小熊猫圈养种群遗传多样性及其影响因子

利用寡核苷酸指纹探针ＬＺＦ－Ｉ检测了成都大熊猫繁育研究基地仿生态圈养场小熊猫种群全部２２只个体的ＤＮＡ指纹,检测结果表明其遗传多样性参数如下：⑴各体间ＤＡＮ指纹图的相似性为０．１７２;个体Ａ的指纹谱带在个体Ｂ中出现的概率为０．１８０６。⑵圈养种群的等位基因频率为０．０９４８,杂合率为９０．５２％,⑶种群中指名亚种亲本个体的引进是影响该种群遗传多样性的主要因子。     

应用微卫星标记分析圈养大熊猫遗传多样性

以来源于成都大熊猫繁育研究基地和中国保护大熊猫研究中心的34只圈养大熊猫(分为a群体和b群体)和7只圈养野生大熊猫(圈养野生群)作为研究对象,利用AY161177～AY161218、Ame-μ5～Ame-μ70和g001～g905等30个微卫星标记对其遗传多样性现状进行分析,并探讨保持圈养大熊猫遗传多样性的方法.微卫星数据表明,30个微卫星标记多态性好(PIC=0.621～0.640),圈养大熊猫遗传多样性水平(a群体:A=5.48,Ho=0.475,He=0.696;b群体:A=5.24,Ho=0.453,He=0.719;圈养野生群:A=3.80,Ho=0.514,He=0.725)高于6个濒危物种(Ho=0.210～0.390,He=0.150～0.430)但低于3个非濒危物种(Ho=0.620～0.710),圈养大熊猫遗传多样性水平都保持在较高水平,但圈养群遗传多样性水平与圈养野生群相比有所降低.F统计量及基因流Nm分析结果证明,a、b两群体间遗传分化程度不高(Nm=2.610,Fst=0.0874,Fit=0.4116),存在个体交换和一定程度的近交,b群体近交程度高于a群体(a群体Fis=0.3221,b群体Fis=0.3983).因此,现阶段圈养大熊猫的管理重点是避免近交和遗传多样性丧失,将圈养大熊猫种群作为同一管理单元,把纠正大熊猫系谱中的错误、科学选择大熊猫个体进行群体间交流作为关键点,利用微卫星技术保持和提高大熊猫种群的遗传多样性水平.     

中国圈养梅花鹿的遗传多样性和遗传结构

东北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)的野生种群已濒临灭绝,但其圈养种群遍布全国各地,是我国圈养梅花鹿的主要品种(亚种)。为了探讨圈养梅花鹿种群作为东北梅花鹿野外放归项目资源种群的可行性,测定了来自9个圈养种群45只梅花鹿个体的线粒体DNA控制区的部分序列,以此分析我国圈养梅花鹿种群的遗传多样性和遗传结构。结果表明,我国圈养梅花鹿种群的遗传多样性并不贫乏,种群之间并没有发生显著的遗传分化。因此,东北地区的圈养梅花鹿种群可以作为野外放归项目的资源种群,而野外放归项目的建群者应来源于东北地区的多个圈养种群。     

小熊猫种群遗传结构和地理分化

本文采用分子系统地理学的研究方法 ,对我国小熊猫 (Ailurusfulgens)地理分布格局的形成原因进行了探讨。我们从四个地理单元的 32号样品中成功地扩增出了 371bp的线粒体DNA控制区片段 ,在所有可比较的 35 7bp的序列中 ,发现 2 9个变异位点 ,其中转换和颠换分别为 2 1和 8,没有插入 /缺失。在四个地理单元中 ,共有 16种线粒体DNA单倍型 ,且在各地理单元中都具有较高的单倍型的多态性。进一步分析表明 ,各单倍型之间的遗传距离平均为 1 6 0 % ,76 5 9%的遗传差异发生在地理单元间 ,仅 2 3 4 1%发生在单元内。分子变异分析和系统重建结果也表明 ,各地理单元之间不存在共享的单倍型 ,YN (云南地理单元 )与XL (相岭地理单元 )和QL (邛崃地理单元 )之间存在着显著的遗传分化 ,FST分别为 0 336和 0 35 1(P <0 0 0 1) ,其余地理种群之间分化不明显 (P >0 0 5 ) ,单倍型缺乏比较明显的地理分布格局 ,各地理单元中的单倍型相互散布在不同的分布群中。经Fs检验 (Fs=- 10 12 1) ,并结合化石资料 ,我们认为由于受第四纪气候和环境变化的影响 ,小熊猫种群在进化过程中曾经历种群暴发而不断扩散 ,从而形成今天的分布格局。     

蒙新区子午沙鼠种群的遗传多样性和遗传结构

为了探讨蒙新干旱区景观和环境因素对子午沙鼠种群遗传结构的影响,我们利用8 个多态性的微卫星位点,对子午沙鼠14 个局域种群的160 个个体进行了种群遗传多样性和遗传结构的分析。微卫星结果显示种群具有高的遗传多样性,微卫星位点的等位基因数(A)为22. 50 ±3.02 (19 ～ 28),多态信息含量(PIC)为0.912 ±0. 02 (0.872 ～ 0. 929);种群观测杂合度(HO )为0.68 ± 0. 19 (0. 52 ～0.85),期望杂合度(HE )为0.79 ± 0. 08(0. 71 ～ 0.85)。分子变异分析(AMOVA)结果显示,所得到的3 个组之间已发生显著的遗传分化(P < 0. 001)。
Mantel 检测结果表明,子午沙鼠种群遗传结构与地理距离无显著的相关性(P = 0.270 0),而在多元线性模型中,蒙新干旱区的海拔高度是影响种群遗传结构的关键因素。     

卧龙圈养大熊猫遗传多样性现状及预测

以中国最大的大熊猫圈养种群—四川卧龙中国大熊猫保护中心的圈养种群为对象,以８个大熊猫微卫星位点为分子标记, 探讨了大熊猫圈养种群的遗传多样性, 并与邛崃野生种群及其他７个濒危物种进行比较。微卫星数据表明, 圈养种群的遗传多样性水平(A＝5.5, He ＝0.620, Ho＝0.574) 低于邛崃野生种群(A＝9.8,He＝0.779,Ho＝0.581),但高于其他7 个濒危物种的种群(He＝0.13~0.46)。在此数据的基础上对未来100个世代内圈养种群遗传多样性的变化情况做出了预测。结果表明假设种群数量比现在扩大一倍, 经历100个世代后也只会使平均等位基因数少减少0.4。因此继续增加野生个体对保持遗传多样性的意义已经不大, 建议该圈养种群的保护策略应将重点放到制定更有效的繁殖计划以避免近交上。     

圈养小熊猫繁殖行为变化及繁殖行为对策

In order to investigate the change of reproductive behaviors and understand reproductive strategies of both male and female red pandas, one-year behavioral observation was conducted through the focal sampling method in the Chengdu Research Base of Giant Panda Breeding from December 1999 to November 2000. Our results indicated that reproductive behaviors showed significant differences between the estrous and non-estrous seasons. Frequencies of the rubbing anogenital, sniffing and licking marking were much higher in estrus than in non-estrus. Bleating only appeared in the estrus and can be regarded as an estrous indicator.The result also demonstrated that both male and females applied different reproductive behavioral strategies. Frequencies of activity, rubbing anogenital, licking and sniffing marking, and bleat were much higher in the male than in the female. However, those of resting and investigating were much lower in the male than in the female. This indicated that the male was more active than the female during the estrus and might imply that the male acts mainly as an estrous message sender, and the female as a message receiver in the estrous season.     

邛崃和相岭山系小熊猫种群的遗传结构

测定了来自小熊猫主要分布的两大山系———相岭和邛崃的 2 3只小熊猫样品的mtDNA控制区 5’端 5 69bp序列 ,共发现 2 3个变异位点 ,定义了 8种单元型 ,其中邛崃山系 5种 ,相岭山系 3种。分析结果表明 ,两山系均表现出较低的核苷酸多态性 ;单元型多态性差异明显 ,其中邛崃山系高于相岭山系。分子变异分析表明 ,两山系的小熊猫种群间具有较高的基因流 (Nm =2 95 ) ,两种群遗传分化不明显 (ΦST=0 1 45 ,P >0 0 5 )。结合细胞色素b序列分析 ,认为两种群可能是从经历了近期瓶颈效应的同一祖先群衍生而来 ,并且可将两山系的小熊猫种群作为一个管理单元进行保护和管理     

濒危黑颈长尾雉圈养种群的RAPD遗传多样性分析

运用RAPD技术对黑颈长尾雉圈养种群的遗传多样性进行了分析。从50条随机引物中筛选出14条引物,对24个个体的基因组DNA进行了PCR扩增,从检测出的119个位点中有98个多态位点,占总位点的82.35%,标记的分子量大小范围是0.2～3kb。24个个体间的遗传距离幅度0.1597～0.4874,平均是0.2810;用软件NTsys2.10e构建了24个个体相互关系的分支图,24个个体可分为3个类群。实验表明:黑颈长尾雉圈养种群的遗传多样性水平较高,圈养种群内遗传差异性较大。     

福州地区圈养小熊猫的饲养与繁殖

福州大熊猫研究中心于1994年引进小熊猫进行人工饲养。2000年小熊猫繁殖成功。2000～2005年累计饲养成年雌性小熊猫54只,其中33只小熊猫出现发情行为,发情率61％。发情的小熊猫中19只怀孕和分娩,受胎率为57．6％,共产仔36只,幼子育成9只,育成率25％。本文报道了这期间小熊猫的饲养管理和繁殖情况,并讨论了两者间的关系。     

Scent-marking in captive red pandas (Ailurus fulgens)

Three male and three female captive red pandas (Ailurus fulgens) were observed during and outside of the breeding season to examine changes in scent-marking behavior. Variation in scent-marking was analyzed with respect to site preferences, sex differences, onset of breeding, behavioral correlates, and environmental factors. Both males and females exhibited significant preferences for particular marking sites, those being prominent points in the enclosures. Males showed significantly higher scent-marking frequencies than females, except in one enclosure where increased marking behavior was associated with the presence of young. Sexual dimorphism in the pattern of marking was also observed, with males showing a bidirectional mark and females a unidirectional mark. Female marking was greater during the breeding season. Sniffing and number of waddles per mark were associated with scent-marking. Temperature change was not related to frequency of scent-marking. These results are compared with scent-marking behaviors in other species of carnivores and functional explanations are suggested.     

Demographic trends in a captive population of red pandas (Ailurus fulgens)

Birth and survivorship data based upon 39 litters born over a ten-year period are examined and discussed. Reproduction in red pandas is characterized by seasonal breeding, small mean litter size, and relatively high survivorship of young, and in general follows a typical “K-selected” life-history strategy. The mean litter size was two, and the sex ratio at birth was approximately 1 male to 1.11 females. Higher male mortality in the early age classes resulted in a sex ratio in favor of females. Mortality was not correlated with age or experience of the mother but was found to be highly positively correlated with an increase in the inbreeding coefficient of the young. There was no significant difference in mortality among the different litter-size classes, and in general mortality decreased with age. Recommendations concerning future management for the study population are given.     

圈养小熊猫的昼夜活动节律

Daily activity rhytlms of three radio-collared captive red pandas were monitored individually at 15 minute intervals for 3 euntinuous days each month at Yele Nature Reserve, Xiangling Mountains, June- October 1995. Our data indicated that mean rate of activity [0.51 ) of captive red pandas was lower than that of wild red pandas. Three captive red pandas showed similar daily activity patterns, being least active during night and more active during daytime. Mean rate of activity during daylight (0.58)was higher than during nighttime (0.41). Daily mean durations of activity and rest were 12.21 hours and 11.79 hours, respectively. Active times of captive red pandas accounted for 50.6% of each 24 hours, of which 66.5% were recorded during daylight and 33.5% during night. Two active peaks appeared at07: 30-09: 15 and 17: 30- 19: 00. We recorded a mean of 2.17, 2.13 and 0.88 long, mid-length, and short resting bouts daily, which had mean durations of 3.47, 1.65 and 0.87 hour, respectively.Among these long rests, 46.1% occurred during daytime and 53.8% during nighttime.     

圈养小熊猫几种病毒的PCR检测

本文采用巢式PCR/ RT-PCR 方法,对我国10 个动物园中无临床症状的圈养小熊猫的71 个肛拭子和61 个唾液拭子样品,进行犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬冠状病毒(CCV)、犬腺病毒(CAV)和犬疱疹病毒(CHV)的检测,以评估我国圈养小熊猫是否面临这几种病毒的威胁。对阳性PCR 结果进行测序分析,并与GenBank 上的序列进行比较。结果,在肛拭子样品中检测到3 个CPV 和6 个CCV 阳性结果,经测序后,与GenBank 上序列的同源性分别达99% 和100% 。而在唾液拭子样品中没有检测到任何阳性结果,且CDV、CAV和CCV 的检测结果均为阴性。从阳性CPV 的肛拭子样品中分离到一株细小病毒毒株,表明圈养小熊猫已受到细小病毒和犬冠状病毒的感染,今后应加强这两种病毒的预防工作。本文所采用的PCR 方法检测病毒性疾病,能检测到微量的病毒模板,可对小熊猫病毒性感染进行早期诊断。     

圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用

在过去34年的圈养大熊猫种群保护工作中,我们成功建立了全球最大的大熊猫精子库,目前已保存50只大熊猫个体总计7 000余支细管冷冻精液(冻精)。冷冻精液一方面可以使物种的遗传资源得到长久保存,另一方面可以通过人工授精的方式促进种群繁育。但是,圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用尚未有明确报道。本研究首先根据成都大熊猫繁育研究基地2000—2014年冷冻精液人工授精数据,对比分析了冻精人工授精个体和圈养种群的遗传多样性。结果显示,冻精人工授精个体遗传多样性均高于同年圈养种群的平均遗传多样性,表明在繁殖年份中冻精人工授精可以显著提高圈养大熊猫种群的遗传多样性。统计精子库中所有冻精个体的平均血缘系数并与圈养种群进行对比分析,探究冷冻精液对圈养种群遗传多样性的潜在作用。结果显示,精子库中有21只已死亡个体的精液,其中有66.67%的个体平均血缘系数低于圈养种群;有14只20岁以上个体的精液,其中有50.00%的个体平均血缘系数低于圈养种群;另有15只20岁以下个体的精液,其中有53.33%的个体平均血缘系数低于圈养种群,表明冷冻精液对圈养种群遗传多样性的保护具有重要价值。综上所述,冷冻精液不但有效保存了大熊猫遗传资源,而且在保护圈养种群遗传多样性方面具有积极的促进作用。     

成体雌性小熊猫卵巢组织学观察

2000 年至2009 年,12 只固定于10% 福尔马林中非生殖系统疾病死亡的小熊猫卵巢组织,按常规组织学技术制作组织切片,HE 染色,光学显微镜观察。结果:(1)不同发情时期卵巢均有原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡分布。发情期的卵巢未观察到典型的成熟卵泡和卵母细胞; (2)原始卵泡数量较少,初级卵泡数量较多,多数初级卵泡和大多数的次级卵泡都处在闭锁状态;(3)卵泡腔出现之前,卵母细胞的直径和卵泡直径同时增长;卵泡腔出现之后,卵母细胞直径增长较慢,卵泡直径增长较快; (4)不同发情时期的小熊猫卵巢均存在大量的间质腺细胞;(5)妊娠小熊猫和发情间期无妊娠小熊猫的卵巢均有发育正常的黄体;(6)卵泡细胞发育呈低柱状至柱状时出现透明带。结论:(1) 卵泡闭锁主要发生在初级卵泡阶段,仅少数卵泡能发育至次级卵泡;(2)卵母细胞和卵泡生长呈双相生长的趋势; (3) 不同发情时期的小熊猫卵巢间质腺都发达; (4)发情排卵后,非妊娠黄体与妊娠黄体维持的时间相似,证实了小熊猫存在假孕现象。     

日粮中霉菌毒素引发小熊猫中毒性肝炎的临床调查

本文报道了小熊猫霉菌毒素中毒性肝炎的群发病案。35 只小熊猫中,21 只发病,5 只死亡。通过日粮成分调查,饲料中霉菌毒素检测,病原微生物检查,血液参数测定,病理学检查和动物试验,确诊为呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(F-2)毒素中毒。依据调查结果对小熊猫进行治疗,小熊猫预后良好。结论:(1)小熊猫对霉菌毒素(DON 和F-2 毒素)极其敏感,应予以高度重视;(2)DON 和F-2 毒素存在相互增强作用,对小熊猫的毒性作用主要为肝毒性和肾毒性,并可导致小熊猫机体免疫功能降低;(3)小熊猫对霉菌毒素的耐受性与环境的适应性有关,应激因素能提高小熊猫对霉菌毒素的敏感性。