黑曲霉变异株UV-11-48的选育及产糖化酶条件的研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)变异株UV-11为出发菌株,经亚硝基胍多次诱变,获得一株比亲株产糖化酶活力提高30%左右的变异株UV-11-48。对UV-11-48菌株进行了发酵条件及酶系组成等的研究。固体曲生产性试验,种曲糖化酶活力最高达12240u/g,麸曲酶活力平均8000—9000u/g,最高达11700u/g,在酿酒工业固体曲生产中,取得明显经济效益。     

胞外青霉素酰化酶产生菌的自然分离

利用菌种的自然突变进行“出发菌株Ⅱ”的自然分离,从用肉眼选出的22株菌中,经初筛选选出650u／10ml以上高产菌株8株,再经过复筛选出780u／100ml的活力菌株2株,命名为“6‘＃、8’＃”。用于胞外酶的生产,月平均酶活5975u／100ml。经验证,“6‘＃、8‘＃”高产菌产菌适用于胞外青霉素酸化酶的生产。     

产胆红素氧化酶菌种筛选

选出一株产胆红素氧化酶的菌种露湿漆斑菌—Myrotheciumr oriclum,简称MTR89—403。此菌产酶最适培养基:40—80％的马铃薯浸出液100ml、葡萄糖1g,pH6.0。培养条件:500ml三角瓶装100ml培养基,在27℃、200rpm旋转摇床培养84h,得到的最高酶活为1300u/L,比活为12.3u/mg蛋白。     

果胶酶CP-85211菌株的选育及其液体发酵条件的研究

黑曲霉(Aspergillus niger) CP-831经0.03％亚硝基呱在40℃处理30分钟,获得一株高产果胶酶突变株CP-85211。该突变株发酵滤液,当以果胶为底物时,酶活力为308u／m’;当以多聚半乳糖醛酸为底物时,酶活力为842u／ml。产酶活力水平约为出发菌种的5倍。产酶最适培养基组成为：8％麦麸,2％桔皮粉和2％硫酸铵。最适培养条件为：起始pH 3．5,如℃,72小时。     

热稳定β—淀粉酶高产菌株选育及发酵条件研究

从土壤中分离得到一株高温放线菌V_4菌株(Thermoactinomyces sp.V_4),经测定能产生热稳定β-淀粉酶。V_4菌株经过热诱变获得一株具高活力β-淀粉酶的变异株A_(61),产酶活力从400u/ml提高到1000u/ml。A_(61)菌株产生的β-淀粉酶最适反应温度为60℃,酶的热稳定性良好,50℃保温4小时不失活,55℃保温2小时仍具有最初活力的96％。     

微生物产生大豆蛋白凝固酶的研究——Ⅰ.菌种的分离筛选及产酶条件的研究

从141份土壤样品中筛选到一株产大豆蛋白凝固酶的细菌,在适宜的发酵条件下,酶活力可达0.6—1u/ml。酶反应的最适温度为70℃、pH为5.5。在45℃、pH6.3—8.0条件下,酶活力稳定。     

果胶酶制剂中花色素酶的去除

以皂土为吸附剂,将花色素酶从粗果胶酶制剂中除去。分离效果受pH和皂土用量影响。皂土还具有一定的脱色作用。黑曲霉AS3.316麦麸固体曲用5倍重量的自来水于室温下抽提4小时。粗果胶酶拙提液中加入3％皂土,调pH至4.1,于室温下放置30分钟。过滤所得部分提纯酶液含果胶酶258u/ml,酶活力回收为88％。 100ml山楂汁和387u(1.5ml)上述部分提纯的果胶酶于50℃保温3小时后,澄清度由65％提高到98％;相对粘度由12.5下降到1.2;果胶完全水解;红色素完全保留着。     

产适冷木聚糖酶的海洋产青霉的筛选和诱变

从黄海深层海底泥样中分离到1株产低温木聚糖酶的青霉,经EMS诱变得到11株酶活性提高的菌株,对其中1株产低温木聚糖酶活力最高的菌株产酶性质进行了初步研究。所产木聚糖酶在pH4.6,45℃时酶活可达25.8u/ml,比出发菌株提高126%。诱变后菌株所产木聚糖酶在0℃仍有显著酶活性,达8.2u/ml。     

彩绒革盖菌CV-8胞外漆酶的诱导、纯化及部分性质研究

为探讨彩绒革盖菌(Coriolus versicolor)漆酶的生产条件和性质,对其进行了硫酸铵盐析、半透膜透析、DEAE-纤维素离子交换、Sephadex G100柱层析纯化,粗酶液被纯化36.1倍,比活力10180u/mg,回收率44.6%。凝胶过滤法测定酶的分子量为62kDa。研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件。结果表明在该培养条件下,彩绒革盖菌第11d达产酶高峰,峰值酶活为398u/ml,酶作用的最适pH值为4.6,最适温度为25℃,Mg2 、Mn2 、Cu2 对漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 和Cl-则抑制漆酶活性。以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为892×10-3mol/L。该菌可作为木质素降解和环保工业漆酶生产菌种。     

羊毛生物整理复合酶L86发酵工艺优化研究

采用L9（34）正交试验对L86复合酶生产菌的发酵培养基进行优化、并通过溶氧浓度调节和中期补加蛋白水解液对发酵过程进行调控。结果表明较优的培养基组成为（g/100ml）：黄豆粉4.0、玉米粉1.0、鱼粉0.6、蚕蛹粉0.6、CaCl20.5、NH4Cl1.0、Na2HPO4·2H2O 0.4;通气量控制30h前1:0.5、30-50h1:1.0、50h后1:1.2 v/v/m。在上述条件下摇瓶,酸性蛋白酶酶活10000u/ml、纤维素CMC酶3600u/ml;在0.5m3搅拌罐中扩大中试平均发酵单位酸性蛋白酶5500u/ml、纤维素CMC酶2200u/ml。     

产胞外青霉素酰化酶菌株的选育

以短小杆菌（B．pumilus）B－97为出发菌株,经过连续两次紫外线诱变处理,分离得一突变株B－U－29。其酶活力为4．56U／ml,较出发菌株酶活力提高113．3％。对B－U－29菌株进行连续两次亚硝酸处理,分离得一正变稳定株B—H－29,酶活力为4．93u／ml,较出发菌株酶活力提高了20％。     

羊毛生物整理复合酶L86发酵工艺优化研究

采用L9（9^4)正交试验对L86复合酶生产菌的发酵培养基进行优化、并通过溶氧浓度调节和中期补加蛋白水解液对发酵过程进行调控,结果表明罪状优的培养基组成为（g/100ml);黄豆粉4.0、玉米粉1.0、鱼粉0.6、蚕蛹粉0.6、CaCl20.5、NH4Cl1.0、Na2HPO4.2H2O0.4;通气量控制30h前1：0.5、30-50h1:1.0、50h,后1：1.2v/v/m。在上述条件下摇瓶,酸性蛋白酶酶活10000u/ml、纤维素CMC3600u/ml;在0.5m^3搅拌罐中扩大中试平均发酵单位酸性蛋白酶5500u/ml、纤维素CMC酶2200u/ml。     

脂肪酶产生菌Geofrichum sp. AS 2.1135产酶条件及酶一般性质的研究

在92株能同化油的地霉属菌株中,Geotrichum sp. AS2．1135菌株产脂肪酶活力为50—60u／ml,对其产酶条件的研究表明,不饱和长链脂肪酸和油类有利于酶的形成。在4％豆饼粉作为有机氮源的培养基中,加入0．2％尿素,酶活力显著增加,酶活达150u／ml。用聚乙二醇橄榄油乳化系统测定酶的作用最适pH为8．0,最适温度为4O一42℃。在pH4一9时5℃下存放24小时,或在pH 5和8时45℃保持15分钟,酶活力不变。     

热稳定β－淀粉酶高产菌株选育及发酵条件研究

从土壤中分离得到一株高温放线菌V4菌株(Thermoactinomyces sp．v4),经测定能产生热稳定β-淀粉酶。V4菌株经过热诱变获得一株具高活力β-淀粉酶的变异株A61产酶活力从400u／ml提高到1000u／ml。A61菌株产生的β-淀粉酶最适反应温度为60℃,酶的热稳定性良好,50℃保温4小时不失活,55℃保温2小时仍具有最初活力的96%。     

固体发酵法制取植酸酶

对植酸酶产生菌进行了诱变育种,分离纯化;采用固体培养法生产植酸酶及对酶的热稳定性进行了研究,研究结果表明以麸皮为主要培养基成分,添加2%葡萄糖,1%（NH4）2SO4,0.02%MgCl2,40ml水,29℃恒温培养8d-10d后,其酶活可达5615u/g.ssc。用含CaCl22%的pH5.0的醋酸缓冲液抽提效果好,相对酶活达94%。经提取。粗酶粉活力可达80130u/g。温度升高70℃,处理1h,相对酶活为90%。     

纤维素酶的固体培养方法

通过对菌株产酶能力的测定,确定了绿色木霉（Trichoderma viride)HWO7作为生产菌株。研究了培养基组成、培养条件和培养过程对产酶能力的影响,确定了固体培养生产纤维素酶的生产工艺。研究了纤维素酶的酶学特性。在确定工艺条件下,曲料的绝干酶活力（CMC－Na）达2605．1u/g,产品收率79．0％。     

产果胶酶的菌种选育及发酵条件

炭黑曲霉(Aspergillus carbonarius)AS 3.396经亚硝基胍和Co60r-射线诱变,获得一株高产果胶酶突变株G5512。该菌株的发酵滤液,以高酯果胶为底物的酶活力为860u／ml;以低酯果胶为底物的酶活力为1227u／ml。产酶活力水平约为原出发菌株的2—6倍。产酶最适培养条件为：起始pH4.0—4.5,30℃,72—90小时。酶作用最适条件为：高酯果胶为底物时,pH3.5,50℃;低酯果胶为底物时,pH4.5,50℃。pH稳定范围为2．0-6．5(高酯果胶)和4.5—5.0(低酯果胶)。酶在60℃保温15分钟,高酯果胶为底物的酶剩余活力71％,低酯果胶为底物的酶活力仅剩余1％。     

黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件研究

通过单因子及正交试验,对黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件进行了探讨。其优化的产酶条件为:甘蔗渣3g,麸皮2g,加含尿素为0.15%的Mandels营养液25mL(加水比1:5),调初始pH5.0,28℃发酵72h。在此优化条件下,纤维素酶活力可达7.56u/g干曲。     

不同真菌漆酶的性质研究

为了更好开发利用漆酶,用邻联甲苯胺法比较分析了彩绒革盖菌、毛栓菌和多孔菌在液体培养时的产酶曲线、酶作用的最适pH值、最适酶解温度及无机离子对酶活的影响。结果表明,不同漆酶产酶曲线不同,彩绒革盖菌和多孔菌,第9d达产酶高峰,峰值活力分别达395.6u/ml和412.2u/ml;毛栓菌,第11d达到产酶高峰,峰值本科活较不同真菌漆酶的性质研究高达554.6u/ml。漆酶性质有明显差别,最适酶解温度不同,彩绀革盖菌和多孔菌漆酶最适酶解温度为25℃;毛栓菌为30℃;最适酶解pH值有差异,彩绒革盖菌漆酶最适酶解,pH值为4.5,毛栓菌为4.0,多孔菌为4.2;不同离子对酶活的影响不同;K^、Zn^2 、对彩绒革盖菌所产漆酶有激活作用;K^ 、Zn^2 、Cu^2 对毛栓菌所产漆酶有激活作用;Mn^2 、Mg^2 对多孔菌所产漆酶有激活作用;Ag^ 、Fe^3 对三种菌所产漆本科均有明显抑制作用。     

碱性脂肪酶的研究开发

本项目以菜市场、乳品厂、油脂厂采集的土样为实验材料,分别进行菌种的初筛培养及Rodamine B筛选法富集培养,并利用摇瓶发酵培养扩增菌种。通过对菌种发酵所产酶的活力进行测定,优选出能高效产碱性脂肪酶的菌种。通过鉴定,获得的菌种为油脂厂采集分离得到的革兰氏阴性菌,产酶活力为60IU/m L,经检测此菌种为Alcaligenes sp。最后对该菌种所产酶添加至清洁剂中的比例进行优选,得出其比例为18%去污效果最佳。