食用真菌的单孢子分离方法

介绍一种高准确性的单孢子分离方法。本法以盖玻片碎块代替水琼脂切片作为单孢子的载体,用自制的吸孢器作干孢子水相转移分离。具有镜检容易,分离准确,效率高等优点。     

真菌单孢子分离的一种简易方法

菌种的分离纯化技术,被广泛应用于微生物的遗传、生理的研究和分类鉴定、育种及菌种保藏等工作中。现有的单细胞或单孢子分离方法虽然很多,但操作还不够简便,影响因素也较多,有些还需要特殊的仪器设备,因而工作效率较低,有的方法甚至还难以着手。我们在对米曲霉(Aspergillus oryzae)As3.951进行分离纯化的过程中,参考和比较了文献上介绍的方法,设计了一种简便有效的方法,此法对其它真菌单孢子或单细胞的分离也有参考价值。现将方法简介如下。     

叶绿体色素快速提取分离法

做“叶绿体色素提取与分离”实验,若依课本按图索骥,常有两难。一是实验步骤多,用品多,学生操作难;二是实验时间长,不便于教师配合“光合作用”一节的课堂教学,改验证性实验为探索性实验,培养学生科学探求精神。对此,教学中我们立足教材,综合改进,采用快速法来...     

茯苓单孢子分离技术

真菌的单孢子分离和培养是菌种纯化、定向培育和细胞杂交的重要手段。单孢子分离方法很多,有的方法比较准确和现代化,但设备要求较高,如使用显微操作器,价钱昂贵且尚需进口。而另一些方法如稀释法、滴定法等较简单,但其准确性常因使用者的习惯和熟练程度而异。我们在茯苓单孢子培养和交配试验中,采用的微型玻璃毛细管针吸孢法,具有分离单孢     

真菌單孢子分离的简易方法

真菌單孢子的分离,是植病研究工作中重要的步骤之一。但所采用的方法很多,用白金环在孢子悬浮液中直接(?)取單孢子,或采用器械的协助进行,前一种费时较长而效率不高,后者则必须有熟练的技术,因此在初进行此种工作存在着一定的困难。现在根据前人已有的方法加以改进,利用显微镜的低倍镜,加上特制的铜套管(见图),在培养基上选择單孢子,这种方法极为简便,一般能掌握显微镜应用的技术就可以操作。單孢子分离的方法及铜套管的构造分述如下。     

真菌游动孢子遗传转化新系统

原始真菌芸苔油壶菌是一种专性植物寄生菌,可作为天然病毒载体,将烟草坏死病毒(TNV)和某些其它病毒传递到大多数单子叶和双子叶植物根里。美国内布拉斯加州大学和美国农业部农业研究局的L.Zhang及其同事用芸苔油壶菌把外源基因传送到了小麦根里。 他们先将TNV外壳蛋白(病毒粒子)分解,再将其组装到携带氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)的粒子包装质粒里。将产生的核蛋白复合体(假病毒粒子)加到芸苔油壶菌游动孢子溶液里,于20℃下温育30     

孢子发生在真菌菌种鉴定中的作用

孢子发生（conidiogenesis）一词指的是孢子从产孢细胞发生的过程,即产孢细胞产生孢子当时和孢子产生后的发展形态。Hughes于1953年将观察孢子发生方式用于半知菌（fungi imperfecti）的鉴定。半知菌过去指有性阶段不清楚的真菌,现称丝裂孢子真菌（mitosporic fungi）。由于这组真菌的形态变化多样,鉴定存在困难。早期使用的是Saccardo的分类法对其进行分类（见半知菌图解）。该体系将孢子分为七类：单孢（Ameroporae）、双孢（Didynoporae）、多孢（Phragmosporae）、砖格（Dictyosporae）、螺旋（Helicosporae）、线状（Scolicosporae）、星状（Starosporae）。这种方法只是比较机械地对孢子特点进行观察,没有结合其产孢过程和产孢细胞的特点。1979年Cole和Samson应用电镜观察了孢子发生的情况。1983年Minre等用光镜和电镜观察并总结了分生孢子产生全部过程。de Hoog等主编的《Atlas of Clinical Fungi》一书中也介绍了孢子发生在真菌鉴定中的作用。我们在20世纪80～90年代也以暗色真菌为切人点全面观察和研究了孢子发生的全部过程。为了提高医学真菌的实验室鉴定水平,现结合我们的经验将孢子发生在真菌菌种鉴定中的作用介绍如下。     

粉被虫草无性型单孢子株间和单孢子株内的营养亲和性

在含５％氯酸钾的ＫＭＭ和ＫＰＳ培养基上,粉被虫草无性型以３种途径产生不利用硝酸盐的突变株（ｎｉｔ突变株）。（１）由菌落基质菌丝形成的快速生长气生菌丝角变;（２）菌落表面快速生长的气生菌丝;（３）菌落基质菌丝缓慢生长形成的基质菌丝角变。来自１８个单孢子株的９４个ｎｉｔ突变株中,６４．８％的突变株是稳定的。配对试验结果表明：在全部１９个配对中,单孢子株内配对率为５７．９％,单孢子株间配对率为４２．１％     

粉被虫草无性型单孢子株间和单孢子株内的营养亲和性

在含5％氨酸钾的KMM和KPS培养基上,粉被虫草无性型以3种途径产生不利用硝酸盐的突变株（nit突变株）。（1）由菌落基质菌丝形成的快速生长气生菌丝角变;（2）菌落表面快速生长的气生菌丝;（3）菌落基质菌丝缓慢生长形成的基质菌丝角变。来自18个单孢子株的94个nit突变株中,64.8％的突变株是稳定的。配对试验结果表明:在全部19个配对中,单孢子株内配对率为57.9％,单孢子株间配对率为42.1％。在全部nit突变株中,Cp-14c3突变株与其它突变株间的配对率最高（18.2％）。单孢子株间配对率高的孢子株是Cp-14Cp-7,Cp-5和Cp-6,将来自Cp-14同一单孢子株的Cpe-14C3分别与Cp-14cl和Cp-14c4nit突变株配对后发现,它们形成的浓密生长配接线的颜色是不相同的,前者橙色,后者白色。统计结果发现,所试全部的单泡子株可分成11个营养亲和群（VCGs）,那些含有易与其它菌株配对的nit突变株的单孢子株,如Cp-1,Cg-4,Cp-5,Cp-6,Cp-7,Cp-13,和Cp-14等皆在同一营养亲和群内。用Hochest33258荧光染色观察发现,野生型菌株的菌丝和分生孢子单核,nit突变株的少量分生孢子中可见双核,互补配对形成的浓密菌丝丛中的分生孢子则常见双核。     

丛枝菌根真菌种群的孢子季相动态研究

以草坪为研究对象,研究草坪土壤中丛枝菌根真菌种群的孢子组成、孢子密度、物种丰富度、多样性及其季相变化规律。结果表明,丛枝菌根真菌孢子密度、物种丰富度和多样性指数在一年内随季节变化表现出一定的季相变化规律,三者均在冬季达到最高,在时间节律上与植物群落季相变化不同步;同时分析了气候因素(平均温度、降雨量和日照时间等)对丛枝菌根真菌的影响。结果表明,气候因素对孢子密度、物种丰富度和多样性指数均有显著影响。     

耐极端环境真菌对犬小孢子菌及孢子丝菌的拮抗研究

目的 检测极端环境分离出的真菌拮抗临床病原真菌的活性.方法 选用极端环境分离出的24株真菌菌株上清液及菌丝体的提取液,来进行临床病原真菌（孢子丝菌和犬小孢子菌）的拮抗试验,采用M38-A2产孢丝状真菌抗真菌药物敏感性试验方案和E-test纸片扩散法.结果 抑菌圈直径≥1.0 cm,具有较强拮抗孢子丝菌活性的极端环境真菌有8株;抑菌圈直径≥2.0 cm,具有极强拮抗犬小孢子菌的活性的极端环境真菌有1株.两种临床菌株的拮抗试验,90％的拮抗结果相一致.结论 70％极端环境真菌菌株上清液及菌丝体提取液具有拮抗临床病原真菌孢子丝菌和犬小孢子菌的活性.     

一个有丝分裂孢子真菌中国新记录——稻麦穗孢

Tritirachium Limber (1940) is typified by T. dependens Limber, based on the rachis-like sympodula produced in verticilate arrangements. The genus is close to Beauveria Vuill. In Tritirachium, conidiogenous cells are cicatrized, arising in whorls from ascendent hyphae, while in Beauveria, conidiogenous cells are denticulate, arising in clusters from subtending cells or solitarily from undifferentiated hyphae (Hoog, 1972). There are 25 binames in Tritirachium (Funindex, 2000), however, only …     

酵母样真菌快速分型诊断

为进一步解决感染酵母样真菌病患者的早期诊断和治疗,我们采用了一种快速、简便、准确鉴定和分类酵母样真菌的方法——纸片法,同时对纸片法与传统的方法(生长图谱法)进行了比较。217株酵母样真菌的鉴定结果准确率达100％,其中白念珠菌检出率最高155株占71.42％,为最常见菌,其次是热带念珠20株占9.22％,其它四种念珠菌16株占7.37％,还有分类及种未定酵母菌26株占11.98％。以上观察结果其检出率和国内外报道的资料相似。我们认为用纸片法鉴定酵母样真菌,操作过程简单易行、费用低廉、准确快速,可尽早为临床提供治疗依据。     

酵母样真菌快速分型诊断

为进一步解决感染酵母样真菌病患者的早期诊断和治疗,我们采用了一种快速,简便,准确鉴定和分类酵母样真菌的方法－纸片法,同时对纸片法与传统的方法（生长图谱法）进行了比较。２１７株酵母样真菌的鉴定结果准确率达１００％,其中白念珠菌检出率最高１５５株占７１．４２％,为最常见菌,其次是热带念珠２０株占９．２２％,其它四种念珠菌１６株占７．３７％,还有分类及种未定酵母菌２６株占１１．９８％。以上观察结果其检出     

海洋真菌多不饱和脂肪酸的快速检测

从海水中分离了一种产EPA和DHA的真菌,并建立了微生物油脂的快速提取、甲酯化及其多不饱和脂肪酸的含量的气相色谱测定方法。结果表明：采用CHCl3-KOH-CH3OH一步提取甲酯化适合于产多不饱和脂肪酸菌株的快速检测。对其油脂的提取,采用湿菌丝魏氏盐酸水解法较为合适;并用KOH－CH3OH法对所得油脂进行了甲酯化。最后,运用毛细管气相色谱采用外标法测定了甲酯化样品中多不饱和脂肪酸的含量,其油脂中EPA和DHA的含量分别为7.32％和7.58％。     

平滑肌细胞分离法

平滑肌是由平滑肌细胞(纤维)组成,某些脏器管壁的肌层部分,如胃肠道、呼吸道、泌尿生殖管道、血管、淋巴管的肌层均由平滑肌构成。平滑肌细胞核只有一个,椭圆形或长柱形,位于细胞的中部,没有横纹。细胞质称肌浆,应用特殊染色可以显示出纵列细丝,即肌原纤维。表面包有薄膜,为肌膜。材料蟾蜍的胃或猫小肠。固定 F·A·A(10％福尔马林10毫升;50％酒精85毫升;冰醋酸5毫升)。方法 1.材料从固定液中取出后,浸入30％酒精1小时,将粘膜层和浆膜刮除干净,留下肌层。     

促白木香结香真菌的快速筛选

以海南省澄迈县海南科大林业公司所有的白木香人工林地为研究对象,采用前期已分离的菌株对白木香白木进行固体催化,利用GC-MS技术对具有催化效果(白木化学成分在催化前后变化显著)的菌株进行筛选,将筛选出的菌株接种至白木香树体中,6个月后对沉香物质挥发油以及化学成分进行测定。对白木固体催化产物的提取物分析,鉴定出其乙醚提取物共24种化学成分,其中共有成分5种、芳香族类化合物6种、其他类化合物18种。Trichoderma sp.、Neurospora sp.和Melanotus flavolivens这3种菌株使白木香白木的化学成分发生显著变化。对结香处理6个月后已结香木材的提取物分析,鉴定出其乙醚提取物共84种化学成分,其中共有成分30种,芳香族类化合物17种、倍半萜类化合物34种和其他类化合物33种。Trichoderma sp.、Neurospora sp.、Melanotus flavolivens和CK样品乙醚提取物得率分别为3.62%、4.04%、3.97%和1.94%。其中芳香族类成分相对含量之和分别为15.15%、17.29%、12.13%和7.95%。倍半萜类成分相对含量之和分别为10.61%、11.19%、11.4%和0%。在6个月内Trichoderma sp.、Neurospora sp.和Melanotus flavolivens这3种经过白木香白木固体催化筛选所得的菌株能够有效诱导白木香结香。     

泥炭地苔藓植物孢子生活力的快速检测

适量的烟气能够促进有性繁殖体萌发,但迄今尚无辅助烟气处理探究孢子生活力快速检测方法的研究报道。该文选择毛缘泥炭藓（Sphagnum fimbriatum）、中位泥炭藓（S.magellanicum）和粗叶泥炭藓（S.squarrosum）作为材料,分别使用亚甲基蓝染色法、四唑（TTC）染色法、碘-碘化钾（I₂-KI）染色法和红墨水染色法对泥炭藓孢子进行染色,并比照营养液、烟溶液+营养液培养的孢子萌发试验,对比研究泥炭地苔藓植物孢子生活力快速检测的最佳方法。结果表明：亚甲基蓝染色法的染色效果最为明显,TTC和I₂-KI均未能使泥炭藓孢子着色,孢子对红墨水虽有着色反应但不清晰;与营养液培养相比,添加烟溶液使毛缘泥炭藓、中位泥炭藓和粗叶泥炭藓孢子萌发率分别提高5%、5%和18%;使用亚甲基蓝染色的孢子染色率与经烟溶液处理过的孢子萌发率最为接近。综上认为,亚甲基蓝染色法能快速检测泥炭藓孢子的生活力。