魔芋葡苷聚糖（KGM）凝胶为亲和层析载体与Sepharose4B的比较 …

将ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３ＧＡ制成了ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料亲和吸附剂,并用来与牛血甭白蛋白（ＢＳＡ）作用,每毫升ＫＧＭ亲和吸附剂可吸附ＢＳＡ ２８ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间为８４．５％,而Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料样和吸附剂每毫升可吸附ＢＳＡ １５．３ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间收迷８１．７％,并对两种凝胶的染     

魔竽葡苷聚糖凝胶为亲和层析载体与Sepharose 4B的比较研究——Ⅰ.KGM金属螯和层析分离纯化猪血SOD

将KGM凝胶和Sepharose 4B在同样条件下活化偶联,制成Cu~(2 )金属螫合亲和胶,亲和纯化猪血SOD,并对这两种亲和胶的层析效果和性能进行了比较。KGM金属螫合胶对猪血SOD吸附量、纯化倍数、纯化SOD的比活力和回收率分别为53000U/ml胶、19倍、12000U/mg蛋白和94.6％,而Sepharose 4B亲和胶对SOD 的吸附量、纯化倍数、纯化SOD的比活力和回收率分别为79920U/ml胶、11倍、10125U/mg蛋白和95.4％。两种亲和胶所纯化的SOD经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、活性染色及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明其均为电泳纯。KGM金属螯合胶使用六次后,其对SOD吸附量、去Cu量及SOD的回收率均无明显影响。     

魔竽葡苷聚糖凝胶为亲和导析载体与Sepharose 4B的比较研究

将KGM凝胶和Sepharose 4B在同样条件下活化偶联,制成Cu2 金属螯合亲和胶,亲和纯化猪血SOD,并对这两种亲和胶的层析效果帮性能进行了比较,KGM金属螯合胶对猪血SOD吸附量,纯化倍数,纯化SOD的比活力和回收率分别为53000U／ml胶,19倍,12000U/mg蛋白和94．6％,而epharose 4B亲和胶对SOD的吸附量,纯化倍数,纯化SOD的比活力和回收率分别为7992U／ml胶,11倍,10125U/mg蛋白和95．4％,两种亲和胶所纯化的SOD经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）,活性染色及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）证明其均为电泳纯,KGM金属螯合胶使用六次后,其对SOD吸附量,去Cu量及SOD的回收率均无明显影响。     

应用转铁蛋白-Sepharose 4 B亲和层析分离浓集小鼠胎肝CFU-E

本文以人血清转铁蛋白与Sepharose 4B交联制成转铁蛋白-Sepharose 4 B亲和层析凝胶,应用转铁蛋白-Sepharose 4 B亲和柱层析分离浓集小鼠胎肝红系造血祖细胞CFU-E。绝大部分CFU-S和CFU-GM均被转铁蛋白-Seph-arose 4 B亲和柱层析洗脱,且转铁蛋白-Seph-arose 4 B柱层析对CFU-S、CFU-GM无明显浓集作用。大部分BFU-E和几乎所有CFU-E均被吸附在亲和层析柱上;经解离吸附洗脱后,BFU-E和CFU-E浓集倍数分别为6.3倍和9.2倍,由此证明了CFU-E细胞膜表面转铁蛋白受体的高度密集性,为今后以转铁蛋白为分子探针,识别和研究CFU-E提供了实验依据。     

单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的研究

本文报道了一种单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的方法．我们采用自己研制的α－干扰素单克隆抗体亲和层析柱进行了人白细胞干扰素较大规模纯化的研究,结果表明,其活性回收率平均达１０６．９％以上,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染法鉴定,白细胞干扰素的大多数活性成分均被吸附和回收,所得的干扰素蛋白成分主要位于分子量１５０００～２１０００Ｄ的干扰素活性区域,产品的纯度大大提高,比活可达８×１０６ＩＵ／ｍｇ;ＥＬＩＳＡ夹心法测定,每毫升洗脱样品中鼠源ＩｇＧ含量小于４ｎｇ,我们所建立起的亲和层析法操作简便,亲和吸附和洗脱条件温和,可适用于大规模的白细胞干扰素的纯化．     

以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

用活化的壳聚糖为载体,鸡卵粘蛋白(CHOM)为配基,制备了胰蛋白酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂亲和层析胰酶,所得产物经SDS-PAGE电泳检测,带中只有一条带颜色较深,且与标准胰蛋白酶带位置几乎相同。实验结果表明1 g壳聚糖可以固定60 mg鸡卵粘蛋白,制成的亲和吸附剂可吸附胰蛋白酶的最大量为118 U/g。以壳聚糖为载体的亲和吸附剂制备过程简单、安全。     

用高碘酸盐活化葡聚糖凝胶制备亲和吸附剂的研究

 <正> 用高碘酸盐活化的Sephadex与鸡卵类粘蛋白偶合制备分离纯化胰蛋白酶的亲和吸附剂。该方法比CNBr活化Sepharose 4B制备亲和吸附剂的方法具有操作安全,价格低廉等优点。活化载体在4℃保存较长时间不失去键合能力。该亲和吸附剂可制备得比活力为11228.8u/mgBAEE单位电泳单带纯胰蛋白酶,并能反复使用十余次,仍具有较强亲和吸附能力。酶     

用壳聚糖替代Sepharse 4B固定相关配体纯化酶的研究

采用壳聚糖固定酶作用的特定底物（菌体细胞）,并用戊二醛交联制备成酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂纯化溶葡球菌的研究表明,经一步纯化可提高纯度4倍,酶活性回收大于70％。SDS－PAGE的电泳结果显示,产品基本上达到了标准酶的纯度。同时表明该吸附剂没有非特异性吸附。由载体壳聚糖替代Sepharose 4B制备的吸附剂具有简单、快速、较高收得率和操作安全等优点,适用于特定酶或基因工程产品的分离纯化。     

丁氏双鳍电鳐电器官烟碱样胆碱能受体的分离提纯

本文用湖南眼镜蛇神经毒素为配基偶联的AH-Sepharose 4B毒素型亲和凝胶从国产丁氏双鳍电鳐电器官中提纯了烟碱样胆碱能受体(N-ChR)。提纯123倍,产率5.4%,比结合力5.411nmole毒素结合部位/mg受体蛋白,每毫升湿胶可制备受体蛋白0.037毫克。AH-Sepharose 4B的亲和分离效能与CN-Sepharose 4B无明显差别。用AH-Sepharose 4B毒素型亲和凝胶提纯的N-ChR经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白区带。SDS凝胶电泳主要显示四个亚基,分子量分别为4.1、4.7、5.6及6.7万道尔顿。丁氏双鳍电鳐电器官N-ChR与其他种属电鱼电器官N-ChR的亚基近似。     

表面改性的纳米Fe3O4颗粒用于抗血清快速分离纯化

采用硅烷化试剂Si(OC2H5)3C3H6NH2(APTES)对纳米Fe3O4颗粒表面进行氨基化改性后, 考察了不同浓度偶联剂戊二醛对于颗粒表面固定牛血清白蛋白(BSA)量的影响。此超顺磁性免疫铁颗粒(SPIO)加入兔抗BSA血清中特异性结合BSA抗体后, 用Gly-HCl缓冲液洗脱得到IgG。结果表明当戊二醛浓度大于10%时, 单位颗粒固定蛋白的量达到最大值约140 mg/mg, 10 min, 15 mg的SPIO即可将1 mL抗血清完全分离, 经过两次快速洗脱, 颗粒表面吸附的抗体即可得到纯化; 琼脂扩散实验表明分离后的抗体仍保持较高活性, SDS-PAGE电泳结果表明用此方法纯化后的兔抗BSA IgG纯度大于99%, 比传统的(NH4)2SO4法有了较大提高, 但纯化量并没有减少; SPIO在经过五次重复利用后仍能保持78%以上的分离效果。     

舟山眼镜蛇毒神经生长因子的亲和层析分离

用层析和制备SDS-PAGE法纯化舟山眼镜蛇(Najanajaatra Cantor)毒神经生长因子(NGF),免疫家兔获得抗血清。用辛酸-硫酸铵沉淀法初步纯化IgG,蛋白A-Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,并与CNBr活化的Sepharose4B偶联,采用亲和层析法对舟山眼镜蛇毒神经生长因子进行分离纯化。产物经过SDS-PAGE检测呈一条带,并显示了良好的生物学活性。纯化NGF最大比活性为5.0×104U/mg蛋白,亲和常数为4.35×108L/mol,亲和层析分离NGF得率比传统分离方法得率提高35.2%,该方法为NGF的大量提取提供了技术支持。     

单克隆抗体亲和层析纯化长叶车前花叶病毒

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)单克隆抗体1H2,经纯化后以溴化氰活化法偶联于Sepharose 4B上制成亲和层析柱。HRVsh感染的三生烟提取液,经一次聚乙二醇沉淀初步纯化,悬浮液上亲和层析柱,于磷酸缓冲液中吸附,蒸馏水洗脱。收集的病毒制剂接种心叶烟有感染性,电镜观察见典型的HRVsh粒子,紫外吸收光谱与常规方法提纯的病毒相似,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带。结果表明单克隆抗体亲和层忻得到高度纯化的HRVsh。最后讨论了单克隆抗体亲和层析方法的优点。     

用免疫亲和层析法纯化细菌铁蛋白

用细菌铁蛋白免疫家兔,制备抗铁蛋白血清,用进一步纯化的抗铁蛋白抗体作为配基与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,得到亲和免疫吸附剂。以此法纯化的铁蛋白为聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,相对复合抗体作双向免疫电泳显示单峰,并具有较高的免疫活性。     

金属螯合亲和层析纯化金属硫蛋白

将二价铜离子螯合在Chelating Sepharose Fast Flow凝胶上制成亲和层析柱,锌诱导兔肝和镉诱导小鼠肝经匀浆、乙醇处理后上柱,用pH4.0的醋酸盐缓冲液平衡,再用pH5.2不同浓度的醋酸盐缓冲液分别洗脱,可得两个金属硫蛋白(MT)洗脱峰,经确定先后为MT-2和MT-1.分离方法比传统的凝胶过滤-离子交换法简单、省时,适于实验室规模分离纯化.     

染料配基吸附层析纯化血清白蛋白

将染料分子偶联于交联琼脂糖凝胶上制成蓝色、红色和黄色等五种层析介质进行血清白蛋白分离的研究。比较了五种染料配基的吸附性能,考察了温度、pH值、蛋白质浓度和无机盐浓度对吸附血清白蛋白的影响。选择了合适的分离条件。从产妇分娩血中用染料配基吸附层析提取了人血清白蛋白(HAS)。一步分离达到电泳纯,回收率为95％,优于传统的盐析工艺。     

基于亲和层析方法研究栀子苷的药物靶标

目的:运用亲和层析方法初步探索栀子苷的特异结合蛋白。方法:采用环氧氯丙烷(Epichlorohydrin,ECH)作为活化试剂对琼脂糖凝胶进行环氧基修饰,通过偶联栀子苷与环氧活化的琼脂糖凝胶(epoxy activated Sepharose CL-6B,EAS6B),制备以栀子苷为配基的亲和介质,以高效液相色谱法验证其偶联。利用栀子苷-EAS6B亲和介质,从小鼠脑组织总蛋白中筛选特异结合蛋白。结果:优化偶联条件后,得到最佳的活化反应条件:15%ECH、0.8 mol/L Na OH于37℃反应3 h,环氧基密度达到122μmol/m L,琼脂糖凝胶亲和介质的偶联量为19.53%,偶联率为17.08μmol/m L。从小鼠脑组织总蛋白中筛选得到3个栀子苷特异结合蛋白的条带,经质谱鉴定,发现主要是由热休克蛋白、脑酸溶性蛋白和谷氨酰胺合成酶等组成。结论:确立了琼脂糖凝胶环氧活化的最佳条件,制备了栀子苷-EAS6B亲和介质并应用其筛选出栀子苷的结合蛋白。     

固相RNasin亲和层析RNase

大鼠肝RNasin与溴化氰活化的Sepharose 4B反应制备了固相大鼠肝RNasin。用固相大鼠肝RNasin亲和层析大鼠肝中性RNase,可以将其分为两部分。固相大鼠肝RNasin可以亲和层析牛胰RNase的结果说明,牛胰和大鼠肝RNase在二级和三级结构上都非常相似。这为大鼠肝RNase来源于胰脏的观点提供了一个新证据。固相RNasin可以亲和吸附大肠杆菌RNase说明原核细胞RNase与真核细胞RNase在分子起源方面有一定的亲缘关系。固相RNasin柱层析为纯化RNase提供了一个简便的新方法。     

利用蓖麻毒素（RCA I）亲和层析进一步分离纯化玉米精细胞

利用ＲＣＡ Ｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＭＢ大孔径凝胶对玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）离本活性精细胞进行亲和层析。结果表明,当精细胞数量小于ＲＣＡ Ｉ－凝胶的饱和吸附量时,７０％左右的精细胞被特异性地吸附;４２．１％被吸附的精细胞可由 性单糖一次性洗脱回收。而且镜检,活性检测及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析表明,所回收的精细胞仍具有一定的活性,尤其是具有较高的纯度。     

重组人骨形态发生蛋白-2抗体的制备及纯化

骨形态发生蛋白-2是骨科研究领域的重要生物蛋白。用重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP₂)与BSA连接成复合物作为免疫原,免疫家兔制备出多克隆抗血清。分别用免疫沉淀法和Sepharose4B-BSA反向免疫亲和吸附法去除抗血清中载体BSA抗体。用盐析法和蛋白层析法纯化出抗rhBMP₂抗体。研究发现,家兔产生高效价抗体的最佳时间为14-16周,从rhBMP₂抗体的特异性、相对纯度及回收率综合分析,免疫沉淀法去除BSA抗体优于反相亲和吸附法。     

G蛋白亲和色谱法纯化动物血清、抗体效果比较

比较 Hitrap G蛋白 Sepharose亲和色谱系统对不同动物血清或腹水的纯化效果 ,为抗体纯化提供依据。结果显示 ,G蛋白对不同动物血清 Ig G吸附能力不同 ,体现在单位体积抗体回收量明显不同 ,这一特点与 A蛋白亲和色谱系统相似。该方法简便快速 ,纯化抗体纯度高 ,免疫活性好 ,色谱柱可反复使用多次