猕猴桃细菌性溃疡病生防放线菌的筛选与鉴定

对分离自新疆巴里坤盐湖和达坂城盐湖的179株放线菌进行拮抗丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种筛选,从中筛选到8株具有拮抗作用的放线菌,其中ZBW8-1、E14-3和ZB5-6抗菌活性最显著,其抑菌圈直径分别为27.5 mm、23.6 mm和26.2 mm。针对这3株放线菌进行菌落形态观察,16s rRNA扩增、测序及系统进化分析,并对其进行抗生素合成相关基因的PCR鉴定。结果表明,放线菌ZBW8-1、E14-3和ZB5-6分别与糖霉菌属（Glycomyces）的Glycomyces fuscus TRM 49117、原小单孢菌属（Promicromonospora）的维也纳原小单孢菌（Promicromonospora vindobonensis）V45^T以及拟诺卡氏菌属（Nocardiopsis）的Nocardiopsis terrae YIM 90022^T 16s rRNA序列同源性最高,分别为99.86%、99.10%和99.86%。在系统进化关系上,这3株菌也分别与上述菌株聚类在同一个分支上。ZBW8-1、E14-3和ZB5-6菌株中均携带有NRPS基因,其中ZBW8-1和ZB5-6菌株中还含有PKS-II基因,且ZBW8-1菌株中还含有PKS-I基因。对这3株抗菌活性放线菌进行进化地位分析及抗生素合成相关功能基因的鉴定,将为研究这些菌株中的活性次生代谢产物奠定理论基础。     

番茄灰霉病拮抗内生放线菌的筛选、鉴定及其活性评价

对安徽省淮北市番茄植株根、茎、叶中内生放线菌进行了分离、筛选,并测定了其抑菌活性。结果表明:番茄根、茎和叶中的内生放线菌的数量分别为5.66×104、0.67×104和0.39×104CFU.g-1鲜重。根据分离部位和表型特征,从健康番茄植株体内分离到93株内生放线菌,通过对峙实验,筛选到7株对番茄灰霉病菌有拮抗作用的菌株,占所分离内生放线菌总数的7.5%。来自根组织中的菌株HNU-EA27的抑菌效果最佳,抑菌圈直径达28.3mm。根据形态特征、培养特征、生理生化特性、细胞壁组分和16SrDNA序列分析,将菌株HNU-EA27鉴定为毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)。室内测定菌株HNU-EA27发酵滤液对灰霉病菌菌丝生长及分生孢子萌发的抑制作用,结果表明:菌株HNU-EA27发酵滤液可以抑制灰霉病菌菌丝生长和分生孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强;当发酵滤液浓度为30%时则完全抑制灰霉病菌菌丝生长和分生孢子萌发。盆栽防效试验结果表明:30%菌株HNU-EA27发酵滤液对番茄灰霉病的预防与治疗效果分别为80.6%和73.8%,均高于50%多菌灵可湿性粉剂600倍液。本研究表明,菌株HNU-EA27是防治番茄灰霉病潜在的优良生防菌株,具有良好的开发应用价值。     

核桃黑斑病拮抗放线菌WMF106的筛选、鉴定及防效

【背景】核桃黑斑病是由2种病原菌引起的细菌性病害,目前缺乏有效的生物防治方法。【目的】从核桃树根际土壤中筛选对核桃黑斑病病原菌具有拮抗效果的放线菌菌株,为该病害生防菌剂的开发提供基础。【方法】采用稀释涂布法分离放线菌,并以病原菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)作为指示菌,利用平板对峙法和改良牛津杯法筛选具有高拮抗活性的菌株,通过形态学特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列分析确定其分类地位,并测定其无菌发酵液的抗菌谱和室内防效。【结果】筛选到一株对野油菜黄单胞菌和成团泛菌均有较强拮抗作用的放线菌菌株WMF106,该菌株对2种病原菌的抑菌圈直径分别为2.38 cm和1.82 cm,无菌发酵液对2种病原菌的抑菌圈直径分别为1.75 cm和1.55 cm。根据菌株形态学、生理生化特性及16SrRNA基因序列分析,将菌株WMF106鉴定为暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus)。该菌株对尖孢镰刀菌、腐皮镰孢菌、辣椒刺盘孢菌、灰葡萄孢菌、胶孢炭疽菌5种植物病原菌及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉5种指示菌均有抑制作用,抗菌性能广谱高效,其无菌发酵液原液对离体叶片上由野油菜黄单胞菌和成团泛菌造成的核桃黑斑病防效分别为77.44%和58.33%。【结论】菌株WMF106可作为防治核桃黑斑病的生防材料,具有良好的开发价值和应用前景。     

噬菌体鸡尾酒对猕猴桃溃疡病的田间防治效果及叶际细菌群落结构的影响

【背景】噬菌体鸡尾酒可作为一种杀灭猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonassyringaepv.actinidiae, Psa)的生物制剂,但关于噬菌体鸡尾酒在田间的防治效果和对猕猴桃植株叶际内生细菌群落结构影响的研究依然较少。【目的】探究噬菌体鸡尾酒在田间防控猕猴桃溃疡病的效果,以及噬菌体鸡尾酒对猕猴桃茎内叶际细菌微生态的影响。【方法】使用猕猴桃溃疡病病原菌感染健康植株,对比施用噬菌体鸡尾酒和传统铜制剂后溃疡病的发病情况,利用高通量测序技术分析猕猴桃叶际内生细菌群落结构的变化。【结果】与铜制剂相比,噬菌体鸡尾酒可更有效地控制猕猴桃溃疡病,改变叶际细菌群落的丰富度与多样性,增强群落结构的稳定性,改善群落物种功能基因丰度情况,一定程度使叶际细菌群落恢复至健康状态。【结论】噬菌体鸡尾酒在杀灭病原菌的同时具有良好的微生态调节功能,在猕猴桃溃疡病的生物防治中具有巨大的应用潜力。     

核桃黑斑病生防链霉菌YNF36的鉴定及其抑菌活性测定

【背景】由野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)侵染引起的核桃黑斑病是一种严重的细菌性病害,给核桃产业带来了极大损失。【目的】从根际土壤中筛选出对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌和成团泛菌均具有拮抗效果的放线菌菌株,可作为创制生防菌剂的出发菌株。【方法】采用稀释涂布法、平板对峙法和改良牛津杯法筛选拮抗菌株,通过形态学特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析进行鉴定,测定无菌发酵液抗菌谱,离体叶片试验验证其对核桃黑斑病的防治效果。【结果】筛选到一株对2种病原菌均有较强拮抗作用的放线菌菌株YNF36。经形态学特征观察、生理生化特性试验及16S rRNA基因序列分析,将菌株YNF36鉴定为沙场链霉菌(Streptomyces arenae)。该菌株在SYP培养基上产量最高,抑菌活性最强,其无菌发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、蜡样芽孢杆菌这7种指示菌,以及链格孢菌、黑腐皮壳菌、胶孢炭疽菌、灰葡萄孢菌、黄褐孢霉菌、辣椒刺盘孢菌、腐皮镰孢菌这7种植物病原菌均有抑制作用,抗菌谱广。发酵液原液对离体叶片上的由野油菜黄单胞菌和成团泛菌造成的核桃黑斑病防效分别为75.69%和62.39%。【结论】沙场链霉菌YNF36补充了一种防治核桃黑斑病的生防材料,具有良好的开发价值和应用前景。     

猕猴桃溃疡病菌拮抗菌的筛选、鉴定及其对植物病原真菌的抗性

从野生银杏中分离、筛选抗猕猴桃溃疡病内生细菌,并明确其对常见植物真菌病害的抑菌谱.采用"三步法"分离银杏内生细菌,并以猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)作为指标菌筛选拮抗菌;结合菌落形态特征、生理生化特征及16SrRNA基因序列对拮抗菌进行鉴定;开展盆栽防...     

永泰县猕猴桃细菌性溃疡病发生的原因与防治策略

猕猴溃疡病属细菌性病害,可引起植株死亡,严重降低其产量,是福建省福州市永泰县猕猴桃生产上主要病害之一.本文结合永泰县品种选择、地理环境、水肥管理、栽培技术,适时用药,分析了引起溃疡病发生的原因,对其发生规律和防治策略进行分析与总结,为该县后期猕猴桃溃疡病防治提供科学依据.     

生防细菌CNY-04筛选、鉴定及其对灰霉病菌的防效

【目的】为研究土壤细菌对蔬菜灰霉病的生防价值, 从辽宁、山东等地区的蔬菜种植基地采集土壤样本56份, 分离、筛选出对灰霉病具有稳定拮抗作用的细菌9株。【方法】采用平板对峙培养法进行初筛、复筛, 用抑菌圈法测定其抑菌效果, 并进行离体果实试验验证其对蔬菜灰霉病的防治效果, 通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析研究其分类地位。【结果】细菌CNY-04对蔬菜灰霉病的拮抗能力最强且遗传稳定, 抑菌圈直径达到34 mm; 初步鉴定该菌株为格氏沙雷菌(Serratia grimesii), 尚未见该菌在生防上的报道; CNY-04液体菌剂对离体番茄果实灰霉病的防效为69.23%, 50%多菌灵防效为75.39%, 24 h时接种CNY-04处理的番茄发病率为40.0%, 而48 h时接种处理的发病率为51.1%。【结论】CNY-04是一株较为理想的拮抗菌, 丰富了生防资源。     

香梨内生拮抗细菌的筛选及对梨火疫病的生防潜力

该研究以健康香梨树的新鲜花器、当年生新生枝条、叶片和果实为试验材料,采用植物组织内生细菌分离法获得内生细菌菌株,培养菌落,并采用平板对峙法初筛和发酵液复筛对梨火疫病菌(Erwinia amylovora)、梢枯病菌(Pseudomonas syringae pv.syringae)和腐烂病菌(Valsa mali va...     

1株生防细菌的筛选、鉴定及其抑菌特性的初步研究

从鲜牛奶中筛选1株对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的菌株A9,经16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。抑菌特性研究表明,该菌株代谢产物会造成番茄灰霉病菌菌丝畸形,同时抑制其孢子生长,使孢子细胞壁破裂;代谢粗提物经过DEAE-52离子交换层析及Sephadex-G50凝胶柱层析后,电泳检测到具有抑菌活性且分子量约为17ku的单一条带,经验证该抑菌物具有蛋白酶活性。     

陕西省猕猴桃溃疡病病原菌分离鉴定及分型研究

明确陕西省猕猴桃主产区丁香假单胞菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. actinidiae，Psa）的变型，从而有针对性地制定猕猴桃溃疡病的综合防治策略，采集陕西省猕猴桃主产区周至、眉县、灞桥、渭南、长安和鄠邑不同年份发病样本进行病原菌的分离，对病原菌进行初步鉴定后再应用特异性PCR进行分子鉴定，并进行回接实验。从鉴定出的Psa菌株中选出16株不同年份不同地区的代表性菌株应用7个管家基因进行MLSA分型分析。共分离鉴定出86株不同地区不同年份的Psa菌株，并通过回接实验验证了其致病性。MLSA分型结果表明16株代表性Psa菌株均属于Psa3，且Psa3与Psa6的遗传距离最近。陕西省猕猴主产区的Psa变型为Psa3，近十年未发生变异。研究结果为今后Psa的检测鉴定及防治研究提供参考。     

黄曲霉毒素生物防控菌的筛选及鉴定

筛选黄曲霉毒素生物防控菌,为黄曲霉毒素的生物防控提供支持。以花生原产地土壤为材料,采用牛津杯法筛选所需菌株。对筛选出的拮抗菌株进行抑制产毒曲霉菌株的生长、产孢、降解黄曲霉毒素实验。筛选出2株黄曲霉毒素生防细菌,编号21-1-2、17-3,经鉴定,拮抗菌21-1-2为枯草芽胞杆菌,拮抗菌17-3为地衣芽胞杆菌。分别对拮抗菌对曲霉孢子萌发的抑制、抑制黄曲霉的生长和菌丝延长以及减少黄曲霉毒素的产生、对黄曲霉毒素的分解作用等几个方面进行研究,结果表明,拮抗菌可以明显抑制产毒曲霉孢子的萌发、生长、菌丝的延长,减少黄曲霉毒素的产生以及分解黄曲霉毒素。     

一株脱氮细菌鉴定及其效果研究

针对传统人工湿地治理污染河湖水工艺中存在的脱氮效率低、环境安全性差等问题，从污水处理厂生化池污泥中分离纯化获得菌株TY（CGMCC1.18865，该菌种已于2020年在中国普通微生物菌种保藏中心入库），通过配水试验，验证菌株脱氮特性，并进一步以火山岩为填料，采用湿地模拟系统装置对比附配TY菌的湿地系统与传统湿地系统对污染水体的脱氮效果的差异；通过16S rRNA基因序列分析，鉴定获得的菌株TY，同时对其表现出的反硝化作用进行分析研究。结果表明：分离获得的TY菌株为假单胞菌属（Pseudomonas sp.），配水试验中对氨氮和总氮的去除率分别为84.2%和93.6%。通过对模拟湿地系统出水氨氮、总氮和化学需氧量（COD）监测，发现30 d平均去除率分别可提升至94.3%、88.0%和82.3%，较传统湿地分别提高27.9%、28.8%和7.3%。研究表明，TY菌脱氮过程中有少量的硝态氮和亚硝态氮的积累，可降低对环境的不利影响、有利于脱氮反应连续进行，从而提高人工湿地脱氮效率，具有进一步探究的前景。     

1株芘降解酵母菌HXY-5的筛选鉴定及对芘的降解研究

以长期被石油污染的沈抚污灌渠底泥为菌源,富集筛选出以芘为唯一碳源能够生长的菌株HXY-5,采用形态学和分子生物学鉴定相结合的方法进行菌株鉴定,运用光电比浊法测定其对芘的降解效果,通过单因素实验和正交实验确定其最佳发酵和培养条件。结果表明:HXY-5菌株为间型假丝酵母(Candida intermedia);其最适发酵和培养条件为蔗糖20 g,酵母浸粉2 g,MgSO_4·7H_2O 0.5 g,CaCl_2 0.01 g,KH_2PO_4 0.5 g,溶于1 000 mL蒸馏水中,初始pH 6.0,培养温度为25℃,175 r/min发酵24 h;在初始芘浓度为100 mg/L的液体无机盐培养基中,15 d时,HXY-5菌株对芘的降解率可达63%。结果表明,HXY-5菌株可以对芘环境污染进行修复。     

灵芝哈茨木霉病害生防细菌的筛选及菌剂制备研究

为防治灵芝的哈茨木霉病害,对土壤细菌进行筛选,得到1株具有抑菌效果的菌株,编号为JSW-0601,初步测定了JSW-0601对哈茨木霉的抑菌效果,并与11种生防药剂进行对比,通过分子生物学方法和生理生化特性鉴定了JSW-0601的分类地位,确定了JSW-0601的发酵条件,对菌剂制备进行初步探究。细菌菌体制成的菌液对病原菌有抑制作用,其中20μL的菌液抑菌率为63. 33%,作为毒介质菌体原液的抑菌率最高可达94. 93%,2. 5%滤菌液抑菌率达30. 80%,20%灭菌液抑菌率也可达80. 20%,菌体分泌的胞外活性物质和化学物质均有较好的抑制效果。JSW-0601为短小芽胞杆菌,抑菌效果优于11种生防药剂,最佳发酵条件为0. 1%接种量、培养48 h,培养机制为麦芽糖0. 25%、蛋白胨1%、硫酸镁0. 5%,最优载体为硅藻土。筛选得到的短小芽胞杆菌对灵芝哈茨木霉病害的抑制作用较好,为灵芝木霉病害的生物防治提供科学参考,同时也为短小芽胞杆菌的应用提供了新方向。     

一株番茄青枯病菌拮抗细菌的筛选、发酵条件优化及田间小区防效

[背景]番茄青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种土传细菌性病害,该病原菌严重影响番茄的生产。[目的]筛选番茄青枯病的生防细菌,并将其用于病害防治。[方法]采用抑菌圈法、琼脂扩散法从湖南衡阳青枯病发病田的健康番茄根际土壤筛选对青枯劳尔氏菌具有较强拮抗能力的菌株,通过形态学观察、生理生化试验、16S rRNA基因和gyrA基因测序分析确定其分类地位;以单因素试验和正交试验对发酵条件进行优化;通过田间小区试验初探其防效。[结果]筛选的菌株TR-1被初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensislezensis);菌株TR-1最佳培养基配方(g/L):可溶性淀粉20.0,大豆蛋白胨10.0,磷酸氢二钾5.0;最佳发酵条件:pH6.0-7.0,温度30-33℃,摇床转速160 r/min,发酵时长48 h,优化后TR-1无菌发酵上清液对青枯菌抑菌圈直径达2.95 cm,约为优化前的2倍;其田间小区防效为60.30%。[结论]通过对菌株TR-1发酵条件进行优化可大大提升其发酵液抑菌效果,而且菌株TR-1在田间小区试验中对番茄青枯病防效优...     

一株羽毛针禾内生细菌的鉴定、功能及促生特性

【背景】羽毛针禾是沙漠群落演替中的“先锋”草本植物,可在荒漠贫瘠地带繁殖,其生命力顽强、繁殖速度快、种子量大、扩散广。【目的】探究羽毛针禾具有促生效应的内生细菌资源。【方法】从种子中分离出内源性细菌Z1,并对其进行了生物化学、发酵和促生等方面的研究。【结果】Z1菌落呈黄色球形,不透明,中央有小突起,边缘褶皱而湿润,镜检成直杆状,表面有细鞭毛,大小范围为(0.5-1.0)μm×(1.0-3.0)μm。经革兰氏染色试验、靛基质、甲基红、氧化酶、淀粉生产水解试验、V-P试验、明胶液化学试验测定后均呈阳性,甲基红试验、尿素分解实验测定均呈现阴性,是泛生菌属(Pantoea)的细菌。Z1具有产吲哚乙酸的能力,单位产量为3.14 mg/L;而且具有溶磷、解钾、分泌铁载体的能力。Z1菌株最佳发酵培养基条件是:氮源为蛋白胨,碳源是溶性淀粉,无机盐为碳酸钙,pH 9.0。Z1接种小麦10 d后促生效果明显,叶宽、株高、根长等指标分别增长了60.0%、13.5%和8.0%;小麦幼苗的叶片含水量、总叶绿素含量、氮含量、可溶性蛋白等指标均有显著提升(P<0.05)。【结论】Z1是一株具有促生潜力的功能菌...     

对水葫芦有杀草活性的菌株Ｓ63的分离筛选

采用水葫芦琼脂平板和氨氮平板初筛及点种于水葫芦茎处的方法,得到使水葫芦茎部病变黑斑的菌株,考察其对光照培养箱中培养水葫芦的生长抑制效果,获得对水葫芦生长有强抑制作用的菌株S63,鉴定为假单胞菌属。露天培养的试验结果表明,加入该菌液0.5%~2%(体积分数)的试验组发病率为41.2%~100%,高于对照组19.4%~33.3%的发病率;试验组叶片的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活均显著高于对照组。表明该菌对水葫芦有一定的除草活性。     

河北省冬枣黑斑病病原菌的分离鉴定及生物防治初探

冬枣黑斑病是冬枣重要病害之一,目前多以化学农药进行防治,给自然环境和人类健康带来了严重的威胁。河北省是冬枣种植大省,进行冬枣黑斑病病原菌的分离鉴定对冬枣黑斑病的有效防治具有重要意义。2014年8月至10月从河北省沧州、衡水、邯郸、邢台等地采集冬枣黑斑病病果,采用PDA培养基进行病原菌分离,从病样中共分离出2株分离频率较高的真菌,经过回接和再分离实验筛选出河北省冬枣黑斑病的致病菌株,经形态学和ITS序列分析初步确定该菌为细交链格孢(Alternaria alternata)。以枯草芽胞杆菌J18进行冬枣采后黑斑病的防治,浓度为1×108cfu/m L的菌液对病害的防效为80.67%。     

昆虫肠道菌对反枝苋的除草活性筛选及菌株JC-03的初步鉴定

利用平板分离法从多种昆虫肠道中分离出14株昆虫肠道菌,活性筛选表明从大黑金龟子肠道分离出的JC-03菌株粗提物对反枝苋具有较好的除草活性,进一步研究表明其活性物质主要集中在中等极性的乙酸乙酯提取物中。安全性实验表明JC-03菌株粗提物对常见作物(油菜、大豆、西红柿、辣椒)的安全性较高。通过形态学特征观察和5.8S rDNA测序分析,初步确定该菌株为赤霉菌(Gibberella intermedia)。JC-03菌株作为微生物源除草剂值得进一步研究。