用DNA指纹图谱方法进行野生小家鼠的双亲判别

本文以在英格兰捕获的野生小家鼠为研究材料,尝试用ＤＮＡ指纹图谱方法判别动物后代的双亲。从冷冻鼠脑组织中提取的ＤＮＡ,经限制性酶Ｈｉｎｆ一Ｉ的酶切、凝胶电泳、尼龙膜吸附、与Ｐ￣３２标记的人或鼠ＲＮＡ探针杂交、放射自显影,最后得到ＤＮＡ指纹图谱。图谱分析表明：野生小家鼠间的亲缘关系很近,个体间的相似性系数较高,不易判别后代的双亲,建议采用简便而又准确的条带比较法,取代相似性系数法。鼠探针与鼠ＤＮＡ杂交所得到的图谱与人探针３３．６的相比,个体的特异性更强。     

动物的双亲判别与DNA指纹图谱

在亲缘识别和婚配选择等动物行为学研究中,需要知道动物之间的亲缘关系。通过分析以往的各种双亲判别方法,如蛋白电泳和血清学技术等,其中DNA指纹图谱法被认为是目前最好的。这种方法已在许多种动物(狗、猫、小家鼠、家燕、蓠雀、天鹅等)和人的研究中得到应用。DNA指纹图谱方法的基本原理是这样,两个动物的DNA 片断具有完全相同的碱基排序的情形从理论上讲其可能性极小,所以每个个体(除同卵双生子外)的DNA经提取、酶切、凝胶电泳、RNA或DNA探针杂交和放射性自显影后所形成的条带分布应该是有区别的、具有个体的特异性,这些条带就是DNA指纹图谱。动物个体DNA 指纹图谱中的每一条带,除了偶然发生的基因突变, 都可以从父母双方、或父方、或母方找到。据此,本文介绍了如何使用DNA指纹图谱进行包括父方和母方亲代判别的方法,如条带比较法和相似性系数法。     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化

本实验采用ＲＦＬＰ技术,对中国东部栗疫病菌进行了群体遗传结构的研究,３１３个参试菌株来自１０个省（市）的１６个群体（子群体）,样本人布在北纬２４°Ｎ－４１°Ｎ。各菌株的ＤＮＡ分别用限制性内切酶Ｐｓｔ Ⅰ和ＥｃｏＲⅠ酶切,先后以１０个低拷贝ＤＮＡ探针和１个ＤＮＡ指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针的杂交图谱呈单态性,其他７个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化*

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。     

板齿鼠线粒体DNA的研究

本文应用ＡｐａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｃｌＩ、ＢｇｌＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄＩＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕＩＩ、ＳａｃＩ、ＳｃａＩ和ＸｂａＩ等１３种限制性内切酶对板齿鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析,并用双酶解法构建其限制性内切酶图谱。结果表明板齿鼠存在３种ｍｔＤＮＡ单倍型,可通过限制酶ＰｖｕＩＩ、ＨｉｎｄＩＩ和ＡｐａＩ区分,呈现ＤＮＡ多态性和种内遗传变异。与小家鼠、褐家鼠ｍｔＤＮＡ限制性片段的数据相比较,板齿鼠和这两种鼠ｍｔＤＮＡ存在明显差异。板齿鼠ｍｔＤＮＡ限制性内切酶图谱的建立,为进一步系统研究鼠科动物的遗传分化提供了依据。     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ,分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性,可作为小鼠基因组小卫星探针,用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

RAPD分析快速鉴定双歧杆菌

本文应用ＲＡＰＤ技术,选用１１种引物,以嗜酸乳杆菌为对照,对６种１３珠双歧杆菌菌株基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,分析其ＤＮＡ指纹图谱,并计算其相似性指数。结果表明,双歧杆菌和非双歧杆菌之间,其相似性指数有显著差异;选择合适的引物进行扩增,双歧杆菌不同种间和同种不同株间可表现不同的ＤＮＡ指纹图谱。本文还对ＲＡＰＤ技术应用于双歧杆菌分类鉴定的可能性进行讨论。     

树鼠mtDNA限制性内切酶图谱及其与小家鼠褐家鼠的新缘关系

本实验用Ａｐａ Ｉ,ＡＶａ Ｉ,Ｂａｍ ＨＩ＜ＢｃｌＩ,Ｃｌａ Ｉ,Ｅｃｏ ＲＩＥｃｏ ＲＶ,Ｈｐａ Ｉ,Ｐｓｔ Ｉ,Ｐｖｕ Ⅱ,ＳｃａＩ,ＸｂａＩ等１３种限制性内切酶分析树鼠的ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性,并用双酶解法构建了其中８种酶的限制性内切酶图谱。根据限制性片段差异法和分子钟,计算并讨论树鼠和小家鼠、褐家鼠的ｍｔＤＮＡ遗传距离和亲缘关系。结果表明树鼠与褐家鼠的关系较接近,两者的分歧时间在     

大熊猫DNA指纹在野生种群数量调查中的应用

本文用荧光素标记ＬＺＦ－１基因指纹探针,以四川省冕宁县冶勒野外大熊猫的脱落被毛及尽量新鲜的粪便作样品,进行了ＤＮＡ指纹检测。１．在相同或不同时间、巢域采集的粪便与被毛样品,显现出相同或不同的ＤＮＡ指纹图谱,达到个体认定的目的．表明了大熊猫野外脱落被毛和粪便,能作为ＤＮＡ指纹分析材料,进行野生种群数量调查．２．根据检测６个被毛和９个粪便样品的结果,认定该生境中有７只大熊猫个体,纠正了有８只和８±２只的记载．３．应用ＤＮＡ指纹技术及微机个体识别进行大熊猫野外数量调查,准确可靠,节省人力、物力和财力,能获得大熊猫在野外的真实个体数量。     

甘薯质体遗传方式的DNA指纹图谱分析

用DNA指纹图谱分析了甘薯（Ipomoea batatasLam.)徐薯18和AB78-1品系及它们的正反交子代叶绿体DNA,结果显示子代叶绿体DNA指纹均与母本相同,而未发现与父本或双亲相同的指纹图谱,因此在该杂交组合中质体遗传方式为母系遗传,这个结论与先前根据细胞学研究所推测的甘薯质体遗传试不同。表明旋花科植物可能并不存在一个一致的父系或双亲质体传递模式。DNA指纹图谱分析用于质体遗传的研究尚未见报道,本文对其优越性进行了讨论。     

一种能表现水稻基因组DNA分化特征的重复DNA顺序

用ＤＮＡ 复性动力学方法克隆到一个水稻中度重复顺序。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交、限制性内切酶分析及序列分析资料表明,该重复顺序在水稻基因组中具有串联重复和散布状态两种存在方式。以该ＤＮＡ 片段作探针,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交方法分析了多种野生稻种和栽培稻品种的基因组分化特征。某些限制性内切酶消化过的水稻ＤＮＡ,其图谱呈现出多达４０ 条以上的杂交带,包括强杂交带和弱杂交带两种类型。重复实验结果证明,强杂交带表现为ＢＢＣＣ染色体组型特异而弱带则在栽培稻各品种间显示出丰富的多态性,表明该重复顺序片段在水稻理论研究和育种实践中可能具有重要意义     

陆地棉×比克氏棉育成种质系的同工酶和RAPD分析

为了从分子水平上检验野生棉遗传特性向陆地棉转育的结果以及育成种质之间的遗传差异,通过等电聚焦电泳和RAPD技术,对来自科遗181陆地棉品系与野生比克氏棉杂交后代的6个遗传稳定的不同种质系及其亲本的过氧化物酶同工酶图谱和DNA指纹图谱进行了分析。结果如下（1）6个种质系的基本酶谱特征均倾向于陆地棉亲本,但在其中2个种质系的过氧化物酶图谱中,观察到各具有1条等电点值（PI）为4.85的野生亲本的特征带;（2）DNA指纹图谱的分析表明,不同种质系之间在基因组水平上具有高度的异质性。并且在OPO10和OPO112个引物的扩增图谱中观察到4个育成种质系具有野生比克氏棉亲本的特征带。     

甘薯质体遗传方式的DNA指纹图谱分析

用DNA指纹图谱分析了甘薯(Ipomoea batatas Lam.)徐薯18和AB78-1品系及它们的正反交子代叶绿体DNA,结果显示子代叶绿体DNA指纹均与母本相同,而未发现与父本或双亲相同的指纹图谱,因此在该杂交组合中质体遗传方式为母系遗传.这个结论与先前根据细胞学研究所推测的甘薯质体遗传方式不同,表明旋花科植物可能并不存在一个一致的父系或双亲质体传递模式.DNA指纹图谱分析用于质体遗传的研究尚未见报道,本文对其优越性进行了讨论.     

ERIC-PCR分子杂交技术分析大熊猫肠道菌群结构

目的了解大熊猫肠道微生物区系结构的相似性和稳定性,并找出大熊猫肠道微生物群落结构的变化与健康状况的关系。方法对上海动物园及上海野生动物园所饲养的3只大熊猫2次采集的粪便样品进行微生物群落总DNA的抽提,并以此为模板获得反映肠道微生物群落结构特征的ERIC—PCR和Southern杂交指纹图谱,比较各DNA样品指纹图谱的相似性指数。结果除国庆(大熊猫)的第1次采集的样品(当时处于腹泻状态),其他各DNA样品的ERIC-PCR及Southern杂交指纹图谱的相似性都达到85％～100％;佳斯及川川(大熊猫)2个个体2次采集的样品之间ERIC指纹图谱的相似性分别为93％和87％,而国庆腹泻时的样品与健康时的样品之间则为71％。结论大熊猫不同个体之间肠道微生物群落结构比较相似,而且同一个体在不同时期表现出比较高的稳定性,但当个体的健康出现问题时肠道优势菌菌群结构有一定波动。所采用的DNA提取方法、ERIC—PCR和Southern杂交指纹图谱的高度重复性证明了之一分子生态学技术在大熊猫肠道微生物区系动态监测中的可行性。     

四倍体大燕麦×六倍体裸燕麦的杂种F1的产生及鉴定

本研究以四倍体大燕麦 (AvenamagnaL .)做母本 ,六倍体裸燕麦 (AvenanudaL .)做父本进行杂交 ,利用幼胚拯救技术获得了杂种F1,并对其后代形态特征进行了观察 ;对杂种F1同工酶图谱和DNA指纹图谱进行了分析。杂种F1形态特征偏亲本或介于双亲之间 ;同工酶研究表明多数F1具有双亲互补酶带 ;RAPD分析不同引物扩增产物F1呈共显性或偏父、偏母。这些结果表明F1为真杂种     

29份云南甘蔗创新种质的SSR遗传多样性分析和指纹图谱构建

该研究以16份甘蔗骨干亲本为参照,对29份云南甘蔗创新种质进行SSR指纹图谱构建和遗传多样性分析,以明确创新种质与16份亲本间的遗传基础和多样性水平。结果表明:6对引物共扩增出104条带,其中101条为多态性条带,多态性条带比例为97.25%;45份材料的遗传相似性系数为0.235 3~0.891 3,平均值为0.563 3;其中16份甘蔗骨干亲本的遗传相似性系数为0.301 6~0.755 6,甘蔗创新种质与甘蔗骨干亲本的特异条带比例为14∶1,涵盖了割手密、大茎野生种、斑茅和滇蔗茅等基因源。根据骨干亲本间的相似性系数范围,在相似性系数为0.43处,可将种质分为6大类群,亲缘关系相对较远,适宜作为种质间的杂交利用。通过引物区分效率分析,6对引物扩增的多态信息量为0.967 9~0.975 8,其中MSSCIR21引物区分效率最高,利用MSSCIR21和SMC1047HA引物组合构建了云南甘蔗创新种质标准指纹图谱,在相似性系数为0.85处即可区分所有种质,图谱的鉴别准确率为100%,每份资源都有唯一的指纹图谱,可将29份创新种质和16份骨干亲本区分鉴别出来。该研究能够为后续杂交利用、种质鉴定和知识产权保护提供依据。     

幽门螺杆菌的分子指纹法研究进展

分子指纹法包括：细菌全细胞蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱分析法,染色体ＤＮＡ限制酶酶切图谱分析法,ｒＲＮＡ基因限制酶酶切图谱分析法。分子指纹法能敏感表达幽门螺杆菌（ＨＰ）基因变异,从菌株水平准确鉴定ＨＰ,并应用于ＨＰ感染复发,耐药性,致病机理和分子流行病学等重要问题的研究中。     

一步法PCR检测大鼠肺支原体核酸的研究

一步法体外扩增结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测Ｍ５３鼠肺支原体标准株,设计一对特异寡核苷酸引物及探针,合成、纯化、建立了特异、敏感、快速的检测手段。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果显示鼠肺支原体Ｍ５３株基因组ＤＮＡ７１０ｂｐ特异谱带。对５０只ＳＤ大鼠进行检测,结果ＰＣＲ方法检出率高于分离培养法,扩增产物行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交验证,采用碱性磷酸酶标记寡核苷酸探针,可与膜上特异靶ＤＮＡ序列杂交,而阴性对照无杂交信号。特异性实验检出１０ｐｇ的ＤＮＡ。充分说明一步法ＰＣＲ,具有高度、特异、灵敏、快速等优势,适应与大、小鼠监测中应用。     

四倍体大燕麦×六倍体裸燕麦的杂种F1的产生及鉴定

本研究以四倍体大燕麦（Avena magna L.）做母本,六倍体裸燕麦（Avena nuda L.）做父本进行杂交,利用幼胚拯救技术获得了杂种F1,并对其后代形态特征进行了观察;对杂种F1同工酶图谱和DNA指纹图谱进行了分析。杂种F1形态特征偏亲本或介于双亲之间;同工酶研究表明多数F1具有双亲互补酶带;RAPD分析不同引物扩增产物F1呈共显性或偏父、偏母。这些结果表明F1为真杂种。