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将KGM和Sepharose 4B凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Cibacron Blue F3GA制成了KGM和Sepharose 4B染料亲和吸附剂,并用来与牛血清白蛋白(BSA)作用,每毫升KGM亲和吸附剂可吸附BSA 28 mg,用NaSCN洗脱时回收为84.5%,而Sepharose 4B梁料亲和吸附剂每毫升可吸附BSA 15.3 mg,用NaSCN洗脱时回收为81.7%,并对两种凝胶的染料亲和吸附性能进行了比较.用KGM染料亲和吸附剂分离的人血清白蛋白与人血清白蛋白标准品有同样的纯度,都达到了电泳纯. 相似文献
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特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELEX筛选 总被引:4,自引:1,他引:4
化学合成含有20 个核苷酸随机序列, 长度为73 个核苷酸的单链 D N A 随机库; P C R 扩增和双链化后, T7 R N A 聚合酶体外转录得到单链 R N A 随机库。以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质, 体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的 R N A 分子。经8 轮循环筛选, R N A 群体亲和染料的比例从小于0 .03 % 上升至22 .4 % 。克隆筛选出 R N A 序列后, 测定了30 个克隆的序列, 得到三类 R N A 分子。经二级结构分析和活性蓝染料特异亲和能力测试,发现 R N A 特异亲和活性蓝染料的主要结构因素是 R N A 形成的双链结构 相似文献
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亲和色谱利用亲和配体与目标组分间的特异性结合作用实现对目标组分的纯化,该分离方法分辨率高.在生物物质的分析和分离领域得到日益广泛的应用[1]。亲和色谱在分离过程每一步操作中,液相主体中的溶质分子必须经过一系列扩散过程才能进入到固定相颗粒孔内完成吸附或解吸等质量置换反应,被置换出的物质再由颗粒内扩散出固定相颗粒进入流动相。与质量置换反应过程相比,扩散过程由于速度较慢而常成为亲和色谱分离过程的速度控制步[2]。开发新型介质以强化扩散过程成为近年来色谱分离技术研究的热点,典型成果有灌注色谱介质(Perfllsion clnromatogr;tph>r)13,引。基于制备电泳技术方面的研究成果[5.6],我们提出将多通道流动电泳与亲和色谱相结合形成一种新型制备规模的生物分离技术即电泳亲和色谱技术,其基本思想是利用电场强化扩散过程以加速分离过程的进行。我们的前期工作已证明该方法的可行性[7]。本文以人血清清蛋白(Human seguigt albllmm.以下简称has)和Blue Sepharose 6 Fkt F10wⅢ介质(以下简称Blue介质)为例,通过实验系统地考察电流强度对电泳亲和吸附和电泳洗脱过程的影响,并用电泳亲和色谱的方法纯化has。 相似文献
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特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELIEX筛选 总被引:1,自引:1,他引:0
化学合成含有20个核苷酸随机序列,长度为73个核苷酸的单链DNA随机 ;PCR扩增和双链化后,T7 RNA聚合酶体外转录得到单链RNA随机库,以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质,体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的RNA分子。经8轮循环筛选,RNA群体亲和染料的比例从小于0.03%上升至22.4%。 相似文献
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电泳亲和色谱技术分离蛋白质 总被引:3,自引:0,他引:3
亲和色谱利用亲和配体与目标组分间的特异性结合作用实现对目标组分的纯化,该分离方法分辨率高,在生物物质的分析和分离领域得到日益广泛的应用[1]。亲和色谱在分离过程每一步操作中,液相主体中的溶质分子必须经过一系列扩散过程才能进入到固定相颗粒孔内完成吸附或... 相似文献
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探索了蓝色染料(Cibacron Blue F3G-A)亲和分离中华眼镜蛇心脏毒素的可能性。采用环氧基活化法制备蓝色染料亲和介质,中性条件下提取眼镜蛇粗毒中的心脏毒素。Tricine系统SDS-PAGE多肽电泳和Lowry法蛋白定量分析纯化效果,发现蓝色染料琼脂糖一步纯化中华眼镜蛇心脏毒素的纯度达到84%,结合量为6.9mg/ml介质。这是首次利用小分子亲和配基纯化心脏毒素。与生物大分子配基相比,活性染料分子具有价格便宜,易于合成,性质稳定,不易降解和适合大规模生产等优点。 相似文献
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熊克勇 《生物化学与生物物理进展》1992,19(1):21-26
通用性配体亲和层析采用稳定,价廉的简单配体与固相基质连接形成亲和吸附剂,这种吸附剂已广泛应用于蛋白和多肽等的分离纯化。本文介绍三种通用性配体亲和层析方法的基本原理和应用,包括金属整合物配体亲和层析、染料配体亲和层析和组氨酸配体亲和层析。 相似文献
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高效亲和膜色谱快速分析及小量制备蛋白质 总被引:3,自引:0,他引:3
以甲基丙烯酸缩水甘油酯纤维素复合膜为基质,分别以蛋白A(Protein A)、人免疫球蛋白G(HIgG)、三嗪染料(Cibacron blue F3GA)、亚胺二乙酸铜离子为配基,用不同方法制备了适合于分析及小量制备的高效亲和膜色谱介质,并对高效亲和柱的基本性能及其应用于各种相应蛋白的定量测定情况进行了考察。利用这种方法可以针对不同的目标蛋白及所存在的环境采用不同的配基,对各种蛋白的定量测定及小量制备可达到较为满意的结果。 相似文献
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高效亲和色谱 总被引:1,自引:0,他引:1
姚志建 《生物化学与生物物理进展》1985,12(4):60-62
1978年,Ohlson等首先提出了高效亲和色谱(High Performance Affinity Chromatogra-phy,简称HPAC或PHLAC)的概念。他们将6-氨基己基腺苷酸或抗人血清白蛋白的抗体做为亲和配体,连接到一种高效液相色谱填料——二醇基键合相硅胶上,分离乳酸脱氢酶与乙醇脱氢酶、牛血清白蛋白与人血清白蛋白,得到了较好的结果。例如可以在四分钟之内将结构很相似的人血清白蛋白与牛血清白蛋白完全分开。此后高效亲和色谱逐渐发展成一种为生物化学家密切注意的高效液相色谱方 相似文献
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将KGM和Sepharose 4B凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Cibacron Blue F3GA制成了KGM和Sepharose 4B染料亲和吸附剂,并用来与牛血甭白蛋白(BSA)作用,每毫升KGM亲和吸附剂可吸附BSA 28mg,用NaSCN洗脱时间为84.5%,而Sepharose 4B染料样和吸附剂每毫升可吸附BSA 15.3mg,用NaSCN洗脱时间收迷81.7%,并对两种凝胶的染 相似文献
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反义肽及其在生化分离中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
反义肽是由反义RNA编码和翻译的肽.它可与其正义肽分子发生专一性相互作用.近年反义肽的这种特异性结合实例研究,已为其在生化分离领域应用奠定了基础,尤其是在色谱亲和配基的选择方面,可以预见不久以反义肽为配基的亲和色谱将是生物工程产品分离的一种有效手段. 相似文献
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包涵体蛋白的分离和色谱法体外复性纯化研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
重组蛋白在大肠杆菌中表达多为无活性的包涵体形式,须经洗涤、溶解、复性后才能得到生物活性蛋白。综述了近年来包涵体蛋白分离纯化和复性技术研究进展,重点讨论了色谱法复性技术的应用,包括尺寸排阻色谱、亲和色谱、离子交换色谱、疏水相互作用色谱、固定化脂质体色谱、扩张床吸附色谱的进展情况。 相似文献
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万古霉素的磁性亲和吸附分离 总被引:6,自引:0,他引:6
磁性亲和分离技术是近年新兴的一个分离方法,它可直接从初始样品液体中(无论是浑浊或清亮液)分离目标产物,克服了传统色谱方法需要离心和过滤除杂质的步骤,分离过程所用仪器极其简单,大大降低了操作费用,且易于实现规模化;此外,同亲和色谱一样也具有高的特异性及应用范围广等优点.使其在蛋白质、细胞的分离方面表现出了巨大的应用前景[1-4].万古霉素是一个多肽类的抗菌素,临床上用于治疗耐甲氧苯青霉素葡萄糖球菌的感染.目前虽有多种纯化方法[5,],但大多工艺复杂,回收率较低,尤其是在纯化过程中,万古霉素极易降解,迫使人们寻求更好的纯化方法来解决这个问题. 相似文献
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本文介绍了保存胚胎材料中荧光染料的技术,给两栖类胚胎注射荧光染料后,应用所介绍的方法制备切片,既能保存荧光又能正确判断染料在各层细胞之间的传递情况。 相似文献