鱼类消化道具有吸收外源生长激素的能力

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）,研究了重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）经胃或肠灌注后,胡子鲶、大口鲶和银鲫血清ＧＨ水平的变化规律。胡子鲶、大口鲶直肠分别灌注ｒｃＧＨ（１μｇ／ｇ和５μｇ／ｇ）后,血清ＧＨ水平迅速升高,而在对照组胡子鲶和大口鲶血清中未检测到内源性的ＧＨ,预示处理组血清ＧＨ水平的迅速升高是由ｒｃＧＨ从小肠内转移进血液引起的。胡子鲶胃内灌注ｒｃＧＨ（２５μｇ／ｇ）后,在     

草鱼生长激素非竞争式酶联免疫吸附测定法的建立及鉴定

应用草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）单克隆抗体及多价兔抗血清建立了草鱼ＧＨ非竞争式酶’联免疫吸附测定ＥＬＩＳＡ系统。用正辛酸法对腹水单抗进行了分离纯化,获得了高纯度的单抗制备物。聚丙烯酸胺凝胶电泳表明纯化的单抗由分子量分别为５５ｋＤ和２５ｋＤ的两条蛋白带组成。用纯化单抗铺底,用兔抗血清作后续抗体建立了一种测定草鱼ＧＨ的非竞争式双抗夹心ＥＬＩＳＡ方法。交叉试验表明该测定系统只与草鱼ＧＨ和基因重组鲤生长激素（ｒｃＧＨ）具有剂量依存的结合反应,而与大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）、牛生长激素（ｂＧＨ）、大马哈鱼促性腺激素（ｓＧｔＨ）、及黑鲢促性腺激素（ｂｓｃＧｔＨ）等均无交叉反应。该 ＥＬＩＳＡ方法的灵敏度可达０．８ｎｇ／ｍｌ,组内变异系数为 ５．９ ％,组间变异系数为７．６％,回收率达９０％以上。初步应用表明,鲤和团头鲂垂体抽提液、草鱼血清、鲤血清及鲫血清在该测定系统中有剂量依存的反应曲线,而大口鲶、黄颡鱼、中华鲟及黄鳝鱼垂体抽提液及大口鲶、胡子鲶和罗非鱼血清在该测定系统中没有交叉反应。     

饥饿状态下转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素的表达研究

研究采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)技术,比较分析了转GH基因鲤鱼和对照鲤鱼在饥饿和饱食状态下血清生长激素水平的变化规律,并探讨其可能机制.实验结果表明,在投喂实验中,转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素水平均无明显变化,但转基因鲤鱼血清生长激素远高于对照鲤鱼,分别为(142.0±4.9)ng/mL和(1.6±0.2)ng/mL,转基因鲤鱼体重增长速率显著高于对照鱼.在饥饿实验中,转基因鲤鱼的血清生长激素迅速下降,从(142.0±4.9)ng/mL降至(46.0±3.2)ng/mL,而后稳定在这一较低水平;对照鲤鱼血清生长激素持续卜升,从(1.6±0.2)ng/mL升至(10.9±1.4)ng/mL,体重负增长速率没有显著差异.研究结果提示,转GH基因鲤鱼血清生长激素的调控机制与对照鲤鱼的不同,其表达水平不受脑垂体反馈抑制调控机制的影响,而与重组GH基因中β-actin基因启动子的调控模式相关.     

营养状况对幼年鲤鱼肝脏IGF-Ⅰ mRNA表达的影响

通过室外喂养观察3种营养状况对幼年鲤鱼生长、血清生长激素（GH）水平和组织胰岛素样生长因子－Ⅰ（IGF-Ⅰ）mRNA表达的影响。一组鱼喂含40％酪蛋白的饵料（H组）,一组鱼喂含20％酪蛋白的饵料（L组）,饵料的总能量相同;另一组鱼先饥饿32天再投喂含40％酪蛋白的饵料。禁食后饥饿组鲤鱼体重和体长的生长受阻,在第16天饥饿组鱼血清GH水平明显升高,到第32天达到H组的4倍;而肝组织IGF－Ⅰ mRNA水平在第16天无明显下降,但是到第32天已降到不到H组的一半。鲤鱼其它组织饥饿32天未发现IGF－Ⅰ mRNA表达有明显变化。饥饿32天后开始投喂含40％酪蛋白的饵料,鲤鱼生长、肝组织IGF－Ⅰ mRNA的表达水平逐渐恢复,再投喂16天皆与H组无明显差异。再投喂过程中,GH水平也逐渐下降,第16天恢复正常。实验结果提示鲤鱼营养对肝组织IGF－Ⅰ mRNA的表达有调节作用。营养缺乏将导致鲤鱼肝组织IGF－Ⅰ mRNA的表达水平也相应恢复正常,从而导致鲤鱼生长恢复。同时,实验结果也提示,鲤鱼肝以外的组织IGF－Ⅰ mRNA表达不受营养调节。L组鲤鱼在喂养过程中,体重和体长的增长比H组低,但即使喂养40天,两组鱼体重和体长并无显著差异。两组鱼血清生长激素水平和各组织IGF－Ⅰ mRNA的表达水平到实验第32天也未发现有明显差异。推测在鲤鱼含正常能量和20％酪蛋白的饵料已能维持正常IGF－Ⅰ mRNA的表达。L组和H组鱼肝IGF－Ⅰ mRNA在喂养1个月后仍无显著差异也可能与实验时间较短有关。     

草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

应用碱性抽提,亲和层析,凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明草鱼ＧＨ与大马哈鱼ＧＨ抗血清具有明显的免疫交叉反应,而与大马哈鱼催乳素（ＰＲＬ）抗血清没有交叉反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明草鱼ＧＨ为单一蛋白带,其分子量约为２２５００道尔顿,等电聚焦揭示出草鱼ＧＨ主要由等电点为４．７和５．０的两条蛋白带组成,用纯化的草     

杆状病毒重组蛋白金鱼生长激素Ⅰ的纯化

利用放射免疫分析(RIA)证实了含金鱼生长激素ⅠcDNA的重组病毒在感染细胞96h后所表达的生长激素达到最高水平,平均每105个细胞可分泌金鱼生长激素Ⅰ最高达288.07ng;平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅰ 925.3μg。从感染重组病毒的无血清细胞培养基中纯化生长激素Ⅰ,平均每毫升培养基可纯化具免疫活性纯度95%以上的金鱼生长激素Ⅰ达664.224ng。纯化后蛋白的N\|末端首20个氨基酸序列测定的结果表明其信号肽得到了准确的切割。从而保障了表达蛋白的生物活性。     

虹鳟生长激素cDNA在酵母中的表达

采用聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术对虹鳟生长激素ｃ Ｄ Ｎ Ａ 进行改造。将改造后的基因克隆到含酵母 Ｐ Ｇ Ｋ 启动子的大肠杆菌酵母穿梭质粒ｐ Ｍ Ａ９１ ,转化酿酒酵母 Ｙ３３ ,构建表达鱼生长激素的酵母工程菌 Ｙ３３（ｐ Ｍ Ａｒ Ｇ Ｈ１６） ,并在酵母中获得表达,表达量约占细胞可溶性蛋白总量的３ ％ 。表达产物作为饲料添加剂投喂罗非鱼,具有明显的促进生长作用     

大鳞大马哈鱼垂体生长激素的分离、纯化与鉴定

应用ConA-Sepharose 4B亲和层析、凝胶过滤及离子交换层析等技术从大鳞大马哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)垂体中分离纯化了具有生物活性的生长激素(sGH)。用放射受体测定法(RRA)检测sGH组分的生物活性,结果表明纯化的8GH制品具有与兔肝细胞GH受体结合的生物活性。用放射免疫测定法(RIA)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测了另两种垂体激素-催乳激素(PRL)和促性腺激素(GTH)在纯化的sGH制品中的残留量均在0.5％以下。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE评价sGH制品的电泳纯度并测定了其分子量为22000左右。等电聚焦电泳表明该种鱼GH由等电点分别为6.3和6.6的两种形式的分子组成。     

重组斜带石斑鱼生长激素及其抗血清在放射免疫测定中的应用

将斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)生长激素成熟多肽cDNA序列克隆到质粒pRSET,与6x组氨酸等原核编码序列融合获得重组质粒pRGH6,转入大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达,表达量占细菌总蛋白的43％。免疫印迹证明表达产物为含斜带石斑鱼生长激素的融合蛋白,Ni^2 亲合层析柱纯化融合蛋白,以此为抗原免疫家兔制备特异性的抗血清。以纯化的重组生长激素和特异性的抗血清建立斜带石斑鱼生长激素的放射免疫测定法,该方法的灵敏度、特异性和重复性均达到测定血液生长激素的水平。研究了多巴胺的受体激动剂阿扑吗啡对静态孵育斜带石斑鱼脑垂体碎片释放生长激素的影响,结果表明,阿扑吗啡能以剂量依存方式促进斜带石斑鱼垂体释放生长激素。     

鲤鱼（Cyprinus carpio）血清生长激素变化的酶联免疫吸附测定

本研究的目标是纯化鲤（Cyprinus carpio）生长激素,用于制备抗鲤鱼生长激素的单克隆抗体,建立鲤鱼生长激素的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）技术,并用所建立的技术检测不同环境下养殖的鲤鱼的血清生长激素水平的变化．利用柱纯化技术纯化酵母表达草（Ctenopharyngodon idella）生长激素,免疫新西兰白兔（Oryctolagus cuniculus）,获得抗草鱼生长激素多克隆抗体．摘取鲤鱼垂体,从中提取生长激素,经层析纯化后,以变性聚丙烯凝胶电泳判断其分子量和纯度,并利用抗草鱼生长激素多克隆抗体以Western blot验证．纯化并经鉴定的鲤鱼生长激素作为免疫原被用于B淋巴细胞杂交瘤技术．共建立14株能够稳定分泌抗鲤鱼生长激素单克隆抗体的杂交瘤细胞系（FMU-cGH1-FMU-cGH14）,其中8个克隆（FMU．cGH1～FMU-cGH6,FMU-cGH12和FMU-cGH13）成功用于Western blot分析,9个克隆（FMU-cGHl-FMU-cGH7,FMU-cGH9和FMU-cGH10）可用于荧光标记和免疫组织化学分析．利用竞争性ELISA进行表位分析,结果表明这些单克隆抗体能够识别5个不同的表位．利用其中的FMU-cGH12作为包被抗体,FMU-cGH6作酶标抗体,建立了能够检测鲤鱼生长激素含量的ELISA技术．这一检测系统被证明具有高度的稳定性和灵敏度,能够检测并定量低至70pg／mL的生长激素．利用这一检测技术,发现限制进食和网箱养殖的鲤鱼其生长激素含量都有明显提高,分别为对照的6．9和5．8倍,显示不同生长环境下鲤鱼生长激素水平具有不同的反应．     

生长激素分泌促进剂及构效关系研究进展

生长激素分泌促进剂是一类作用于垂体和下丘脑的具有专一性促生长激素释放作用的寡肽及其类似物.由于其分子质量小、活性高、可口服、作用专一而有可能成为新的生长激素治疗药物.目前已经发展了很多具有此类活性的多种结构的化合物,如肽、环肽、肽醇及非肽类似物等.尽管这类化合物的作用机制尚未完全明确,但已有证据表明存在新的调节生长激素分泌的途径和新的调节因子.     

Growth hormone and ghrelin secretion in severely obese women before and after bariatric surgery

Objective: The objective was to evaluate ghrelin and growth hormone (GH) interactions and responses to a growth hormone‐releasing hormone (GHRH)/arginine test in severe obesity before and after surgically‐induced weight loss. Research Methods and Procedures: Our study population included 11 severely obese women 39 ± 12 years of age, with a mean BMI of 48.6 ± 2.4 kg/m², re‐studied in a phase of stabilized body weight, with a BMI of 33.4 ± 1.2 kg/m², 18 months after having successfully undergone biliopancreatic diversion (BPD). A GHRH/arginine test was performed before and 18 months after BPD to evaluate ghrelin and GH interactions. Active ghrelin, measured by radioimmunoassay (RIA), and GH, measured by chemiluminescence assay, were assayed before and after the GHRH/arginine test. Results: Fasting serum GH levels and GH area under the curve (AUC) significantly increased from 0.2 ± 0.05 ng/mL to 1 ± 0.3 ng/mL (p < 0.05) and from 514.76 ± 98.7 ng/mL for 120 minutes to 1957.3 ± 665.1 ng/mL for 120 minutes after bariatric surgery (p < 0.05), respectively. Although no significant change in fasting ghrelin levels was observed (573 ± 77.9 before BPD vs. 574.1 ± 32.7 after BPD), ghrelin AUC significantly increased from ?3253.9 ± 2180.9 pg/mL for 120 minutes to 1142.3 ± 916.4 pg/mL for 120 minutes after BPD (p < 0.05). Fasting serum insulin‐like growth factor (IGF)‐1 concentration did not change significantly (133.6 ± 9.9 ng/mL before vs. 153.3 ± 25.2 ng/mL after BPD). Discussion: Our study demonstrates that the mechanisms involved in ghrelin and GH secretion after the secretagogue stimulus (GHRH/arginine) are consistent with patterns observed in other populations.     

牛生长激素结构不均一性的研究

本文报导用常规方法分离纯化的牛生长激素,在还原性SDS-11％聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈分子量很接近的两条主带(22KD,21.5KD)。用单克隆抗体和多克隆抗体亲和层析技术分析了不同分子量形式的牛生长激素的转化,结果表明:牛生长激素可能在pH5.5条件下转化为21.5KD分子,在pH8.3条件下则转化18KD分子。这几种形式的牛生长激素均保留与抗体的结合力,但亲和力不尽相同,如在亲和层析的洗脱性质上存在差异。已检验分离并部分纯化了18KD分子以备作进一步的研究。     

微球包裹pcDNA3-GRF（1-32）在小鼠肌肉组织的表达及对生长的影响

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体,采用复乳液中蒸发法制备载生长激素释放因子（Growth hormone releasing factor,GRF）真核表达质粒pcDNA3-GRF（1-32）微球,其中包封率达69%,平均粒径为2.20μm,载药量80μg/mg,收率70%;体内转染小鼠肌肉组织, 提取注射部位肌肉组织DNA 和总RNA,经PCR和RT-PCR,发现注射pcDNA3-GRF（1-32）微球组的GRF表达水平最高（UVIBAND Version 99分析）,释放的GRF表达质粒在小鼠肌肉内存在并表达的时间至少30d。体重统计结果表明,30d后微球包裹质粒组累积增重与其它组相比差异极显著（P<0.01）,比裸质粒组、质粒和空白微球混合物组、生理盐水组分别高12.87%,19.72%,58.58%;结论认为,载pcDNA3-GRF（1-32）微球具有缓释作用,并可实现GRF基因体内局部基因转染、表达,发挥其相应的生物学效应,有希望成为提高质粒在动物肌肉组织表达效率的新方法。     

生长激素/胰岛素样生长因子1与阿尔茨海默病

生长激素／胰岛素样生长因子-1（GH／IGF-1）轴的合成、分泌、调节及生物学活性与阿尔茨海默病（AD）有密切关系。生长激素（GH）的合成和分泌受生长激素释放激素（GHRH）正向调节。GH／IGF-1轴活性下降导致一系列生理功能变化。GH／IGF-1缺乏可引起衰老及神经退行性变（AD）而导致认知功能的下降,相应激素的补给可以抑制或逆转这种认知障碍。越来越多的证据表明：GH／IGF-1参与AD型痴呆病理过程,对AD有很好的治疗应用前景。本文就生长激素／胰岛素样生长因子1在AD发病中的机理和药理学研究做一综述。     

Expression of a Novel Piscine Growth Hormone Gene Results in Growth Enhancement in Transgenic Tilapia (Oreochromis Niloticus)

Several lines of transgenic G1 and G2 tilapia fish (Oreochromis niloticus) have been produced following egg injection with gene constructs carrying growth hormone coding sequences of fish origin. Using a construct in which an ocean pout antifreeze promoter drives a chinook salmon growth hormone gene, dramatic growth enhancement has been demonstrated, in which the mean weight of the 7 month old G2 transgenic fish is more than three fold that of their non transgenic siblings. Somewhat surprisingly G1 fish transgenic for a construct consisting of a sockeye salmon metallothionein promoter spliced to a sockeye salmon growth hormone gene exhibited no growth enhancement, although salmon transgenic for this construct do show greatly enhanced growth. The growth enhanced transgenic lines were also strongly positive in a radio-immuno assay for the specific hormone in their serum, whereas the non growth enhanced lines were negative. Attempts to induce expression from the metallo thionein promoter by exposing fish to increased levels of zinc were also unsuccessful.Homozygous transgenic fish have been produced from the ocean pout antifreeze/chinook salmon GH construct and preliminary trials suggest that their growth performance is similar to that of the hemizygous transgenics. No abnormalities were apparent in the growth enhanced fish, although minor changes to skull shape and reduced fertility were noted in some fish. There is also preliminary evidence for improved food conversion ratios when growth enhanced transgenic tilapia are compared to their non-transgenic siblings.The long term objective of this study is to produce lines of tilapia which are both growth enhanced and sterile, so offering improved strains of this important food fish for aquaculture.     

新的生长激素异形体基因的发现及全长cDNA的克隆

在通过大规模 ESTS技术对垂体基因表达谱的研究中 ,从垂体组织产生了 72 2 2个 ESTS,有385个 ESTs是代表生长激素 (GH)基因的 ,其中 1个为中间缺失 1 38bp的 GH异形体基因 ,并经巢式 RT- PCR及测序证实 ;该基因编码 1 71个氨基酸的前肽 ,去除信号肽后 ,其成熟肽由 1 45个氨基酸组成 ;经生物信息学处理 ,其分子量大小约 1 7k D;与正常生长激素分子内有 2个 GH受体结合位点不同 ,该新的 GH异形体分子内仅有一个生长激素受体的结合位点 .研究结果揭示 :正常垂体内存在着新的 GH异形体基因 ,该基因可能编码外周血中 1 6k D的生长激素 ;其功能可能为 2 2k D GH的生理拮挤剂 .     

人生长素基因的合成及克隆

根据人生长素基因的氨基酸序列,选择大肠杆菌所偏好的密码子,人工设计并合成了20个寡核苷酸片断。通过重叠区扩增法,利用PCR成功地合成了人生长激素基因的全序列。经克隆测序,证明已成功地实现了人生长素基因的合成及克隆。     

两栖和爬行类生长及生长激素分泌活动的调节

根据生长内分泌学,综述了近年来两栖和爬行类生长激素（ＧＨ）分泌活动的调节及生长激素在两栖爬行类生长中作用这一研究领域所取得的主要成就和研究进展,研究结果表明：在脊椎动物的进化过程中,ＧＨ的化学结构和功能是相当保守的;ＧＨ对两栖爬行类的生长起促进作用;类胰岛素生长因子（ＩＧＦｓ）也能冰分传递ＧＨ促进两栖类的生长;在两栖爬行类,下丘脑对ＧＨ分泌的调控较哺乳类缺乏特异性,利用外源ＧＨ促进两栖爬行类的生长