AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

本文对枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶的固定化进行了研究。考查了温度,pH值、交联剂用量,以及载体与酶的比例等因素对AS1.398中性蛋白酶固定化的影响;确定了固定化AS1.398中性蛋白酶的一些催化特性:最适温度60℃,最适pH值8.0,操作半衰期88天。固定化AS1.398中性蛋白酶活性回收为74％。     

猪血蛋白的酶水解及氨基酸含量

以AS1.398中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对猪血蛋白进行水解,AS1.398中性蛋白酶对猪血蛋白的水解能力最强。采用活性炭对酶水解液进行脱色。脱色后的酶水解液中含有18种氨基酸,必需氨基酸占总氨基酸的39.18%。     

蛋白酶喷雾沸腾造粒

我们自1974年以来,对蛋白酶喷雾沸腾(流化)造粒工艺进行了研究,现已完成了AS1.398中性蛋白酶和2709碱性蛋白酶喷雾沸腾造粒的工艺试验。经生产实践证明,此工艺是可行的。它与盐析工艺相比,可以不用硫酸铵;与喷雾工艺相比,可减少粉尘,改善工人劳动条件。现将此工艺简介如下:     

枯草杆菌AS 1.398蛋白酶制剂中的几种酶系

枯草杆菌AS 1.398菌株是产生中性蛋白酶的生产菌株。但由于目前的酶制剂是多种酶的混合物,所以应用范围受到很大限制。为了更好地发挥该酶制剂的应用潜力,我们对其中的几种酶系进行了研究。     

用吸附-交联法在磁性胶体粒子上固载中性蛋白酶

利用吸附-交联法,在磁性胶体粒子表面固载 ASl.398 中性蛋白酶,可以制备出活性达 2500U/g 的磁性固定化中性蛋白酶.该固定化酶具有较好的耐热性和操作稳定性,最适作用 pH6.0—6.5,最适作用温度60℃.考察了交联剂用量、温度、pH及酶与载体比例对 AS1.398 中性蛋白酶固定化的影响.     

酶促水解大豆分离蛋白动力学模型的研究

本文对AS1.398中性蛋白酶在pH6.9和温度49℃条件下水解大豆分离蛋白的动力学机制进行了研究．结果表明：酶水解速率随水解反呈指数递减．为了解释实验结果,我们提出了如下假设：对底物而言水解反应终为零级反应,水解过程中由于游离酶攻击酶-底物中间络合物而造成的不可逆酶变性是一个二级动力学过程．在此基础上,由实验数据推导得到了描述AS1.398中性蛋白酶催化水解大豆分离蛋白的动力学方程,该方程可用于指导和优化酶解反应实验．     

中性蛋白酶生产菌AS1.398抗噬菌体菌株的选育和诱变

我厂生产AS 1.398中性蛋白酶,自1969年投产以来,曾多次发生噬菌体污染。1977年7、8月份再度发生异常发酵:芽孢出现早,发展快,周期短,酶活低。但没有典型的溶菌现象,经反复检查,才证实有噬菌体的污染。当时本厂所保藏的其它菌株对该噬菌体全部敏感。经过筛选得到了抗噬菌体菌株KC34,生产性能与原生产株基本一致。以后,又对该菌株进行了硫酸二乙酯、紫外线联合诱变,得到了变异株Kpb 38,其摇瓶产酶比KC34提高20%以上。经大生产九个月,200多批次检验,增产效果显著,与摇瓶情况完全相符。认为Kpb 38菌株属优良的蛋白酶产生菌。     

N+离子注入诱变选育中性蛋白酶高产菌株及发酵条件的研究

对产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398进行离子注入诱变,从正突变率较高的注入剂量30～50 × 1014 ions/cm2范围内,筛选出一株高产菌株ZC-7.该菌株在优化了的摇瓶培养基中,培养42h,产酶可达16900U/mL.在7L发酵罐上控制pH6.0～7.0,溶氧10%～20%.以32℃3～40℃～30℃变温发酵42h,酶活力最高可迭19680U/mL,为初始菌株的2.1倍.     

L-异白氨酸发酵的研究——Ⅲ.糖质原料直接发酵生产L-异白氨酸

前文报道了AS 1.998直接发酵生产L-异白氨酸的试验。本文总结了利用AS 1.998菌以糖质原料发酵生产L-异白氨酸扩大试验的结果,现报告如下。     

石油发酵柠檬酸扩大试验鉴定会

1975年10月23—26日,天津市科学技术局、天津市第一轻工业局联合主持召开了石油发酵柠檬酸扩大试验鉴定会。对天津糖精厂、天津工业微生物研究所共同研究成功的石油发酵柠檬酸(20吨罐)扩大试验成果进行了鉴定。应邀参加会议的有北京、上海、天津、江苏、江西、广东、山东、吉林、辽宁等省市有关工     

氨基末端磁性载体固定化中性蛋白酶的研究

以氨基末端磁微粒为载体,用戊二醛作交联剂,通过共价交联结合法固定化AS1.398中性蛋白酶.可以制备出活力达45 000 U/g磁性固定化酶.探讨了该载体对中性蛋白酶的最适固定化条件,并对磁性固定化酶的热稳定性,储存稳定性、操作稳定性等进行了研究,确定了此载体对酶的固载能力大于200 mg/g（载体）,及固定化磁性酶最适pH为7.5, 最适温度为60℃等催化特性.     

蚯蚓外源酶与内源酶酶解产物分析

本试验采用了枯草杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398枯草杆菌蛋白酶和自溶制备蚯蚓肽,通过前期单因素试验,设计正交试验L9(34),以氨基氮数,多肽浓度为衡量指标,对最佳酶解条件进行筛选研究,并分析了酶解液氨基酸组成和相对分子量的分布。结果表明:AS1.398枯草杆菌蛋白酶最佳酶解条为pH 6.5、酶浓度1%、温度50℃、反应时间8 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到16.55 mmol,多肽浓度达9.22 mg/mL;自溶酶解蚯蚓的最佳条件pH 7.0、底物浓度1∶2、温度50℃、反应时间6 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到21.55 mmol,多肽浓度达11.65 mg/mL;二者酶解产物分子量大部分是在5000以下的多肽、小肽及氨基酸的混合物,其中分子量在300以下占了80%,氨基酸组成平衡,含量丰富,可用来制取新型氨基酸微量元素及小肽添加剂。通过控制酶解条件,蚯蚓可以利用自身的酶源自溶来代替外源酶,从而降低成本。     

L-赖氨酸发酵的研究钝齿棒状杆菌PI-3-2的L-赖氨酸发酵中间生产试验

1978年我们完成了北京棒状杆菌AS 1.563发酵生产L-赖氨酸研究的扩大试验。为进一步提高L-赖氨酸产率和糖原料的转化率,采用钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum)PI-3-2进行了L-赖氨酸发酵中间生产的研究,现报道如下。     

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。     

石油发酵产蛋白酶菌株Pseudomonas Aeruginosa Nu53-1减毒的研究

我们在石油发酵蛋白酶产生菌的筛选工作 中，获得一株能利用重油作为碳源发酵产蛋白 酶的铜绿色极毛杆菌(Pseudomonas aeruginosa 6.1)^[1]。此菌株经亚硝基孤及紫外线诱变处 理，选出了产酶较高的变异株Nu53-1。该菌 产生的蛋白酶经试验表明在皮革脱毛上具有良 好的性能。     

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。     

北京棒状杆菌AS1.563发酵生产L-赖氨酸研究的扩大试验

L-赖氨酸是一种人体必需的氨基酸,国外已应用于食品、饲料、医药等方面。本文主要介绍AS 1.563菌发酵生产L-赖氨酸研究的扩大试验结果。     

复合菌株发酵猪血粉的条件研究*

利用筛选出的2株高产蛋白酶的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株AS100、AS102作猪血粉发酵的主发酵菌株,配以1株酵母菌(Saocharomyces cereisiae)菌株Y113和1株细菌(Bacilus sp．)菌株Asp007为辅助菌株,研究了这四株菌的产酶性能,同时确定了它们在发酵血粉过程中的一系列参数。通过猪血粉发酵,获得了一种高蛋白发酵饲料,其香味浓郁,蛋白质含量高达69％,且富含游离氨基酸,VitD3、烟酸等维生素及Fe等无机元素,可作为禽畜高蛋白源或饲料添加剂。     

响应面法优化枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的发酵条件

本研究对枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的发酵条件进行优化。通过单因素试验探究碳源、氮源、无机盐离子及表面活性剂对枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的影响。结果表明,枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶最佳碳源、氮源、无机盐离子及表面活性剂为蔗糖、牛肉膏、Ca Cl2及吐温-80。在单因素试验基础上,通过PlackettBurman试验设计和响应面分析法得到了产中性蛋白酶最佳发酵条件:蔗糖3%、牛肉膏2%、Ca Cl20.3%、吐温-80 0.55%、初始p H 7.5、发酵温度37℃、发酵时间50.4 h、接种量2.66%。在最佳发酵条件下,所产中性蛋白酶最大酶活为143.54 U,比优化之前提高1.3倍。     

蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应

本文研究了Pb、zn、cu和Cd对3种蛋白酶产生菌:碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacilluslicheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillususamii 537)生长及其酶活性的影响,并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分,分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC).结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后,对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用.碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性,其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性.而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态.3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0 mmol/L～6.0 mmol/L),其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5 mmol/L～0.75 mmol/L).