光合磷酸化偶联机制研究——Ⅷ、6-苄氨基嘌呤对光合磷酸化的促进作用

在反应介质pH 7.2条件下,观察到6-BA处理叶绿体后,能促进循环(+PMS)和非循环(+FeCy或MV)的光合磷酸化反应,提高叶绿体的偶联程度,增加P/e_2比值。此促进现象与叶片的生理状态密切有关。在对光合磷酸化有促进作用的情况下,6-BA可改善类囊体的能化状态,增加高能态的积累。对光激活的叶绿体膜上Mg~(2+)-ATP酶和偶联因子热活化的ATP酶活力均表现出促进作用。6-BA的作用部位可能与膜上的偶联因子有关。     

第五讲 高等植物叶绿体膜结构和功能

一、引言高等植物光合作用是在特定的细胞器中进行的,它就是叶绿体。叶绿体照光后光能吸收、激发电子、经一系列载体传递、到还原二氧化碳、合成淀粉都是在叶绿体中完成的。当叶绿体经低渗溶液胀破后可溶物质外     

叶绿体结构状态与光化学活性的关系

叶绿体被膜阻碍以Fecy为受体的电子传递,而对以DCIP为受体的电子传递无妨。被膜完整度越高则P/O值也越高。类囊体膜结构的完整度高,则电子传递速率和P/O值也比膜结构受到破损时高。类囊体膜结构的完整度对保持PS Ⅱ活性是必要的,随着完整度的降低,PS Ⅱ在电子传递中所占比重相应减少。     

叶绿体的形态、结构和发育

为了证实高等植物的光合过程是不是在叶绿体里进行的,人们把叶绿体从绿色细胞中分离出来,然后把这些离体的叶绿体放在必需的制剂里,在光照下,看到这些离体的叶绿体确是可以同化二氧化碳为碳水化合物,而且它的光合能力也接近于完整叶片的。这就证实叶绿体是高等植物光合作用的完整单位,也就是说,光合作用的整个过程是在叶绿体内进行的。如果把叶子比喻做合成有机物的绿色工厂,那么,叶绿体就是绿色工厂里的重要车间了。     

批量分离玉米活性精细胞方法的某些改进(英)

目前,从玉米花粉中分离活性精细胞时,若用半乳糖作低渗介质,虽然得率较高,但是花费较大;若以蔗糖为介质,花粉胀破率（约50％）与精细胞得率（17％左右）均较低。而且,所用的Percoll不连续密度梯度离心,对于大批量分离操作繁琐。通过4种不同方法对玉米花粉的胀破效果的比较,发现经BKS35温育后再以蔗糖低渗缓冲液处理,花粉胀破率可提高到95％以上。该花粉胀破液经过滤,用30％Percoll溶液离心分离精细胞,得率达23．4％。用这种改进的批量分离方法,6h内可从100g新鲜花粉中获得约1．2×108生活精细胞。它不仅提高了产率,以满足玉米精细胞表膜特异蛋白生化分析的需要,而且还简化了操作,更具有经济节省等优点。     

草酰乙酸和苹果酸对菠菜叶片和完整叶绿体光合作用的影响

观测了OAA和MA对菠菜叶征和完整叶绿体光合作用的影响。结果显示,当叶片切块在20μmol/L的OAA存在时,其叶片的光合放氧速率增加了89％,经OAA处理的离体完整叶绿体的光合放氧速率增加了72％;当反应体系中存在有较高浓度的NaHCO3时,OAA的作用不明显。叶片经20μmol/L的MA处理后,叶片光合放氧速率比对照高127％。用CO2分析仪观测了处理后叶片的净光合速率（Pn）,结果显示,OAA和MA处理后的叶片Pn值分别是对照的117％和111％。对在C3植物中建立C4微循环系统来提高光合作用效率的可能性进行了讨论。     

快速提取、纯化叶绿体4.5SrRNA的方法

我们采用植物叶与热缓冲液、苯酚直接混合(约65℃)匀浆,离心抽提和乙醇沉淀后,得到植物叶总RNA。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化,即可得到叶绿体4.5S rRNA,此法不仅操作简单,而且得率高。 同时,经过对同一植物的不同组织或不同细胞组分,如根、细胞质、叶绿体和叶绿体核糖体小分子RNA的提取与鉴定,以简便的方法证明了4.5S rRNA是叶绿体核糖体成份,也证明了我们所采用的提取、纯化4.5SrRNA方法的可靠性。     

草酰乙酸和苹果酸对菠菜叶片和完整叶绿体光合作用的影响

观测了OAA和MA对菠菜叶片和完整叶绿体光合作用的影响.结果显示,当叶片切块在20μmol/L的OAA存在时,其叶片的光合放氧速率增加了89%,经OAA处理的离体完整叶绿体的光合放氧速率增加了72%;当反应体系中存在有较高浓度的NaHCO3时,OAA的作用不明显.叶片经20 μmol/L的MA处理后,叶片光合放氧速率比对照高127%.用CO2分析仪观测了处理后叶片的净光合速率(Pn),结果显示,OAA和MA处理后的叶片Pn值分别是对照的117%和111%.对在C3植物中建立C4微循环系统来提高光合作用效率的可能性进行了讨论.     

叶绿体小分子RNA的分离纯化和鉴定

本文采用低速匀浆、过筛的方法从植物叶中分离得到了完整、纯净的叶绿体。将叶绿体与提取缓冲液、苯酚混合匀浆抽提叶绿体 RNA。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳与文献已发表的已知酵母5S RNA、菠菜叶绿体4.5S RNA 及小麦5S RNA、4.5S RNA 的电泳迁移距离进行比较,发现芹菜叶绿体中小分子 RNA(沉降系数为5S 左右的 RNA)中除含有5S RNA 和4S RNA 外,还含有两种4.5S RNA。而水杉和银杏叶绿体小分子 RNA 中只含有5S RNA 和4S RNA。     

芜菁花叶病毒外壳蛋白在寄主植物叶绿体中的积累及其对光系统II活性的影响

分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康对照的青菜苏州青品种(Brassica chinensis L. cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B.juncea L. cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中。免疫金标记电镜实验显示TuMV-CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中。对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/Fo、Fv/Fm、φPSII、qp值都有不同程度的降低,qN值增大。实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统II(PS II)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因。     

完整叶绿体的快速制备及其完整率的测定

具有固定二氧化碳能力,或有以CO_2为底物放氧活力的离体叶绿体,要求具有完整被膜。失去被膜的叶绿体,由于内含酶系的流失,CO_2固定和以CO_2为底物的放氧活力也就丧失。叶绿体的被膜比较脆弱,容易在分离过程中破损,故对这种完整叶绿体制备的     

芜菁花叶病毒外壳蛋白在寄主植物叶绿体中的积累及其对光系统Ⅱ活性的影响

分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康时照的青菜苏州青品种(Brassica chinensis L. cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B.juncea L.cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS-PAGE电泳和Weste rn blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中.免疫金标记电镜实验显示TuMV-CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中.对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/F.、Fv/Fm、φPSII、qp值都有不同程度的降低,qN值增大.实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统Ⅱ (PS Ⅱ)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因.     

吸附精制百日咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂人体接种反应和血清学效果观察报告

在陕西省大荔县所辖的五个乡(镇)、二个工厂319名3～6月龄婴幼儿中进行吸附精制百日咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂人体接种反应及血清学效果观察。从人体接种反应观察结果中看出,新研制的吸附精制百、白、破混合制剂的全身反应中没有出现中、强反应,而老百、白、破混合制剂则出现中反应9例(占接种人数的8.6％)、强反应2例(占0.92％);局部反应中前者中反应1例(占0.96％),后者为10例(占9.28％);局部硬结反应中,前者没有出现中、强反应,而后者出现5例(占4.58％)。说明新研制的吸附精制百、白、破混合制剂的接种反应极为轻微,安全性上明显地优于老百、白、破混合制剂。血清学测定结果表明,吸附精制百、白、破混合制剂免疫后产生出五种抗体应答,百日咳凝集素水平≥1:320者为73％,免疫后较免疫前增长167.18倍(P相似文献   

茶树叶绿体及其蛋白的分离研究

茶树叶片叶绿体的有效分离纯化是进行茶树叶绿体代谢组学和蛋白质组学研究的基础.本文以茶树鲜叶为材料,通过叶绿体得率、希尔反应等纯度和完整度指标,比较了Percoll密度梯度离心法和蔗糖密度梯度离心法对叶绿体分离纯化的效果;通过蛋白质含量和SDS-PAGE电泳图谱,比较了涨破法和冻融法对叶绿体蛋白的提取效果.结果发现Per...     

叶绿体结构和功能的研究——Ⅴ、完整叶绿体的光合作用的放氧

通常所称完整叶绿体,在结构上维持着被膜的完整,在功能上具有较高效率的固定二氧化碳的能力,或者具有以CO_2为底物的放氧能力。完整叶绿体的放氧涉及光合电子传递、磷酸化和碳素固定。在研究叶绿体能量转换及其调节控制的机理方面,完整叶绿体确为比较理想的实验材料。我们用葡萄糖代     

低剂量CO2激光对茄子,青椒叶绿体超微结构影响的初步观察

本试验用功率密度为825mw/cm~2的CO_2激光照射茄子干种子(含水量8.33％)13s、青椒干种子(含水量5.4％)3s,分别以Os为对照(ck)。照射后播于生长箱内,出苗10天分苗于玻璃温室内,于四叶期取样观察成熟叶片叶绿体的超微结构。发现激光照射处理的茄子、青椒的叶绿体的基质片层、基粒片层有明显的吸胀现象。     

几种因子对离体豌豆叶绿体蛋白质合成的影响

利用制备的豌豆完整叶绿体研究了离体条件下蛋白质合成的条件。结果表明：叶绿体蛋白质合成的饱和光强为450μmol-2s－1,合成的速率在最初5min内最大,此后随时间延长而合成速率下降;K 对蛋白质合成有促进作用,其最适浓度为30-40mmol/L,进一步增加浓度其促进作用反而降低;Mg2 在1mmol／L以下对蛋白质合成有轻微的促进作用,当浓度超过1．5mmol/L则开始产生明显的抑制;叶绿体的蛋白质合成随着外源氨基酸浓度的增加而很快地增加,但赵过200μmol/L以后蛋白质合成随浓度增加而有所降低。DCMU抑制叶绿体蛋白质的合成,当浓度达10μmol/L时,其抑制作用达41％。荧光自显影结果表明,叶绿体合成的主要问质蛋白为Rubisco大亚基,合成的类囊体膜蛋白中以32kD蛋白较为明显。     

中国野生葡萄叶绿体分离及叶绿体DNA提取的研究

以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料,比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示:(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体,但与柱式植物叶绿体DNAout试剂盒相比,改良的高盐-低pH法得到的叶绿体浓度高、杂质少,更适合中国野生葡萄叶绿体分离。(2)柱式植物叶绿体DNAout试剂盒提取的cpDNA,其OD260/OD280在1.28~1.36之间,质量浓度为4.2~7.8ng·μL~(-1),质量低,不能满足后续测序要求;而改良的高盐-低pH法提取的cpDNA,其OD260/OD280值在1.84~1.90之间,质量浓度为2 514.4~4 133.7ng·μL~(-1),质量高,纯度好,能满足后续测序要求。研究表明,改良的高盐-低pH法能简便、快速获得中国野生葡萄完整叶绿体及高质量cpDNA,并且提取的cpDNA可满足后续测序要求,为葡萄属植物叶绿体基因组的深入研究奠定了基础。     

油菜叶绿体被膜的制备和Toc33的检测

采用蔗糖密度离心方法分离完整叶绿体,进一步分离叶绿体被膜,借助SDS-PAGE分析了2种油菜叶绿体被膜的蛋白组分.用对拟南芥叶绿体外被膜上存在Toc33的特异抗体,检测到油菜叶绿体被膜上存在Toc33转运蛋白.Toc33在2种油菜中的相对含量不同,黄化油菜叶绿体被膜中高于野生油菜叶绿体被膜.     

增甘膦(Glyphosine)和调节膦(Krenite)对叶绿体光化学反应的效应

用2～12 mM增甘膦处理叶绿体,其循环磷酸化活力均高于对照,经增甘膦处理的叶绿体,再用两倍体积的缓冲液洗涤两次并离心,所得叶绿体的磷酸化活力仍比对照的要高。对照叶绿体的非循环磷酸化速度在处理时的较高温下降低得很多,而处理的叶绿体的活力变化不大或略有上升。增甘膦处理的叶绿体,其非循环磷酸化活力和非循环磷酸化条件下的铁氰化钾还原活力均比对照的要高,故其磷/氧值维持不变或略有下降。在5×10~(-5)～5x10~(-3)M,调节膦促进铁氰化钾还原,抑制非循环磷酸化,表现出明显的解联效应。调节膦也抑制循环磷酸化。这种抑制是与反应底物非竞争性的。在抑制磷酸化的有效浓度范围内,调节膦也抑制膜上ATPase活性和光诱导的叶绿体的质子吸收。增甘膦能促进电子传递从而也促进光合磷酸化。调节膦则具有光台磷酸化的解联剂的特征。