一种含有单链RNA的香菇球状病毒

从生长不正常的香菇(Lentinus edodes(Berk.)Sing)菌株中分离到一种等轴对称含单链RNA的病毒颗粒。病毒颗粒在电镜下直径为33～34nm,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中病毒外壳蛋白分子量为22000道尔顿。病毒核酸径DNase1和SI酶解试验及热变性紫外吸收曲线试验证明为单链RNA,在1.5％的琼脂糖凝胶电泳中,病毒核酸呈现一条带,分子量为2.38×10~6道尔顿。     

我国菊花褪绿斑驳类病毒鉴定

从我国广州地区发现的带有褪绿斑驳症状的“广白”菊花病株中分离到一种小分子核酸,经鉴定其性质与国外报道的菊花褪绿斑驳类病毒(Chrysanthemum Cholrotic Mottle Viroid,ChCMV)的性质完全一致。病株用酚提取后的粗核酸和制备的纯核酸经正反双向或垂直双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明为具有单链环状的RNA分子,其分子量与菊花矮化类病毒(Chrysanthemum Stunt Viroid, CSV)的相似。根据病株症状、寄主范围以及分段自我杂交等试验分析,证明这种小分子核酸是类病毒——chcMV,而不是CSV。在检测过程中,我们改进了提取和鉴定类病毒的方法,并建立了可以区分不同种类病毒的分段自我杂交技术。     

BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质

 通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。     

小鼠肝脏免疫抑制蛋白质(LISP)的分离纯化和鉴定

用硫酸铵分段盐析及DEAE-Sephadex A-50、羟磷灰石和CM纤维素等多种柱层析方法,从正常小鼠肝浸液中分离纯化出一种免疫抑制蛋白质(LISP)。在体外用微量该蛋白质就能强烈抑制小鼠T、B淋巴细胞对促有丝分裂原和同种异型抗原的增生反应。纯化的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PACE)和等电聚焦(IEF)鉴定时均显示为一条区带,其等电点(pI)值在7.5—7.8范围。沉降系数利S_(20),w为5.39。Sephadex G-100凝胶层析测得LISP的分子量为78,000道尔顿。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)提示LISP是由二个相同的亚基组成,亚基分子量为38,500道尔顿。LISP是一种既非糖蛋白又非脂蛋白的碱性蛋白质,对它的氨基酸组成也作了分析。     

中蜂囊状幼虫病病毒核酸和多肽的研究

中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和琼脂糖凝胶电泳(AGE)分析,表明为单链RNA,易于降解;CSBV结构多肽经SDS-PAGE分析,有3个多肽,其分子量分别为27,000、29,000、39,000道尔顿。此病毒RNA和多肽与意蜂囊状幼虫病病毒(SBV)有差异。     

三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)凝集素的亲和层析纯化及其部分性质的研究

用Sephadex G-100或猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,均可从三齿草藤(Vicia Bungei Ohwi)的种子中分离纯化出三齿草藤凝集素。该凝集素经连续或不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳均显示出单一蛋白带;糖蛋白染色法证实为糖蛋白;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为24,600,凝集素浓度为1.95微克/毫升时就能凝集兔红细胞;但对人ABO型血细胞不发生凝集作用;其对兔红细胞的凝集作用可被D-Man、D-GlcNA和D-GIC所抑制;它也是一种促有丝分裂原。     

DNA银染的清除与重染

聚丙烯酰胺凝胶电泳因其操作简便 ,分辨率高 ,重复性好等优点在生物大分子的分离 ,提取和鉴定等方面得到广泛的应用 ,它已经成为开展分子生物学研究必不可少的技术方法 .显示聚丙烯酰胺凝胶电泳中核酸的方法主要有溴化乙锭 (ＥＢ)染色和硝酸银染色 .硝酸银染色因其灵敏度高 ,无致癌毒性 ,同时也消除了观测时紫外线对眼睛的伤害 ,因此而被更多的研究人员所采用 .　　许多因素可以影响染色显像的成败与优劣 ,如胶的厚度 ,试剂的浓度 ,冲洗次数和反应温度 ,特别是终止时间的掌握等 .染色背景过深和显像不理想是几乎所有研究人员都曾有过的经历 …     

直立平板式连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶具有化学稳定性,透明度高,聚合体孔径可控制等性质,以及不存在非特异吸附和电渗作用等,因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学、生物化学、临床化学等学科的分析或分离方法中愈来愈占有重要地位。自Ornstein及Davis首先介绍了聚丙烯酰胺电泳法以来,无论在理论的深度和应用的广度上都有较大的发展,国内外均有专著。本文仅讨论直立平板式连续浓度梯度电泳,它的主要优点是分辨率高,同时由于在同一块凝胶板上可进行几个样品的电泳更便于比较和辨认,并可为进行双相电泳、分子量测定或制备电泳提供基础。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量

Shapiro于1967年首次报告了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统,根据他对11种蛋白质电泳获得的结果,发现蛋白质(或亚基)分子量的对数与蛋白质分子的迁移率之间有直线关系。Weber等人的深入研究,肯定了Shapiro的发现,确立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的新方法。 Shapiro和Weber所应用的SDS-凝胶电泳缓冲系统为连续的磷酸盐系统,后来     

红螯光壳螯虾卵黄磷蛋白的分离纯化和鉴定

采用凝胶层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对红螯光壳螯虾(Cherax quadricarinatus)卵巢中的卵黄磷蛋白进行了分离、纯化和鉴定。结果显示该虾的卵黄磷蛋白是一个分子量为369ku的多聚体,由分子量为85．4、80．6、76．6、73．7ku的四个亚基组成。染色分析表明卵黄磷蛋白为糖-磷-类胡萝卜素结合的复合蛋白。氨基酸组成分析显示天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)为主要氨基酸。     

层析聚焦法分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶及其抗血清制备和鉴定

 应用层析聚焦和Oligo(dT)-纤维素亲和层析相结合的方法,从小牛胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)。纯化的TdT聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条区带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量为24,000及26,000d的两条区带。此纯化TdT径戊二醛交联法,自身交联后免疫家兔,得到兔抗小牛TdT的单价抗血清,并进行了免疫学鉴定。     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2mm)。在工作中,我     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2㎜)。在工作中,我     

三角酵母菌D-氨基酸氧化酶的纯化和一些基本性质的研究

1．比较了17株霉菌和36株酵母菌的D-氨基酸氧化酶活力,其中以三角酵母的酶活力最高,比较适宜作为研究D-氨基酸氧化酶的材料。 2．用硫酸铵、聚乙二醇(PEG 6000)分部沉淀,Sephadcx G-200、羟基磷灰石柱层析分离纯化了三角酵母D-氨基酸氧化酶,聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一组份。 以聚丙烯酰胺凝股梯度浓度电泳测得D-氢基酸氧化酶的分子量为170,000,sDs凝胶电泳测得其亚基分子量为42,000,表明三角酵母D-氨基酸氧化酶由四个相同亚基组或。 3．三角酵母D-氨基酸氧化酶在以D-丙氨酸为底物时,最适pH为8．3,米氏常数(Km)为3．3mM。三角酵母D-氨基酸氧化酶具有较宽的底物专一性,多种D或DL型氨基酸都可以做它的底物。     

木霉纤维素酶的诱导形成及其调节——Ⅵ.拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii Rafai)N_2-78被槐糖诱导形成的纤维素酶组分的分离、纯化及性质

拟康氏木霉洗涤菌丝体被槐糖诱导形成的纤维素酶,经DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤和聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法,初步分离得到C_1酶、C_x酶和β-葡萄糖苷酶三个组分,其分子量经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,分别为67,000、62,000和42,000。C_1酶用聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、免疫电泳和超离心鉴定,已证明是匀一的组分,为糖蛋白,富含甘氨酸、天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和谷氨酸。纤维素酶的三个组分对天然纤维素、微晶纤维素和或磷酸膨胀纤维素的作用存在协同效应。研究了纤维素酶组分的热稳定性及pH稳定性。     

微量DNA的聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳分析

聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳,是进行微量DNA分析的一种有效方法。它能快速鉴定DNA的迁移位置,并将分子量大小不同的DNA片段进行分离。通常DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳均采用2—3毫米厚的平板胶,由于板胶厚度大,因     

一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

番茄凝集素的分离纯化及某些性质的研究

番茄成熟果实经抽提上鸡卵类粘蛋白(OM)-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化制得番茄凝集素。制品在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条带,表观分子量为205,000。Sephadex G200凝胶过滤行为呈单一吸收峰,分子量为180,000。等电聚焦测得等电点为7.6和9.4。它能使人和多种动物红细胞,以及某些培养细胞凝集,但效价不同。N—乙酰葡萄糖胺寡聚糖是其专一性结合糖。     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面。它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果。下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施。 1、样品处理时,通常是用Tris-HCl pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

一种利用普通垂直电泳槽回收PAGE胶蛋白条带的简便方法

植物总蛋白样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离之后,直接用考马斯亮蓝染色、切胶回收目的条带,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳槽电洗脱纯化得到单一条带的目的蛋白.此法可得到有活性的黄瓜衰老叶片中被特异激活的DNA酶,对样品中含量少,特别是与其他分子量相近的蛋白质十分有效.