紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B3病毒活性研究Ⅰ

采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖(ESPS)的细胞毒性,在高浓度(250μg/mL)下尚未发现对HEp-2细胞有明显毒性.CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3的作用.直接作用法的活性最高,TI值高达1920.6,是阳性对照药病毒唑的31倍.ESPS组分中分子量越大,抗病毒活性越高,其中分子量大于300 k的组分,IC50可低至0.754μg/mL,TI值高达331.6,是病毒唑的5倍多.结果表明ESPS有强烈的抗CVB3病毒活性,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程.     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B_3病毒活性研究I

要 :采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖 (ESPS)的细胞毒性 ,在高浓度 (2 5 0 μg/mL)下尚未发现对HEp 2细胞有明显毒性。CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE ,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3 的作用。直接作用法的活性最高 ,TI值高达 192 0 6 ,是阳性对照药病毒唑的 31倍。ES PS组分中分子量越大 ,抗病毒活性越高 ,其中分子量大于 30 0k的组分 ,IC50 可低至 0 .75 4 μg/mL ,TI值高达331. 6 ,是病毒唑的 5倍多。结果表明ESPS有强烈的抗CVB3 病毒活性 ,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程。     

紫球藻胞外多糖的分离纯化与性质分析

采用Q Sepharose Fast Flow凝胶,从紫球藻胞外多糖（ESPS）获得3个组分ESPS0,ESPS1.0和ESPS1.6,它们经过Sephadex G200凝胶过滤纯化后,紫外光谱、红外光谱、氨基酸分析、单糖组成分析表明,ESPS0中未测出蛋白,ESPS1.0和ESPS1.6的蛋白含量分别为7.8%和7.6%,三者硫酸基含量分别为16.3%,11.6%和8.3%,同时分别在201 nT,207 nm和199 nm处出现特征吸收峰,而在280 nm和260 nm波长处无吸收峰.ESPS0、ESPS1.0中单糖的连接方式为β-糖苷键,而ESPS16中主要为α-糖苷键.ESPS1.0、ESPS1.6都含有十七种氨基酸.三种组分都是由D-木糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-艾杜糖以不同的比例所组成.     

超声波降解紫球藻胞外多糖研究

通过测定溶液粘度,判断超声波降解紫球藻(Porphyridium cruentumi)胞外多糖的效果。运用均匀设计对超声波降解紫球藻胞外多糖的影响因素(处理振幅、时间、脉冲)进行优化,获得超声波处理的最佳条件:振幅39%、处理时间245s和脉冲9.5s。在最佳条件下,胞外多糖的粘度为2.98mm²/s,与预测值一致。采用DPS软件对实验结果进行二次多项式分析与拟合,并对模型和回归系数进行显著性检验,建立了以胞外多糖粘度为目标的回归方程式。     

硒化紫球藻胞外多糖组成与结构的初步分析

通过在ASW培养基中加入适量的亚硒酸制备硒化紫球藻胞外多糖,经分离纯化、纯度鉴定后,利用下列手段对其进行分析:通过紫外可见光谱扫描、红外光谱扫描了解其结构信息;通过高效液相色谱对其单糖组分进行分析;通过硫酸-咔唑法测定其糖醛酸含量;通过硫酸比浊法测定其硫酸根含量,等。Se-PSP和PSP一样,分离后分别得到两种成分,紫外光谱也和PSP相似,不含有蛋白质和核酸;红外光谱显示Se-PSP中Se可能取代了C-H上的H和SO42-中的S;HPLC显示其单糖组分种类相似,含量稍有差别;另外,PSP和Se-PSP所含的糖醛酸含量没有统计学差异,Se-PSP所含SO42-比PSP少。     

紫球藻及其胞外多糖对小鼠免疫功能的调节作用

探讨紫球藻及其胞外多糖对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用,用环磷酰胺(CY)建立昆明种小鼠免疫功能低下的实验模型。小鼠随机均分6组,其中2组每天分别给予紫球藻藻粉1200、600 mg/kg灌胃,2组给予紫球藻胞外多糖300、150 mg/kg灌胃,正常对照组及CY组用等容积生理盐水灌胃,连续14 d。实验结果表明紫球藻及其胞外多糖均可显著提高免疫抑制小鼠的脾指数、胸腺指数、碳廓清能力、单核细胞吞噬功能,并可对抗环磷酰胺引起的外周血白细胞数目下降,因此紫球藻藻粉及其胞外多糖对小鼠免疫功能具有一定的正向调节作用。毒性实验表明,小鼠腹腔注射300、150 mg/kg紫球藻胞外多糖溶液和分别给予紫球藻藻粉1200、600 mg/kg灌胃,小鼠未出现死亡,也未有明显毒性反应出现的一些指标变化,说明紫球藻藻粉及胞外多糖的安全性较高。     

翻白草油体外抗呼吸道合胞病毒活性研究

目的 研究翻白草油抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用.方法 选取翻白草油进行抗RSV研究,采用细胞病变反应(CPE)和噻唑蓝(MTT)比色法观测翻白草油对RSV作用.结果 MTT和CPE试验结果表明翻白草油在3种作用方式(除细胞保护作用方式)下能够增强宿主HeLa细胞存活率,且细胞存活率与翻白草油浓度呈正相关,翻白草油对宿主HeLa细胞无保护作用,不能阻断RSV病毒进入细胞.结论 翻白草油有抗RSV作用.     

倍频Nd：YAG激光对紫球藻生长与胞外多糖产量的影响

紫球藻经Nd:YAG激光（波长1060nm)照射,以不同时间设置处理剂量,比较紫球藻细胞活力,生长速率,生物量,胞外多糖产量等方面的变化。高剂量处理组（Y-20、Y-30和Y-40）致死率为17-44%,继代培养后生长迅速,K值分别比对照组提高18%、23.4%和15.3%,各处理组培养10天后收获的生物量与对照组无显著差异,但胞外多糖产量均有较大幅度提高,增幅达50-150%。此外,YAG激光照射对藻细胞叶绿素含量也有影响,YAG激光有望成为紫球藻优良藻株选育的较佳诱变剂。     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B3病毒活性研究I

采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖(ESPS)的细胞毒性,在高浓度(250μg/ml)下尚未发现对HEp-2细胞有明显毒性。CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3的作用。直接作用法的活性最高,TI值高达1920．6,是阳性对照药病毒唑的31倍。ES-PS组分中分子量越大,抗病毒活性越高,其中分子量大于300k的组分,IC50可低至0．754μg／ml,TI值高达331．6,是病毒唑的5倍多。结果表明ESPS有强烈的抗CVEb病毒活性,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程。     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起严重下呼吸道感染的重要病原体,尽管经历了半个多世纪的努力,至今仍未有安全有效的RSV疫苗上市。近年来在RSV F蛋白结构生物学方面的研究进展为新一代RSV疫苗的开发提供了新方向,同时更多的采用不同技术、或针对不同人群的RSV侯选疫苗也在迅速发展,尤其是针对婴幼儿及老年人的RSV侯选苗已有60多种在研究中,大部分已处于临床前研究阶段,18种侯选苗已进入临床试验。我们简要介绍RSV疫苗的最新研究进展。     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要原因,并可致免疫缺陷病人显著发病和死亡,RSV疫苗已被WHO列为全球最优先发展的疫苗之一。经过几十年的研究,虽然取得了显著进展,但尚未有RSV疫苗上市。目前RSV疫苗的研究主要集中于亚单位疫苗、减毒活疫苗和DNA疫苗等,其中亚单位疫苗和减毒活疫苗被认为最有前途,已分别进行了的临床试验。     

Activity of Porphyridium sp. polysaccharide against herpes simplex viruses in vitro and in vivo.

The cell wall sulfated polysaccharide of the red microalga Porphyridium sp. exhibited impressive antiviral activity against herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1 and -2) both in vitro (cell culture) and in vivo (rats and rabbits). Depending on the concentration, this polysaccharide completely inhibited or slowed down the development of the cytopathic effect in HSV-infected cells, but did not show any cytotoxic effects on vero cells even when a concentration as high as 250 μg/ml was used. There was indirect evidence for a strong interaction between the polysaccharide and HSV and a weak interaction with the cell surface. When tested in vivo, Porphyridium sp. polysaccharide conferred significant and efficient protection against HSV-1 infection: at a concentration as low as 100 μg/ml, it prevented the appearance and development of symptoms of HSV-1 infection in rats and rabbits. The polysaccharide did not exhibit any cytotoxic effects at a concentration of 2 mg/ml in vivo.     

紫球藻及其多糖抗菌性能初探

本文报道紫球藻提取液及其多糖溶液抗病原细菌、真菌性能的研究结果。采用管碟法分别测定紫球藻培养分泌物、藻体破碎后的水提物和醇提物、胞外多糖和胞内多糖水溶液等的抗菌能力。结果表明,各样品均有一定抗菌能力,紫球藻水提物和胞外分泌物抗菌性能较强。经比较分析,多糖是抗菌作用的主要组分。紫球藻提取物及其多糖对革兰氏阳性细菌(特别是对金黄色葡萄球菌和八叠球菌)的抑菌作用较为明显,具有一定开发价值。     

抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定

目的：从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法：以RSV F蛋白为靶抗原,通过“吸附-洗涤-洗脱-扩增”过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coli HB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western及Dot blot分析。结果：经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western及Dot blot分析表明为单链抗体。结论：利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。     

树鼩呼吸道合胞病毒感染动物模型的建立

探讨用灵长类动物树鼠句建立呼吸道合胞病毒(RSV)感染动物模型的可行性。28只树鼠句随机分为7组,每组4只,鼻内滴入106PFU RSV,感染后每24h检测1组。另取7只树鼠句鼻内滴入100μl Hep-2细胞培养液,滴鼻后每24h检测1只作对照。无菌取树鼠句肺组织进行病毒分离、空斑形成实验检测病毒滴度、病理检查和RT-PCR检测肺组织内RSV mRNA表达。结果显示:树鼠句感染RSV后,无明显呼吸道感染症状;树鼠句肺组织匀浆接种于Hep-2细胞上,第3、4、5实验组出现细胞病变效应(CPE);树鼠句感染RSV后肺部病理改变在3~7d较为明显,主要为间质改变;在106PFU感染浓度下树鼠句肺组织内RSV处于低水平复制,复制的高峰期在3~5d,峰值在第4d。提示:树鼠句可以用来建立RSV感染的动物模型。     

人呼吸道合胞病毒活疫苗研究进展

人呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要原因,也可导致免疫缺陷病人及老年人群显著发病和死亡.人呼吸道合胞病毒疫苗已被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)列为全球最优先发展的疫苗之一.经过50多年的研究,尤其是随着重组技术和反向遗传学的出现,对RSV疫苗的研究取得了重要进展,...     

牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。