Rosenberg方法比较中也发现单一胶原酶消化比三酶联合消化影响小。配对各实验组TIL细胞~3H-TdR掺入率分析中,也反映了类似变化。本文经4℃,24h胶原酶Ⅳ消化后培养的TIL细胞在60天和75天仍对自身靶细胞有杀伤力。     

大白鼠DNA拓扑异构酶Ⅰ生物学性质的研究

对大白鼠组织作DNA拓扑弄构酶Ⅰ(拓扑酶Ⅰ)活力测定,见酶活力出现在胚胎早期,在胚胎发育过程及出生后不同年龄期,酶活力基本稳定;几种成年大鼠组织的酶活力彼此无显著差异;肝细胞再生及癌变,酶活力亦无显著变化。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ的多态转换模型

DNA拓扑异构酶Ⅱ是一种分子马达,它利用ATP水解产生的化学能,切断一条双链DNA片段(G segment),并让另一条双链DNA片段(T segment)从缺口处通过.对DNA拓扑异构酶Ⅱ的工作循环研究将有助于阐明其工作机理.本文根据已有实验资料,利用主方程方法构建了DNA拓扑异构酶n状态转变的随机跃迁模型,求得系统...     

拓扑异构酶Ⅱ的结构、功能及作用机制研究进展北大核心CSCD

拓扑异构酶是存在于细胞核内的一类酶,它们能够催化DNA链的断裂和结合,从而调控DNA的拓扑状态,在基因复制、转录、重组、修复和染色体重塑过程中参与了DNA超螺旋结构模板的调节。拓扑异构酶通过催化切断DNA链的磷酸二酯键,产生DNA缺口而发挥作用,这种缺口可以改变DNA分子的拓扑结构,从而解决DNA缠结状态这一问题。在哺乳动物中,主要存在I型和II型两种拓扑异构酶。拓扑异构酶I(type I topoisomerase,Top1)催化产生DNA分子上的单链缺口,而拓扑异构酶II(type II topoisomerase,Top2)则催化产生DNA分子上的双链缺口。Top2在哺乳动物中又分为α亚型和β亚型。其中,Top2α的功能主要与细胞的增殖和多潜能性相关,而Top2β在神经发育中具有重要作用。本文就Top2的结构、功能和作用机制的相关研究进展作一综述。     

DNA拓扑异构酶的分型

ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用,如在ＤＮＡ复制、修复、转录、重组中解开在复制和重组...     

红树林内源生真菌Sporothrix sp.#4335代谢产物的研究

Diaporthin(1),松胞素4(2)是由一株红树林共生真菌Sporothrix sp.#4335中分离的两个化合物,其结构通过光谱分析确定。并首次对化合物1进行了抗人的肝癌细胞hepG 2及抑制人的DNA拓扑异构酶I(hTopoⅠ)的活性测试,结果显示,化合物1有一定的抗肿瘤活性(IC50为23μg/mL),及很强地抑制拓扑异构酶I的活性。     

拓扑异构酶Ⅱ的结构、功能及作用机制研究进展

拓扑异构酶是存在于细胞核内的一类酶,它们能够催化DNA链的断裂和结合,从而调控DNA的拓扑状态,在基因复制、转录、重组、修复和染色体重塑过程中参与了DNA超螺旋结构模板的调节。拓扑异构酶通过催化切断DNA链的磷酸二酯键,产生DNA缺口而发挥作用,这种缺口可以改变DNA分子的拓扑结构,从而解决DNA缠结状态这一问题。在哺乳动物中,主要存在I型和II型两种拓扑异构酶。拓扑异构酶I(type I topoisomerase,Top1)催化产生DNA分子上的单链缺口,而拓扑异构酶II(type II topoisomerase,Top2)则催化产生DNA分子上的双链缺口。Top2在哺乳动物中又分为α亚型和β亚型。其中,Top2α的功能主要与细胞的增殖和多潜能性相关,而Top2β在神经发育中具有重要作用。本文就Top2的结构、功能和作用机制的相关研究进展作一综述。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ的结构和作用原理

1976年美国国立卫生研究所的Ｇｅｌｌｅｒｔ等从大肠杆菌中提取到解旋酶 (ｇｙｒａｓｅ ,也叫细菌ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ ,以下简称ＴｏｐｏⅡ )以来 ,对ＴｏｐｏⅡ的作用机制一直存在争议。Ｔｓｅ (1 980 )报道 ,ＴｏｐｏⅡ能同时打断ＤＮＡ的两条链 ,ＴｏｐｏⅡ的两个亚基通过磷酸化酪氨酸残基酯键分别与断开的ＤＮＡ的两个 5′末端连接 ,并互相错开 4个碱基对 ,以便让另一股ＤＮＡ双链通过。这种作用机制向来只有间接的证据。直到最近 ,Ｊａｍｅｓ等用Ｘ射线衍射方法研究酵母ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ的大片段的晶体结构 ,提供了一个该酶的分子模…     

一种钒配合物LMC 抑制DNA 拓扑异构酶?的抗肿瘤作用

目的：探讨钒配合物LMc对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ（Topo-Ⅰ、Topo-Ⅱ）的影响及其抗肿瘤活性。方法：采用DNA松弛实验观察LMC对Topo-Ⅰ、活性的影响并探讨其相关分子作用机制;采用MTT法、流式细胞术在细胞水平观察了IMC的抗肿瘤作用。结果：LMC可明显抑制Topo-Ⅰ活性,对Topo-Ⅱ无明显抑制作用,对多种肿瘤细胞株A549、Hela、BEL-7402具有明显抑制生长的作用,且可将细胞阻断在G2／M期,而对正常细胞株L-02生长无明显影响。结论：钒配合物LMC具有抑制Topo-Ⅰ活性而发挥抗肿瘤的作用。