芜菁花叶病毒(TuMV)特性的研究进展*

芜菁花叶病毒 (TuMV)是世界范围内广泛分布的重要病毒。从生物学和理化特性、基因组结构、侵染和繁殖、变异及利用转基因技术提高病毒抗性等方面对TuMV的国内外研究现状进行了阐述。     

芜菁花叶病毒(TuMV)特性的研究进展

芜菁花叶病毒(TuMV)是世界范围内广泛分布的重要病毒。从生物学和理化特性、基因组结构、侵染和繁殖、变异及利用转基因技术提高病毒抗性等方面对TuMV的国内外研究现状进行了阐述。     

萝卜种质资源对芜菁花叶病毒的抗性鉴定与评价

病毒病是危害萝卜作物的主要病害之一,芜菁花叶病毒(TuMV)作为萝卜病毒病的主要毒源,给萝卜生产造成严重经济损失。由于缺乏精准鉴定,萝卜育种中缺乏稳定可靠的抗TuMV材料。本研究就国家蔬菜种质资源中期库提供的来自中国25个省份125个县市和其他3个国家的150份代表性萝卜种质资源对TuMV的抗性进行了苗期鉴定和ELISA检测,筛选出23份抗病材料,其中1份表现免疫。这些材料对萝卜抗病毒病基因定位和新品种培育具有重要意义。     

乌桕金带蛾核型多角体病毒的理化性质和内切酶分析

1985年我们从自然罹死的乌桕金带蛾(Eupterote sapivora yang)幼虫分离到一株核型多角体病毒,经电镜观察认为是杆状病毒属(Baculovirus)中的一种病毒(简称EsNPV)。研究昆虫病毒的分子遗传学及基因重组和表达,制备安全有效的昆虫病毒杀虫剂等,首先都要纯化病毒,对其理化性质需要有较全面的了解。为此,本文对该病毒的理化性质和限制性     

流行性感冒裂解疫苗免疫原性试验及电镜观察

实验报告了以三硝基甲苯X-100(Triton X-100)为裂解剂对流行性感冒病毒裂解效果的电镜观察结果及裂解疫苗的免疫原性。通过对病毒纯化、裂解、再纯化制备的3批流行性感冒裂解疫苗样品的电镜观察,表明使用此裂解剂能使疫苗中的病毒裂解完全,无完整病毒颗粒,裂解效果好。安全试验和免疫试验结果表明疫苗的安全性好,免疫效果好。     

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白聚集体特性及与其它包涵体蛋白的血清学关系

纯化的多角体碱解释放多角体蛋白,经等电点沉淀和柱层析对多角体蛋白进行分离纯化,结合SDS-PAGE、免疫双向扩散、免疫电镜等方法,证明棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)的多角体蛋白以聚集体形式存在。用ELISA法检测包涵体蛋白之间的血清学关系,结果表明,与黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)和粘虫颗粒体病毒(PsGV)颗粒体蛋白相比较,HaNPV多角体蛋白与葡萄天蛾核型多角体病毒(ArNPV)和黄地老虎核型多角体病毒(AsNPV)多角体蛋白之间的血清学关系更为密切。     

以双链核糖核酸为基因组的病毒的研究 Ⅰ.家蚕细胞质多角体病毒的简易纯化及其性质

以双链核糖核酸为基因组的病毒寄主范围很广,如哺乳动物的呼肠病毒,昆虫的细胞质多角体病毒,植物的水稻矮缩病毒,以及某些微生物的病毒,已经发现有十余种之多。研究这类病毒的感染及复制特性在理论上和实际上都具有重要的意义。本文对家蚕细胞质多角体病毒的纯化,提供了一个简易的方法——分子筛凝胶柱层析,其特点是简便,适于大量制备。纯化病毒制剂经紫外光吸收测定、凝胶电泳及电镜观察都表明是均一的。生物感染活力LD_(50)为1.11×10-~(10)克/头。     

以双链核糖核酸为基因组的病毒的研究——Ⅰ.家蚕细胞质多角体病毒的简易纯化及其性质

以双链核糖核酸为基因组的病毒寄主范围很广,如哺乳动物的呼肠病毒,昆虫的细胞质多角体病毒,植物的水稻矮缩病毒,以及某些微生物的病毒,已经发现有十余种之多。研究这类病毒的感染及复制特性在理论上和实际上都具有重要的意义。本文对家蚕细胞质多角体病毒的纯化,提供了一个简易的方法——分子筛凝胶柱层析,其特点是简便,适于大量制备。纯化病毒制剂经紫外光吸收测定、凝胶电泳及电镜观察都表明是均一的。生物感染活力LD_(50)为1.11×10~(-10)克/头。     

茶刺蛾颗粒体病毒的分离与鉴定

茶刺蛾[Darna trima(more)]＊属鳞翅目刺蛾科,危害多种果树林木。1985年我们从四川珙县某茶园内自然罹病死亡的茶刺蛾幼虫中,分离到一种茶刺蛾病原物。通过纯化后,经感染试验、电镜形态观察、超微结构研究等,结果确定该病原物为一种颗粒体病毒。     

引致河蟹颤抖病的病毒的核酸定性

对河蟹(中华绒螯蟹)“颤抖病”病毒及其核酸进行了电镜观察。纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm。纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜的铜网取样,再经染色和真空镀膜,于电镜下观察。病毒核酸呈单股线状,底片经光学精确放大后,测定了核酸分子的长度,根据经验公式计算出病毒核酸分子量为5.05×106。抽提的病毒核酸在0.8%琼脂糖凝胶电泳中呈单一条带,大小为15~16kb,经核酸酶酶切显示,核酸对DNaseI不敏感,对RNase、MungBeanNuclease敏感,根据以上特性判断,该核酸为ssRNA。     

NCS对离体萝卜子叶微体中酶活性及细胞超微结构的影响

研究了天然生物活性物质narciclasine(NCS)对离体萝卜子叶光下生长发育期间叶绿素含量变化、异柠檬酸裂解酶及羟基丙酮酸还原酶活性的影响;并对萝卜子叶细胞的超微结构变化进行了观察。结果表明,NCS明显抑制光下培养的离体萝卜子叶叶绿素含量及鲜重增加,对异柠檬酸裂解酶及羟基丙酮酸还原酶活性也显示出明显的抑制作用。电镜观察显示,NCS对蛋白体及脂质体的降解、叶绿体的发育也表现出强烈的抑制效应。NCS的各种抑制作用均随其浓度的增加而增加,而且高浓度的NCS(10^-5mol／L)基本上完全阻止了离体萝卜子叶的光下生长及其转绿。     

感染大麦黄花叶病毒(BaYMV)的大麦细胞质内含体及细胞器病变的研究

超薄切片电镜观察表明,在感染大麦黄花叶病毒(BaYMV)的大麦(品种“早熟3号”)叶肉细胞中,液泡周围偶而可看到病毒颗粒束,在发病后期黄化或坏死的叶肉细胞中,可见到散布的病毒颗粒。在所有表现症状的病叶叶肉细胞,表皮细胞和木质部薄壁细胞中均可观察到风轮体、束状体、板状集结体以及膜状体等细胞质内含体,未见 卷简体和细胞核内含体。感病初期细胞中,细胞质丰富,核糖体数量增加,内质网肥大,随着病毒症状发喂,叶绿体、线粒体等细胞器逐渐肿大,外膜破裂直至解体。     

酶联免疫吸附法（ELISA）检测四川“榨菜”病毒种类

1990至1991年在“榨菜”病毒病发生的始期和盛期,从四川九个县(市)近郊、远郊采集样品492份,用TuMV、CMV、TMV、PVX、PVY和CaMV六种抗血清,经酶联免疫吸附间接法进行检测,属于TuMV和TuMV与其它五种病毒之一或之二复合感染的有422份,占总样品数的85.77％,其中由TuMV单一感染的305份,占61.99％。此外,还有PVX、PVY、CaMV单一感染病样27份,占5.49％,而情况不明的43份,占8.74％,总检出率91.26％。检测结果表明,发病始期或盛期,近郊或远郊均以TuMV和TuMV与CMV复合感染的病毒为主,是四川“榨菜”生产上主要的病毒种类。     

一种简单有效的基于阳离子交换层析的重组腺相关病毒纯化方法

本研究旨在探索出一套简单有效的重组腺相关病毒(rAAV)纯化方法,为基因治疗提供有力载体,推进rAAV的基因治疗走进临床.我们选用国际通用的无辅助病毒包装体系,将pAAV-cTnT-eGFP,pAAV-R2C9和pHelper三种质粒共转染HEK293T细胞系进行病毒包装,并通过荧光显微镜观察包装效率;应用阳离子交换层析法对收获处理后的病毒液进行纯化,包括第Ⅰ轮高pH下的除杂纯化和第Ⅱ轮以严格密集梯度洗脱为特点的进一步纯化.通过SDS-PAGE和Western Blot(WB)对纯化产物进行检测,使用Q-PCR法测定病毒滴度,最后再通过透射电镜对病毒颗粒进一步验证和分析.荧光显微镜结果显示,病毒包装效率较高,可达70％～80％;SDS-PAGE结果表明病毒纯化效果显著,第Ⅰ轮纯化除去了大量的蛋白杂质,第Ⅱ轮纯化也明显除去部分杂质;WB和电镜结果证明,纯化产物实为rAAV病毒,经Q-PCR测得病毒的滴度可达2.15X1012GC/mL,而且电镜进一步观察到我们纯化的终成品病毒中空颗粒含量极少,包含基因的实心颗粒占比可达99％.本研究成功开发出了一套的简单方便、切实有效的rAAV纯化方法,并且该方法能有效去除空壳病毒,提高包含基因的实心病毒占比.     

栗黄枯叶蛾核型多角体病毒的分离与鉴定

栗黄枯叶蛾（Trabala vishnou Lefebure)属卷叶蛾属,危害10多种果树和林木花卉。1989年我们从四川大学校园内自然罹病死亡的大量栗黄枯叶蛾幼虫中,分离到一种栗黄枯叶蛾病原物。经纯化后,通过感染试验,涂片染色,电镜形态观察,超微结构研究,组织病理研究等,确认 该病原物为一种核型多角体病毒。     

引致河蟹颤抖病的病毒的核酸定性

对河蟹(中华绒螯蟹)"颤抖病"病毒及其核酸进行了电镜观察.纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm.纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜的铜网取样,再经染色和真空镀膜,于电镜下观察.病毒核酸呈单股线状,底片经光学精确放大后,测定了核酸分子的长度,根据经验公式计算出病毒核酸分子量为5.05×106.抽提的病毒核酸在0.8%琼脂糖凝胶电泳中呈单一条带,大小为15～16kb,经核酸酶酶切显示,核酸对DNase I不敏感,对RNase、Mung Bean Nuclease敏感,根据以上特性判断,该核酸为ssRNA.     

云南盐矿中病毒样颗粒的多样性

摘要:【目的】了解云南盐矿中病毒样颗粒的多样性及特征,为丰富嗜盐菌病毒资源及其生态功能研究奠定基础。【方法】采用电子显微镜直接观察、双层平板分离纯化对云南5 个盐矿样品病毒的分布和形态特征进行比较研究。【结果】电镜观察病毒富集液表明,其中含有3种不同形态的病毒样颗粒(头尾形、丝状、球状)。同时,分离获得3株嗜盐细菌病毒,其中2株感染盐单胞菌(Halomonas sp.),1株感染色盐杆菌(Chromoha lobacter sp.),分别命名为QHHSV-1、YPHSV-1 及YPCPV-1。QHHSV-1形成边缘清晰、透明的噬菌斑,出斑时间约为8 h,培养24 h,其噬菌斑直径可达3 mm,电镜观察显示,QHHSV-1呈头尾形,头部直径约为47 nm,其尾部极易断裂,长约75 nm;YPHSV-1形成边缘清晰、透明的噬菌斑,出斑时间约为12 h,培养24 h,其噬菌斑直径可达1 mm,电镜观察显示,YPHSV-1呈头尾形,头部直径约为50 nm,尾长约为140 nm;YPCPV-1形成边缘模糊、透光亦不易见的噬菌斑,出斑时间约为72 h,培养96 h,其噬菌斑直径可达2－4 mm,电镜观察显示,YPCPV-1呈球形,是表面有突起的多态形病毒,大小为20－50 nm。     

萝卜优异种质对芜菁花叶病毒抗性的遗传分析

为了深入认识萝卜优异种质对芜菁花叶病毒(TuMV)的抗性遗传机制,本研究以高抗TuMV的自交系Q07-12(P_1)和高感自交系KB07-10(P_2)为亲本,构建了包括P_1、P_2、F_1、B_1、B_2及F_2的6个群体,采用数量性状主基因+多基因混合遗传的六世代联合分析法,对其抗性遗传规律进行了研究。结果表明,萝卜对TuMV的抗性受两对主基因控制,并符合"加性-显性-上位性主基因+加性-显性-上位性多基因"模型,其中主基因遗传率在B_1、B_2及F_2群体中分别为89%、55%和95%,多基因的遗传率分别为0、40.9%和0,环境因素对抗性强弱的影响较小。此结果表明了该优异种质在萝卜抗病毒遗传改良中的利用价值,为萝卜抗病育种和抗病基因的挖掘提供了理论依据。     

芜菁花叶病毒外壳蛋白在寄主植物叶绿体中的积累及其对光系统ll活性的影响

分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康对照的青菜苏州青品种(Brassica chinens L．cv．Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B,jucea L．cv．Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS—PAGE电泳和Western blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中。免疫金标记电镜实验显示TuMV—CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中。对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv／Fo、Fv／Fm、φpsⅡ、qp值都有不同程度的降低,qn值增大。实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统Ⅱ(PS Ⅱ)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因。     

新疆花椰菜花叶病毒(63-3毒株)的初步研究

1963年在新疆石河子的甘兰留种植株分离到的病毒(63—3),鉴定为花椰菜花叶病毒的一个毒株：致死温度75—80℃,体外存活期7一14_天,稀释限点1：3000一5000,寄主范围限于十字花科植物。甘兰上初呈明脉,后期病状隐蔽;花椰菜上是明脉;大白菜和萝卜上是明脉和枯纹。病毒是球状,直径50毫微米。挑蚜和甘蓝蚜可传病。 63—3(花椰菜花叶病毒),和新疆的孤丁一号(芜菁花叶病毒),新疆的萝卜环斑病毒(萝卜花叶病毒)的抗血清之间无反应,三者之间也没有相互保护作用。