酵母菌的载体系统研究进展

由于酵母菌特别是酿酒酵母是单细胞生物,具生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等优点,被认为是表达外源蛋白的最适受体菌。随着重组DNA技术的发展,酿母菌的转化和载体系统的研究已取得很大的进展,已有许多细菌、真菌和高等动植物的基因在酿酒酵母中克隆和表达,已应用酵母工程菌来生产一些重要的外源蛋白,并显示出巨大的优越性。本文着重介绍酵母菌载体系统的研究进展。根据其在酵母菌遗传工程中的应用,可将酵母菌载体系统分为普通的克隆载体和特殊用途的载体两大类。回酵母菌的克隆载体依据…     

基因载体图谱的阅读

载体（vector）是基因工程运载基因的工具,也成为分子生物学研究的常用工具之一。随着基因工程技术的发展,载体的种类也越来越多。介绍了载体的分类、特点,载体的基本要素,并对常见的质粒载体、病毒载体图谱的识别等作了介绍。     

病毒--基因治疗中有效的载体系统

基因治疗面临的首要问题是如何选择适当的基因载体将具有治疗价值的基因导入靶细胞并使其有效表达,以达到治疗疾病的目的。目前基因治疗临床试验中采用的载体大多数为病毒载体。本文主要介绍基因治疗中常用的4种病毒载体的生物学特性,以及各个载体在基因治疗中的优缺点。     

一种新的逆转录病毒载体—HIV载体

一种新的逆转录病毒载体——ＨＩＶ载体赖冠华陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心,上海２０００２５）关键词逆转录病毒载体ＨＩＶ载体逆转录病毒载体具有能有效地将外源基因整合进靶细胞基因组、长期表达外源基因以及病毒包装过程简单的特点,因此成为基因治...     

杆状病毒载体及其在昆虫细胞中表达外源基因的研究进展

本文介绍了杆状病毒载体在昆虫细胞中表达外源基因的基本策略和发展趋势。杆状病毒载体系统近年来已被人们广泛用来表达人类、动物和植物等的一些重要蛋白质分子,在医学、农业等领域的基因工程研究中发挥了越来越大的作用。杆状病毒载体系统表达外源基因的效率高,表达产物的结构和活性与天然产物一致,为当今基因工程研究中最有发展前途的病毒载体表达系统。     

一种辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及其在小鼠体内 …

腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点,但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白,并诱导机体的细胞和体液免疫反应,影响了大体内的稳定表达。为了克服这一缺点,构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体ＨＡｄＩ－ｈＦＶＩＩＩ。该载体去除了病毒基因组的ｌ３、Ｌ１、Ｌ２、ＶＡＩＶＡＩＩ、ｐＴＰ等基因序列。在第一代重组病毒ＡｄＩ－ｈＦＶＩＩＩ辅助下,能在２９３细胞包装和扩增。经氯化     

基因治疗导入载体的研究进展

基因治疗在恶性肿瘤、癌症、遗传性疾病和心脑血管等疾病的治疗中开始应用,临床治疗效果明显。基因治疗中的关键技术是选用合适的载体将外源基因高效导入受体靶细胞,综述了基因治疗中病毒和非病毒载体的研究进展。     

用脊髓灰质炎病毒作表达载体的研究进展

用脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）减毒株构建的表达载体可分３种类型：ＰＶ抗原嵌合体、有缺损的ＰＶ杂交复制子和非缺损的ＰＶ杂交病毒。本文对这３种类型ＰＶ表达载体的研究进展进行综述。     

腺病毒载体研究新进展

近年来,病毒载体尤其是腺病毒载体的研究成为治疗研究中的一个热点。本综述了腺病毒载体的构建和应用方面的最新进展,表明腺病毒载体是基因转移的重要手段,具有众多的优点,在基因治疗领域具有广阔的应用前景。     

整合载体与选择载体共转化酵母菌的研究

以酿酒酵母菌株H158为例,研究了带有rDNA的多拷贝整合载体pMIRY2与选择载体pFAKnaMX4的共转化率,得到了共转化过程中两种载体的最佳比率为3-4：1,得到的共转化子在完全培养基中连续传代培养5d即可得到去除G418抗性标记基因的转化子,转化子的稳定性达到90%以上,实验表明该系统适合于外源基因在酵母中的稳定表达。     

腺病毒载体的应用及进展

腺病毒载体是近年来继逆转录病毒载体之后被广泛应用的一个基因运载系统。它具有宿主细胞广泛、繁殖滴度高、不整合及相对安全等特点,在基因治疗中发挥越来越大的作用。本介绍了Ｅ１区缺失为特征的第一代腺病毒载体应用的有效性、安全性等方面的研究情况,和旨在克服第一代腺病毒载体不足的第二代载体构建方面的进展。     

基因治疗中关于非病毒载体的最新设计策略

基因转移的非病毒技术近来发展迅速,与病毒转染细胞的方法相比,非病毒转移方法比较简便,安全,毒性小。这种方法大体可分为两种：完全非病毒方法和病毒增强的转移方式。本文主要介绍一些最近两三年来新兴的技术方案的优点和不足。     

一种携带人α1bIFN的单纯疱疹病毒载体的构建

为研究用单纯疱疹病毒作为表达细胞因子载体的生物重要性,构建了一种表达人α1b干扰素(IFN)的新型单纯疱疹病毒载体。基于一组含有完整单纯疱疹病毒全基因组的粘粒,α1bIFN表达盒插入到cosmid6上HSV1的UL2基因中,生成cos6-αIFN△UL2。通过将cos6-αIFN/△UL2与cosmid28、cosmid14、cosmid56和cosmid48共转染BHK-21细胞,同源重组产生重组病毒HSV1-αIFN/△UL2。在体外用标准VSV空斑抑制试验检测重组毒感染细胞上清α1bIFN的表达。证实HSV1-αIFN/△UL2感染的细胞中表达的人α1bIFN是有生物活性的。MOI=10感染时,24h后产生2 8×104IU/ml。而对照病毒感染时,这些细胞并不分泌可以检测到的α1bIFN。鉴于HSV1载体的嗜神经性,该载体对于分析体内神经系统局部表达的IFN的抗病毒能力是有用的。     

基因治疗的病毒载体系统

病毒载体是基因治疗中应用最为广泛的载体系统。该文就RNA病毒载体、DNA病毒载体和杂合病毒载体的生物学特性、基因组特点以及其在基因治疗中的优缺点进行综述,并对病毒载体系统的发展前景进行了展望。     

病毒载体与造血干细胞基因治疗

多种获得性和遗传性疾病累及造血细胞。造血干细胞是人类基因治疗的重要靶细胞。成功的造血干细胞基因治疗不仅需要高效基因转移,还需要治疗基因的长期、高水平表达。反转录病毒载体是造血干细胞基因治疗的常用载体,结合优化的造血干细胞转导条件,其介导的腺苷脱氨酶缺陷引起的严重联合免疫缺陷和X染色体连锁的严重联合免疫缺陷的基因治疗已经获得初步成功;其他整合型病毒载体如慢病毒和腺相关病毒载体,也在临床前造血干细胞基因治疗研究中得到广泛应用。从病毒载体、基因转移和基因表达等几个方面综述了造血干细胞基因治疗的临床前和临床研究的重要进展。     

大鼠红细胞作为SOD新型载体的细胞水平上的研究

用低渗透析 -等渗重封的方法制备了包埋超氧化物歧化酶 ( SOD)的大鼠载体红细胞 ,并从细胞水平上研究了透析条件对大鼠红细胞包埋 SOD的影响与载体红细胞的部分性质 .流式细胞计( FCM)研究表明 ,随透析时间延长和透析液渗透压降低 ,包埋 SOD的载体红细胞百分率升高 ,但载体细胞平均包埋 SOD的量无明显变化 ;SOD浓度对载体细胞百分率无明显影响 ,但与载体细胞平均包埋 SOD的量成线性关系 ;载体红细胞前向角散射 ( FLS)明显下降 ,但显微镜下观察到的载体细胞的大小无明显变化 ,当载体细胞反注射到大鼠体内后 FLS能迅速恢复 ;载体红细胞密度下降 ,其原因是低渗透析时红细胞膨胀未能完全恢复 ;载体红细胞未暴露与自身 Ig G结合的抗原位点 .激光扫描共聚焦显微镜 ( LSCM)分析表明 ,SOD在细胞内呈从细胞中心到细胞膜浓度逐步下降的辐射分布特征 .     

腺病毒相关病毒载体的研究进展

实现基因治疗的关键在于目的基因的高效转移并适度表达,这将直接影响其治疗的效率和安全性。因此,探寻理想的基因转移载体显得尤为重要。腺病毒相关病毒（adeno-associated virus,AAV）是一种缺陷型的单链DNA病毒,既可以转染分裂细胞又可以转染非分裂细胞。AAV在宿主体内以定向整合的方式存在,AAV重组体在细胞内能长期稳定地表达,且在体内不引起明显的病理变化,表明AAV作为基因治疗的载体是安全、有效和可行的。     

甲病毒表达载体系统的研究进展

甲病毒载体是一种新型的载体系统，近年来，关于该载体系统的研究很我，尤其是在蛋白质的表达、结构与功能的研究以及疫苗的研制方面，本文仅就甲病毒载体的构建及其应用作一简单介绍。     

酵母高效克隆表达T载体pYES2-T的构建及应用

为了在酵母中高通量、高效率地对外源基因进行克隆和表达,本研究以酵母表达载体pYES2为基础,构建高效克隆表达T载体。pYES2是酿酒酵母的一种高效表达载体,在其多克隆位点处设计插入XcmⅠ-Intron-XcmⅠ片段,同时将其载体中URA3基因中原有的XcmⅠ酶切位点进行定点突变,构建出pYES2-T酿酒酵母高效表达T载体。利用XcmⅠ酶切载体pYES2-T,使其产生两个突出的T末端,一方面可以通过PCR产物加A的方式直接进行TA克隆;另一方面可在半乳糖诱导启动子的调控下,对TA克隆后的外源基因在酵母中诱导表达。利用该系统高通量地对人工合成耐盐系列基因NLEAs进行筛选,研究结果表明,该系统可以在酿酒酵母中一步式完成片段克隆及耐盐基因的筛选。本研究构建的酵母表达T载体使用方便、效率高、成本低,应用前景广阔。