甜橙与酸橙体细胞杂种核质组成鉴定(英文)

采用流式细胞术(flow cytometry, FCM)、简单重复序列(simple sequence repeat, SSR)和酶切扩增多型性序列(cleaved amplified polymorphic sequence, CAPS)等技术分析酸橙(Citrus aurantium L. )叶肉原生质体和甜橙(C. sinenis Osbeck cv. Shamouti)胚性愈伤组织原生质体电融合再生的体细胞杂种。FCM研究结果表明,所有的体细胞杂种植株荧光强度是二倍体对照的2倍,说明所分析的植株为四倍体。用SSR和CAPS分析了体细胞杂种的核质遗传组成,在试验的4对SSR引物中,有2对能区分开融合亲本。在2对引物中,体细胞杂种植株包含双亲的全部特异带,表明它们为异核杂种。通用引物扩增结合限制性内切酶酶切能鉴别融合亲本,在具有多型性的引物/酶组合中,所有体细胞杂种的线粒体和叶绿体DNA带型与胚性亲本(甜橙)完全一样。结果表明体细胞杂种核基因组来自双亲,而胞质基因组来自悬浮系亲本。讨论了所用技术的特点、柑橘四倍体体细胞杂种核质遗传规律及本组合体细胞杂种的应用。     

甜橙与酸橙体细胞杂种核质组成鉴定

采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)和酶切扩增多型性序列(cleaved amplifiedpolymorphic sequence,CAPS)等技术分析酸橙(Citrus aurantium L.)叶肉原生质体和甜橙(C.sinenis Osbeck cv.Shamouti)胚性愈伤组织原生质体电融合再生的体细胞杂种.FCM研究结果表明,所有的体细胞杂种植株荧光强度是二倍体对照的2倍,说明所分析的植株为四倍体.用SSR和CAPS分析了体细胞杂种的核质遗传组成,在试验的4对SSR引物中,有2对能区分开融合亲本.在2对引物中,体细胞杂种植株包含双亲的全部特异带,表明它们为异核杂种.通用引物扩增结合限制性内切酶酶切能鉴别融合亲本,在具有多型性的引物/酶组合中,所有体细胞杂种的线粒体和叶绿体DNA带型与胚性亲本(甜橙)完全一样.结果表明体细胞杂种核基因组来自双亲,而胞质基因组来自悬浮系亲本.讨论了所用技术的特点、柑橘四倍体体细胞杂种核质遗传规律及本组合体细胞杂种的应用.     

胡萝卜与川西獐牙菜不对称体细胞杂种的核/质基因组特征

胡萝卜(Daucus carota var.sativa)原生质体与经260μW/cm2紫外线照射的川西獐牙菜(Swertia mussotii)原生质体用PEG法诱导融合.对融合再生的克隆的5SrDNA间隔序列和RAPD分析结果得知,各再生克隆均存在双亲的核DNA及重组DNA.杂种的核基因组组成以胡萝卜(受体)为主,供体川西獐牙菜DNA谱带较少;UV照射剂量对体细胞杂种核基因组组成没有明显的影响.进一步对再生克隆叶绿体DNA的SSR分析表明,杂种细胞中双亲叶绿体基因组随机分离并发生重组.     

印度酸桔与飞龙枳属间体细胞杂种的胞质遗传分析

对印度酸桔（Citrus reticulata） 飞龙枳（Poncirus trifoliata）属间体细胞杂种的3棵8年生植株及其融合亲本的胞质基因组进行了CAPS（Cleaved Amplified Polymorphic Sequences）和RFLP分析。用5对叶绿体和5对线粒体通用引物对（universal primer pairs）对杂种及亲本的总DNA进行PCR扩增,都没有检测到多态性,但扩增产物分别用11种限制性内切酶酶切后,发现3个有多态性的叶绿体CAPS标记和1个线粒体CAPS标记。结果表明杂种的叶绿体都来源于飞龙枳,而线粒体都来源于印度酸桔。为了证实CAPS分析结果的可靠性,用5种限制性内切酶对总DNA进行单酶切,分别与1个叶绿体探针和5个线粒体探针杂交,结果与CAPS分析一致。初步证实该组合体细胞杂种的胞质遗传组成为“印度酸桔的线粒体 飞龙枳的叶绿体”。结果表明细胞融合确实能导致细胞核、线粒体和叶绿体的重新组合,为柑桔体细胞杂种中线粒体偏向来源于悬浮亲本而叶绿体偏向来源于叶肉亲本的胞质分配现象提供了新的证据,并为通过体细胞融合技术定向转移柑桔胞质基因的品种改良思路提供了重要理论依据。     

小麦与高冰草体细胞杂种后代的核基因组和叶绿体基因组的遗传特征

以小麦(Triticum aestivum L.)与高冰草(Agropyron elongatum(Host)Nevski)体细胞杂种同一个克隆来源的F2-F6自交系Ⅱ-2、Ⅱ-Ⅰ-8以及由Ⅱ-Ⅰ-8 F2分离形成的8-1(F3-F6)为材料,利用小麦叶绿体基因组的微卫星(Microsatellite)特异引物及随机扩增多态性DNA(RAPD)引物进行分析.结果表明,杂种株系的叶绿体基因组组成一致,均以小麦叶绿体基因组为主,仅在rpl14和rpl16基因的间隔序列中检测到双亲的特征带,表明有高冰草的叶绿体DNA在杂种中存在,并稳定遗传至第六代.RAPD分析表明,不同杂种株系中存在不同的高冰草核DNA片段,核基因组在传代中基本稳定.     

RAPD分析─鉴定柑桔体细胞杂种的快速方法

本文利用改进的DNA提取方法,从Volkamer柠檬(Citrus volkameriana Ten. and Pasq.)和酸橙(C. aurantium L.)及其原生质体杂种植株的叶片中抽提总DNA,进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)分析。结果表明: 在随机选取的15种引物中,有10种可单独或与其它引物一道鉴定这一组合的体细胞杂种。与形态学性状观察、同工酶及ONA杂交分析等方法比较,RAPD分析是一种可在试管苗期即可直接、准确、快速鉴定柑桔体细胞杂种的方法。     

小麦与高冰草体细胞杂种后代的核基因组和叶绿体基因组的遗传特征

以小麦(TriticumaestivumL.)与高冰草(Agropyronelongatum(Host)Nevski)体细胞杂种同一个克隆来源的F2-F6自交系Ⅱ-2、Ⅱ-Ⅰ-8以及由Ⅱ-Ⅰ-8F2分离形成的8-1(F3-F6)为材料,利用小麦叶绿体基因组的微卫星(Microsatellite)特异引物及随机扩增多态性DNA(RAPD)引物进行分析。结果表明,杂种株系的叶绿体基因组组成一致,均以小麦叶绿体基因组为主,仅在rpl14和rpl16基因的间隔序列中检测到双亲的特征带,表明有高冰草的叶绿体DNA在杂种中存在,并稳定遗传至第六代。RAPD分析表明,不同杂种株系中存在不同的高冰草核DNA片段,核基因组在传代中基本稳定。     

基因诱变、重组、克隆

922055芸苔埋核盘菌的转化及利用基因库进行突变体互朴仁英」/Ball,A.M.…了E叉p。M了eol一i,,i,15(3)一243~254〔译自DBA,1991,10(23),91一13320〕 对植物病原菌芸苔埋核盘菌(p夕r。”。夕‘“za西,。。s‘。a。)JH26和NHlo进行原生质体转化,构建了突变体并用基因库来互补。在有抓化钙和PEG的条件下用3种质粒(编码潮霉素抗性的质粒pAN7一1和装配型质粒pAN7一2或编码腐章霉素抗性的质粒pANS一1)转化该菌分生抱子原生质体。在随机位点整入DNA,并时常发生多重整合。转化频率可变,但与转化其它植物致病真菌的相同 (高达2。/协9 DNA…     

在植物遗传工程中电的可能用途

<正> 有一种可望代替根癌土壤杆菌来转移外源 DNA 到植物细胞中的新媒介,那就是电。Bo-yce Thompson 研究所(Ithaca,纽约)的科研人员已经成功地使用高压电的瞬时脉冲把"裸露的"或游离的 DNA 转移到植物原生质体甚至可能到植物叶绿体中。据专家说,已经     

毛叶曼陀萝(Datura innoxia Mill.)和颠茄(Atropa belladonna L.)属间体细胞杂交成功

据G.Krumbiegcl和O.Schieder报道,他们通过原生质体融合的途径,将曼陀萝和颠茄杂交成功。 筛选了13个体细胞杂种,其中大部分已经开始分化出根和叶。杂种愈伤组织可以根据形态特征加以辨认。毛叶曼陀萝用的是白化苗突变体,因此杂种愈伤组织应是有毛(来自毛叶曼陀萝)和绿色(来自颠茄)的。 杂种经过了细胞学鉴定,两个种的染色体     

小麦与多年生黑麦草原生质体的电融合及杂种愈伤组织的形成

多年生黑麦草(Lolium perenne L.)悬浮培养细胞来源的原生质体和小麦(Triticumaestivum L.)含叶绿体的悬浮培养细胞来源的原生质体间,用直流方波脉冲进行电融合,获得了体细胞杂种愈伤组织。小麦的原生质体经过碘乙酰胺失活。愈伤组织的形态和颜色被用作识别预期杂种的标记。为了对杂种愈伤组织进行同工酶分析,观察了亲本的9种同工酶谱,其中3种在亲本间表现出差异(ADH、GOT 和 SDH)。酒精脱氢酶(ADH)的分析结果表明,有6个细胞系表现出杂种带。这些细胞系经过其他两种同工酶分析和 rDNA 探针杂交试验表明,一个细胞系表现出基本完全的亲本基因组间的组合,其余5个细胞系是部分杂种。     

小麦与羊草体细胞杂种的细胞核和细胞质基因组分析

通过原生质体融合与培养获得小麦与羊草的体细胞杂种,其核基因组成以羊草(供体)为主,用线粒体特异探针atp6与叶绿体特异探针rbcL进行的RFLP分析结果表明,胞质基因组成偏向羊草并发生了重组.讨论了受体核基因组消减对杂种再生及对受体胞质基因组消减的影响.     

基因诱变、重组、克隆

920441Re几公bac‘e,‘。。saloo丽,a,u二DNA片段的克隆〔英〕/Etehegaray,J.P.…f FEMSMierobiol.Lett。一1991,79(i)一61~64〔译自DBA,1991,10(10),91一05433〕 构建了Ren畜baete于云拙仍召al仍on坛砚ar饥重组基因库,以分离用于检测大马哈鱼肾致病菌基因序列的探针DNA。消除与Sau 3A限制酶切的杀缝气单胞菌(Aeromo.as吕al仍0.‘e云‘a)ATCC33658、Ye,s玄介‘ar留e无er云ATCC29473、Y。了比劣:e八、小肠结肠炎耶尔一森氏菌(Y。e耐e,。-co乙“‘ca)、弗氏志贺氏菌(召h名gella fle劣:e-,云)、伤寒沙门氏菌(Ba乙mooe乙王a切尹而…     

植物的体细胞杂交和基因转移研究进展(II)

四、种群间的体细胞杂种对于育种家来说,最期望的是通过原生质体融合,把优良性状转移到那些不亲和性的物种中去.在十字花科植物中,我们已经选择了山芥(Barbarea vulgaris)和穿叶遏蓝菜(Thlaspi perfoliatum)作为融合油菜的亲本.因为山芥属植物具有抗寒性,遏蓝菜属植物含有一种可以用作润滑剂的神经酸.它们与拟南芥芸苔杂种不同,其分离杂种的原生质体愈伤组织容易再生成苗,而在发根和幼苗移栽方面较困难.     

叶绿体S S R标记:柑橘体细胞杂种胞质遗传分析的一种新方法

从水稻(Oryza sativa L.)、烟草(Nicotiana tabacum L.)和黑松(Pinus thunbergiiParl.)等植物的22对叶绿体SSR引物中筛选出 5对能用于柑橘叶绿体SSR分析的引物,应用这5对引物对9个组合的柑橘体细胞杂种的叶绿体遗传进行了分析.结果表明:这些组合再生的杂种中叶绿体都呈现随机分离,该现象与以前报道的RFLP分析结果一致,而且其可靠性已被CAPS分析所证实.表明柑橘叶绿体SSR同RFLP及CAPS一样可靠,并且更简单高效、易于操作,特别适合对柑橘等植物体细胞杂种进行早期胞质遗传组成分析.     

烟草试管无性杂交

祖德明等曾用嫁接方法获得茄子品种间无性杂种,Carlson首次用原生质体融合方法获得粉蓝烟草与郎氏烟草种间体细胞杂种。我们试验一种简易获得体细胞杂种(即无性杂种)方法,即将不同品种烟草茎段进行无菌操作嫁     

对粉蓝烟草与矮牵牛体细胞杂种植株的进一步观察

以亲本为对照,观察了粉蓝烟草和矮牵牛的体细胞杂种植株的叶片、气孔和花粉,发现杂种植株的叶片形态及其气孔大小、分布密度都与双亲有显著的差异。同时发现了杂种植株花粉的不育性。进一步证实了我们用原生质体融合的方法得到的植株是远缘杂种植株。     

消除聚乙二醇的毒性

在制备体细胞杂种过程中,常用聚乙二醇(PEG)诱导植物原生质体融合。但是,使用这种化学试剂常常使融合细胞的活性较低。融合细胞活性的损失以及相应的体细胞杂种产生效率的降低一直被认为是由于PEG的毒性所造成的,而最近加拿大的研究人员高国楠和M.Saleem报告说,PEG本身对原生质体是无毒的。高和Saleem在对苜蓿(Medicago sativa)和光烟草(Nicotiana glauca)的叶肉原生质体以及大豆子叶原生质体所做的研究中发现,用一种混合床离子交换树脂脱去PEG中的     

叶绿体SSR标记：柑橘体细胞杂种胞质遗传分析的一种新方法

从水稻(Oryza sativa L．)、烟草(Nicotiana tabacum L．)和黑松(Pinus thunbergii Parl．)等植物的22对叶绿体SSR引物中筛选出5对能用于柑橘叶绿体SSR分析的引物,应用这5对引物对9个组合的柑橘体细胞杂种的叶绿体遗传进行了分析。结果表明：这些组合再生的杂种中叶绿体都呈现随机分离,该现象与以前报道的RFLP分析结果一致,而且其可靠性已被CAPS分析所证实。表明柑橘叶绿体SSR同RFLP及CAPS一样可靠,并且更简单高效、易于操作,特别适合对柑橘等植物体细胞杂种进行早期胞质遗传组成分析。     

通过不对称体细胞杂交向小麦转移青苗碱谷DNA

普通小麦"济南177"(Triticum aestivum L.cv.Jinan177)经继代培养和选择,形成了性质不同的愈伤组织,一种生长迅速,易于形成悬浮系,游离的原生质具有旺盛的分裂能力,但不能分化,称为Cha9;另一种具有一定能力,但游离原生质体分裂能力低,称为176.二者之一来源的原生质体与紫外线照射的青苗碱谷原生质体融合均不能获得再生植株.而将源于Cha9和176的两种原生质体混合,与经紫外线照射的青苗碱谷原生质体在PEG诱导下融合,融合产物再生了大量植株.再生的愈伤组织及植株经表现型、细胞学、有工酶、RAPD分析,证明了其杂种性质,用不麦叶绿体特异的简单得复序列(SSR)引物分析了再生杂种的叶绿体遗传组成情况.在不同的杂种克隆中,同时带有Cha9和176的遗传物质并含有供体核及胞质基因组的克隆4具有较高的分化能力,再生了大量生长旺盛的完整植株.