高水分、富含淀粉植物组织的扫描电镜制备技术优化

应用常规高真空扫描电子显微镜观察生物样品必须经过脱水和干燥处理,但无论采用临界点干燥还是冷冻干燥方法,都存在样品表面不同程度失真的问题。植物高水分、富含淀粉组织样品经处理后,容易出现淀粉流失、细胞壁变形等现象,从而造成扫描图像粗糙,无法获得真实的细胞内部结构。本文通过对CO_2临界点干燥、化学固定样品冷冻干燥和新鲜样品冷冻干燥3种扫描电镜样品制备技术中后期制样进行机械断裂和液氮脆断改进,优化出两种植物高水分、富含淀粉组织的扫描电镜样品制备方法:(1)样品首先进行FAA化学固定,经冷冻干燥后用液氮脆断,对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞结构完整,细胞壁整齐,淀粉粒和蛋白轮廓明确,可用于分析淀粉粒和蛋白颗粒在细胞内的分布。(2)新鲜样品直接进行冷冻干燥,经液氮脆断后对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞壁整齐,淀粉粒轮廓更清晰,并且无蛋白颗粒干扰,用于分析淀粉粒在细胞内的分布更加理想。     

一种制备植物扫描电镜样品的新干燥法：叔丁醇冻结干燥法

叔丁醇冻结干燥法用于植物材料,获得了良好的效果。经常规固定的样品完成脱水以后浸泡在叔丁醇中,然后将含醇样品放入电冰箱中冷冻,待叔丁醇凝固后再转移到真空镀膜机的钟罩里,用机械泵抽真空,冻结的醇在低真空中升华后样品得到了干燥。SEM 镜检表明,样品的表面和细胞断裂面及其深层(可见到内质网的双层膜、线粒体的嵴、高尔基体潴泡叠层、核糖体颗粒等细胞器)的三维图象均优于用临界点干燥法所得到的样品图象,叔丁醇冻结干燥法用于植物 SEM 样品制备,是一种操作简单,干燥质量可靠、值得推广的方法。     

扫描电子显微镜植物材料的一种化学干燥技术

扫描电镜新鲜生物材料的制备,一般都要经过干燥处理,其目的主要是使样品不产生收缩畸变,以使样品的形态结构保持在生活状态,如此获得的样品图像才自然真实。现代广为应用的扫描电镜生物样品的干燥方法是临界点干燥(CPD)法。另外还有莰烯干燥法、乙腈干燥法和叔丁醇干燥法等。Jemes(1983)应用化学试剂六甲基二硅胺烷(nexamthyl disilazane,简称 HMDS),分子式[(CH_3)_3Si]_2对昆虫组织进行干燥处理并     

金针菇不同萃取物对肿瘤细胞的影响

比较冷冻干燥、鼓风干燥两种不同干燥方式对金针菇挥发性成分的影响,对干燥后香味物质较丰富的鼓风干燥方式获得的金针菇样品进行不同极性溶剂萃取并进行抗氧化及体外抗肿瘤试验。结果表明：两种干燥方式得到的主要挥发性成分均为醇类和醛类,但鼓风干燥后的金针菇样品中两类物质含量明显高于真空冷冻干燥方式获得的。体外药理实验表明不同萃取物在抗氧化和抗肿瘤细胞中均表现出良好的活性。     

用准饱和CO_2干操法制备两种肿瘤细胞的扫描电镜试样

采用准饱和CO_2干燥法(QSCD)制备SGC-7901人体胃癌细胞株贴壁细胞和HAC小鼠腹水型肝癌游离细胞的扫描电镜试样,结果显示,细胞形貌与临界点干燥(CPD)对照组无明显差异,但收缩率较后者减小。QSCD法突破了传统的无表面张力干燥条件,操作顺序简单;一次可干燥较多试样;样品室压力不超过70大气压,较CPD法安全。     

生物样品的对二氯代苯干燥法

以乳酸链球菌为材料,使用对二氯苯干燥法制备扫描电镜样品。照片表明,本方法所得细胞丰满、不变形,形态正常,无凹陷、断裂现象。本方法简单易行,便于推广。     

扫描电镜在天然食用色素研究中的应用

本文采用恒温干燥的方法制备出了不同状态的天然色素扫描电镜样品，用扫描电镜观察其超微结构并进行了对应比较，结果表明国内研制的β胡萝卜色素纯度较高，具有良好的开拓前景。     

如何防止花粉流失

植物花粉肉眼难以看到,在按扫描电镜常规方法制备样品很容易流失。如果在取材时将花药整体采取一起固定,操作时不碰破花药囊,花粉就不会流失。这样可按扫描电镜常规方法处理样品(双固定时间可延长到12小时以上,固定时需抽真空),待临界点干燥做完之后,再用镊子把花药轻轻夹到贴有双面胶纸的样品座上,捣碎花药囊花粉就会从囊中落出而粘在胶纸上,喷金后即可进行电镜观察。注:实验样品由林志华同志供给,蔡继炯同志拍摄电镜照片.     

扫描电镜生物样品的快速制备方法研究

本文通过改进菌类和纤毛等娇嫩样品在临界点干燥前的制备程序和适当的缩短梯度脱水的时间,使采用戊二醛单固处理的样品达到双固定的效果,提高了部分生物样品的制备质量,为制备娇嫩的扫描电镜样品提供了一条简易而快速的制备方法。     

用冰冻玻片可分散细胞涂片

应用冰冻玻片制备细胞涂片操作如下:①让洗净的玻片基本干燥,排成一列平放在小塘瓷盘中的玻璃捧上。②放置在冰箱的冰盒中(-5℃——10℃), 20-30分钟后取出。③用吸管吸取细胞悬液,吸管口置于冰冻玻片上方5-10cm处,滴一滴样品,由于重力的作用,样品在玻片上均匀散开,涂片即制成。冰冻玻片较光滑,样品滴易散开,因液滴较小,冰冻     

脱细胞生物材料样品的细胞毒控制技术研究

细胞毒控制是脱细胞生物材料制备过程中的关键工艺,该工艺不稳定是造成脱细胞材料细胞毒性高、生物相容性差的重要原因之一。脱细胞后,采用酒精振荡清洗的方法优化制备工艺,可有效降低脱细胞样品的残余细胞毒性,提高细胞毒等级。试验结果证明, 30%的酒精振荡清洗至少12 h以上可以将脱细胞样品的细胞毒稳定在Ⅰ级水平。这对于降低脱细胞生物材料制备过程的废品率,提高脱细胞生物材料样品的生物相容性和临床应用安全性具有积极意义。     

牛肾细胞染色体中染色质纤维的包装及RNP的分布

应用培养的牛肾（ＢＫ）细胞及分离的ＢＫ细胞染色体做常规透射电镜样品,经表面舒展技术和临界点干燥制备ＢＫ细胞染色体的扫描电镜样品,并结合电镜细胞化学研究了ＢＫ染色质纤维的包装及核糖核蛋白（ＲＮＰ）的分布。观察到ＢＫ染色体具有多级双股螺旋结构。在染色体横切面中,可见染色体中央有一低电子密度的无染色质区,该区内有大量ＲＮＰ物质。在染色质区ＲＮＰ较少,分布在染色质纤维间,与中央轴区的ＲＮＰ相连续,表明ＲＮＰ在染色体中呈不均匀分布。     

一种小麦叶片气孔保卫细胞观察样品的制备方法

以小麦(Triticum aestivum)花粉植株的叶片为材料, 利用整体透明技术制备小麦叶片气孔保卫细胞的观察样品, 比较了4种透明剂的样品制备效果。结果表明, 利用整体透明技术制备小麦叶片气孔保卫细胞观察样品, 无需经过叶片撕取和刮制步骤, 样品制备方法简便且高效; 用甘油溶液、饱和水合三氯乙醛及水合三氯乙醛与甘油的混合液3种透明剂处理小麦叶片后, 在普通显微镜下均可观察到清晰的气孔保卫细胞。     

不同干燥技术对金银花药用品质的影响

采用真空干燥、冷冻干燥、微波干燥、蒸后烘干、烘干和晒干等6种干燥技术对大白期金银花花蕾外观性状及内在品质的影响进行分析研究.结果表明:(1)微波干燥、蒸后烘干和冷冻干燥所获得的金银花外观品质好;(2)从水溶出物量和醇溶出物量上看,微波干燥、蒸后烘干和晒干技术所获得的溶出物量高;用比色法和HPLC法检测显示,蒸后烘干样品中有效成分———绿原酸、总黄酮含量最高,其次是微波干燥法,而烘干样品中含量最低;(3)不同干燥技术对金银花中营养成分———游离氨基酸和可溶性糖含量的影响以及对药用有效成分的影响不同,因此金银花作为药材使用时应选择蒸后烘干技术进行初加工;(4)晒干、冷冻干燥和微波干燥3种干燥方法对金银花挥发油主要组分种类没有产生影响,但相对质量分数仍有明显差异,只有晒干的金银花挥发油中检测出了9,19-环化-羊毛甾烯醇,而微波干燥的样品中维生素E含量最高,挥发油中γ-5-谷甾烯-3-醇、5,2-豆甾二烯-3-醇、菜籽甾醇相对含量较其它方法明显高出很多.因此,蒸后烘干和微波干燥技术可作为规模化干燥加工金银花的最佳方法.     

鞣酸处理大米草电镜样品的初步观察

1971年,Mizuhira和Futaesaku在研究电镜放射自显影时,发现鞣酸对微管的亚单位结构有良好的固定作用。此后,一些作者在进行生物超微结构的电镜研究时,都曾使用鞣酸处理样品,并对其作用机制进行了探讨。作者们认为鞣酸具有固定、正染、负染和媒染的作用。目前在透射电镜术中制备动物样品时,鞣酸已得到相当广泛的使用,但关于处理植物样品的研究报道极少。植物样品的制备一般比动物样品困难,其细微结构不易     

新鲜生物样品扫描电镜低压观察技术

扫描电子显微镜在生物学上的应用已很普遍。用扫描电镜观察生物表面所揭示的细微结构、远比光学显微镜图象清晰、分辨率高,为生物学的研究提供了很好的工具。由于扫描电镜生物样品的常规制备比较烦琐,须经固定、脱水、干燥,表面喷镀金属膜等过程,不但样品制备周期较长,而且因操作环节繁多往往容易造成样品损伤和变形,使图象不够理想。而新鲜     

天然聚合物多孔支架的冻干工艺研究

目的 :通过改变冷冻干燥的工艺条件 ,缩短制备聚合物多孔支架的时间。方法 :把冷冻好的聚合物溶液在溶剂的冰点以上直接真空升华干燥 ,通过对支架的孔结构和外观的考察 ,评价其作为制备多孔支架工艺的可行性。结果 :制备了壳聚糖、胶原、明胶 3种不同材料的支架 ,都具有均匀的通孔结构 ,可应用于组织工程研究。结论 :在比冰点高的温度下对冷冻的样品进行真空干燥 ,可以制得多孔支架 ,并能使制备的时间大大缩短 ,但该工艺方案有时会产生开裂和塌陷 ,影响支架的质量 ,因此还有待进一步完善。     

大熊猫气味标记DNA的制备和序列分析

大熊猫气味标记在其个体间的通讯中具有重要意义。用不同方法收集了７只大熊猫个体的９个气味标记样品,运用Ｉｎｓｔａｇｅｎｅ Ｋｉｔ制备出了ＤＮＡ。采用ＰＣＲ扩增线粒体Ｄ－环区和细胞色素ｂ基因、Ｔｈｒ－ｔＲＮＡ基因片段并作序列分析。结果提示,不同收集方式所得气味标记样品均有ＤＮＡ,但用干棉花收集样品的方法最佳。该方法为大熊猫的遗传多样性研究提供了新的简捷有效的ＤＮＡ来源。     

生物驻极体载流子特性分析

对猪骨这一生物驻极体中的电荷载流子的特性进行了一些分析.结果表明.在正常状态下.动物骨骼内部的导电载流子主要来自于其胶原纤维和基质细胞中的水分子.这时用范畴堡尔法测得其霍尔系数为负值.具有N型半导体的一些特征.若对高温干燥处理后的猪骨进行测量.则观察到其霍尔系数的反向突变,显示出P型半导体的导电性.这一转变被解释为水分子的丧失使样品中的正离子导电从次要地位转变为主要地位,加热时样品中水分子的迁移过程会在短接的外电路中形成一方向恒定的负电流峰,对电流峰的计算表明,猪骨中负电荷的激活能为0.86eV左右.     

新疆天山一号冰川地区12种藓类植物叶形态结构研究

采用石蜡切片和扫描电镜的方法,对新疆天山一号冰川地区的12种藓类植物叶片结构及叶表面微形态进行了观察。结果显示,不同苔藓植物叶细胞、中肋、细胞壁、细胞表面等各项指标在类型、大小、分布、干燥时细胞壁的凹陷程度以及表面角质层纹饰和小孔形态、分布等都明显不同,这些微形态特点不仅在藓类植物属下种间的区分上具有分类学意义,同时也反映出藓类植物叶片为保水抗旱,抵御长期寒冷、多风和强光照射等恶劣环境对其的伤害而形成的生存策略。本研究结果为苔藓植物在极端环境地区的生态学功能研究提供了重要的科学依据。