应用免疫荧光技术检测肺微小根毛霉的感染

近几年因源性导致患者机体免疫功能低下或受损有所增加,从而使深部丝状真菌感染有逐年上升的趋势,由于检测上的种种原因,大部份是尸检后发现,难以鉴定对属种,对临床治疗带来直接影响,为进一步探讨丝状真菌的快速诊断。我们从肺活组织中分离出的微小根毛霉,注射接种到不同剂量的＾６０Ｃｏ－ｒ辐照鼠体内后,间隔一定时间,用间接免疫荧光法检测,发现３ＧＹ辐照后１４－２８日检出率是４１．８７％（皮下注射）,６６．６６％     

微小根毛霉感染机理研究

本文在首次报告二例肺结核、糖尿病患者合并肺微小根毛霉的基础上,进一步探讨免疫功能受损与微小根毛霉关系。本文采用不同剂量＾６０Ｃｏ－γ全身辐照小鼠,然后以不同途径注射同剂量的微小根毛霉的孢囊孢子,观察动物的感染情况和感染后的真菌检出率,结果发现各种辐射剂量均在辐射后７－１４日感染菌的检出率最高;各种脏器感染菌的检出率以脾脏最高;淋巴结最低;其他脏器的感染菌检出率也有不同程度的差异。     

微小根毛霉的感染治疗研究

微小毛霉感染途径,感染部位,感染机理研究的基础,进一步探讨机体受损不同程度,微小根毛霉感染不同药物治疗效果,本实验选用５ＧＹ,７ＧＹ等不同剂量的＾６０Ｃｏ照射１８～２０ｇ♀ＬＡＣＡ小鼠,每只鼠接种六千万个微小根毛霉的孢囊孢子,设对照组,通过氟康唑,野山花治疗,观察其治疗效果和小鼠活存情况及感染部位等,结果证明：５ＧＹ,７ＧＹ两种不同剂量＾６０Ｃｏ照射感染后,从活存时间,体重,治疗后的感染只数,感染     

微小根毛霉感染机理研究

本文在首次报告二例肺结核、糖尿病患者合并感染肺微小根毛霉的基础上,进一步探讨免疫功能受损与微小根毛霉感染关系。本文采用不同剂量~(60)Co-γ全身辐照小鼠,然后以不同途径注射同剂量的微小根毛霉的孢囊孢子,观察动物的感染情况和感染后的真菌检出率,结果发现各种辐射剂量均在辐射后7-14日感染菌的检出率最高;各种脏器感染菌的检出率以脾脏最高(66.7—81.8％);淋巴结最低(0.0—25.0％);其他脏器的感染菌检出率也有不同程度的差异。     

微小根毛霉致病株的原生质体形成条件

建立了重要医学真菌──肺微小根毛霉的原生质体生成系统。采用溶细胞酶以及蜗牛酶与纤维素酶联合作用的方式获得了大量原生质体,处于指数生长期、生长旺盛的幼龄菌丝对破壁酶比生长缓慢或老龄菌丝更敏感;作为渗透压稳定剂,无机盐类要好于有机物;原生质体的较适生成温度为31℃。     

微小根毛霉致病株的原生体形成条件

建立了重要医学真菌－－－肺微小根毛霉的原生质本生成系统。采用溶细胞以及蜗牛酶与纤维素酶联合作用了方式获得了大量原生质体,处于指数生长期、生长旺盛的幼龄菌丝对破壁酶比生长缓慢或老龄菌丝更敏感;作为涌透压稳定剂,无机盐类要好于有机物;原生质体的较适生成温度为３１℃     

我国首例肺微小根毛霉病及其致病菌的分离和培养

本文报告1例肺结核和糖尿病并发由微小根毛霉(Rhizomuror pusillus)所致的肺微小根毛霉病。首次在我国从病人的肺组织活检标本分离出该种真菌。此菌可在几种琼脂培养基20°—45℃条件下生长,最适温度为37℃。菌落在初期白色,然后变成褐色厚毡状。在光学显微镜下可看到孢囊梗假轴状分枝,初期无色,然后变为褐色。孢子囊直径50—90μm,呈灰色,后变为褐色。孢子囊成熟后囊壁消解。囊轴卵形或梨形,直径45—48μm。在有性期,接合孢子球形,直径43—63μm,初呈褐色,后变为黑色,表面粗糙或凹凸不平。在透射电子显微镜下,孢囊孢子呈不规则卵形,直径2—5μm;在扫描电子显微镜下,孢囊孢子形态与上述相同。本菌实验感染家兔、豚鼠和小白鼠显示毒力很强,动物于接种后3—10天内全部死亡。从感染动物的脏器分离出本菌。采用中、西医结合治疗,病人痊愈。     

多变根毛霉致面部皮肤根毛霉病1例

1 临床资料 患者女,40岁,山东泰安农民。因右面部红斑块伴溃疡逐渐扩大9年,于2005年10月13日就诊。皮损初发于1996年3月,因被蠓虫叮咬,局部出现一个红丘疹,痒,搔抓挤压后,皮损形成斑块并逐渐向外蔓延,累及右面大部、下颌及耳垂。曾在当地医院诊为“体癣”,外涂药物（药名不详）效果不佳,斑块逐渐向外扩展,表面出现溃疡。自觉轻度瘙痒,无疼痛。既往身体健康,无慢性传染病史,家族中亦无慢性病史。     

多变根毛霉致面部皮肤毛霉病1例

报道1例由多变根毛霉引起的面部皮肤毛霉病.患者男,65岁,面部结节斑块伴痒半年余.皮损组织病理检查示真皮中下层有炎细胞及多核巨细胞浸润,并见粗大较短的无隔菌丝.经真菌培养和分子生物学鉴定,菌种鉴定为多变根毛霉.皮损经短时两性霉素B治疗后好转.     

微小根毛霉的感染治疗研究

微小毛霉感染途径、感染部位、感染机理研究的基础上,进一步探讨机体受损不同程度,微小根毛霉感染不同药物治疗效果。本实验选用5GY、7GY等不同剂量的60Co照射18～20g♀LACA小鼠,每只鼠接种六千万个微小根毛霉的孢囊孢子,设对照组。通过氟康唑,野山花治疗,观察其治疗效果和小鼠活存情况及感染部位等。结果证明：5GY、7GY两种不同剂量60Co照射感染后,从活存时间、体重、治疗后的感染只数,感染部位等均有差异。7GY60Co照射后,腹腔注射六千万个微小根毛霉的孢囊孢子,感染后分别以氟康唑、中草药野山花进行治疗,野山花治疗组小鼠体重平均高于氟康唑的治疗组。活存35日后处死,平均每只鼠体重由原来的19.3g增加到24.2g。氟康唑治疗组10目前全部死亡,每只鼠平均体重由原来的19．2g减少到1487g。5GY照射后接种六千万个微小根毛霉孢囊孢子采用野山花、氟康唑进行的治疗效果,可看出两组治疗鼠体重与对照组无明显差异。但是从治疗效果看出,5GY照射感染治疗后,野山花治疗效果优于氟康唑治疗组,治疗后野山花组感染2只,氟康唑组感染5只。野山花治疗组感染了脾、肺、淋巴结等三个组织,氟康唑治疗组感染了肝、脾、肾、淋巴结等五个组织,而检出比例比野山花治疗组高。结果证明微小根毛霉均对脾、肾侵害严重。     

应用斑点免疫结合法检测植物病毒

用改进的斑点免疫结合法,检测了烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、豇豆花叶病毒、芋花叶病毒、柑桔速衰病毒和柑桔顽固病螺原体。无论用单克隆抗体还是多克隆抗体,全血清还是提纯的IgG,均获得满意的结果。直接法与间接法结果相同。在测定豇豆花叶病毒和芋花叶病毒时,与酶联免疫吸附试验和免疫电镜进行比较。表明无论是对纯化病毒还是感病植物汁液,其测定的敏感性均优于后二法,豇豆花叶病毒的可测感度是0.35ng,芋花叶病毒为0.83ng。以含0.5％吐温20的Tris缓冲液封闭硝基纤维素薄膜固相载体的未结合部位,其效果与牛血清白蛋白相同。应用碱性磷酸酶标记抗体以及羟基吲哚磷酸盐和氮蓝四唑为底物较合适,这种底物可在室温下长期保存,且反应产物为不褪色的紫色。易于观察和保存。     

免疫组化法检测美国青蛙组织中的蛙虹彩病毒

分不同时期,收集经人工感染了蛙病毒的样蛙,取其心、肺、肾、肠脾、肝六种组织,并通过免疫组化方法进行检测。结果分别在感染了病毒3d、9d、11d后的幼蛙这六种组织中,由表及里观察到了深色的阳性信号,从而测定了病毒在入侵组织中的存在部位,其中,肺和肠组织中阳性信号最强,呈灶性分布,其余四种组织中的阳性信号则呈散性分布。在未注射病毒的幼蛙阴性对照组六种组织设计中没有检测到阳性信号。     

用IgG指示试纸同时检测多种马铃薯病毒病

用硝基纤维素膜(NCM)为载体制备的抗体IgG指示试纸,可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的感染。以pH10.0的1％甘氨酸溶液为PVX、PVY和PVS的研磨缓冲液,比已报道的缓冲液效果好。在提取病毒抗原时加入4％纤维素酶,可提高病毒得率及所制备的抗血清灵敏度。     

应用酶联免疫吸附试验检测马铃薯卷叶病毒

以辣根过氧化物酶标记马铃薯卷叶病毒抗体,采用双抗体夹心ELISA方法鉴定了马铃薯和洋酸浆的茎、叶、根及马铃薯块茎中的马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virus,PLRV),结果表明,对提纯的PLRV可测出的最低浓度为25ng/ml,当包被抗体浓度为40μg/ml、酶标记抗体稀释度为1/120时,可测出马铃薯茎、叶和根汁液中的PLRV,感染PLRV的洋酸浆茎、叶和根汁液的消光值,均比无病对照者高二倍以上,虽然感染PLRV的马铃薯休眠块茎维管束组织汁液的消光值高于无病毒对照,且脐部维管束组织消光值高于顶端,但测定打破休眠的感病块茎顶端维管束组织的阳性结果更为可靠和明显。     

用改进的ELISA法检测腺病毒抗原

用改进的ELISA法检测94份咽拭子标本中的腺病毒抗原,标本先接种人肾细胞,使病毒有一定程度的增殖,同时与传统的病毒分离作对比,结果表明,腺病毒分离阳性的18例,ELISA法检测全部阳性,76例分离阴性(盲传3代)者ELISA法也全都阴性,两者完全相符,ELISA法检测增殖24、48、72小时的细胞培养物腺病毒抗原的阳性率分别为16.7％,72.2％和83.3％,本法特异、可靠、判断客观、可用来检测腺病毒抗原。     

彗星电泳法在植物原生质体凋亡检测中的应用

应用中性法彗星电泳检测烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）原生质体的凋亡。结果表明,彗星发生的百分率（彗星率）和发生核质固缩及“核着边”（凋亡形态学标志）的细胞的百分率之间存在明确的相关性。利用标准的细胞凋亡检测手段,包括ＤＮＡｌａｄｄｅｒｉｎｇ及核糖核酸末端转移酶介导的ｂｉｏｔｉｎｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）,都证明这种彗星电泳法可以用来比较精确地检测植物原生质体的凋亡。