用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油—SDS—PAGE系统,但经实践后发现,此系统电泳时间太长,导致小分子扩散丢失较多,小分子成像不清。后经用尿素代替甘油,同时降低三层胶的浓度,制成15.5%T(C=6%)的分离胶、10%T(C=3%)的间隙胶与4%T(C=3%)的浓缩胶,结果不但节省了电泳时间,且小分子多肽成像清楚。     

Glycine—SDS—PAGE测定小分子多肽分子量

小分子多肽分子量的测定 ,目前多采用Ｔｒｉｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ系统[1～ 3 ] ,但系统中的Ｔｒｉｃｉｎｅ价格昂贵 ,加之电泳时间较长 ( 3～ 4ｈ) ,为此 ,作者经过实验摸索 ,建立了Ｇｌｙｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ测定小分子多肽的方法。1　材料和方法表 1　制胶配方成分分离胶 (ｍｌ)浓缩胶 (ｍｌ)分离胶单体母液 1 3 3 -浓缩胶单体母液 -0 23 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ 1 3 3 -(ｐＨ8 8)0 5ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ -0 3 8(ｐＨ6 8)尿素 1 44ｇ -Ｈ2 Ｏ 0 40 910 %ＳＤＳ 40 μｌ 15 μｌ10 %ＡＰＳ 2 5 μｌ 12 μｌＴ…     

SDS—PAGE电泳对小分子多肽的分析

对一些小分子多肽进行电泳分析时,在固定,染色,脱色过程中极易扩散丢失;即使用常规尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统测定寡肽分子量,银染色后小于８ＫＤａ的标准品也无着色带显示。     

小分子肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法

在蛋白质的生化分析和基因表达产物的分离纯化中 ,经常要把某种或某些蛋白质成分分离开来。聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)是分离蛋白质的常用生化方法 ,样品的蛋白质分子热变性解聚后与 SDS结合形成带负电的蛋白质 - SDS复合物 ,复合物在电泳中的迁移率取决于蛋白质的分子大小 ,使用均匀浓度的 SDS-PAGE来分析分子量在 15～ 2 0 0 k D的蛋白质时 ,电泳迁移率与分子量的对数成线性关系。但常规定 Tris-甘氨酸 -盐酸系统中电泳分离分子量小于 10 k D的多肽效果差。作者在分离小分子肽的实验中改进了一套较简便的分离小分子肽的 T…     

用一种改进的电泳方法测定抗冻蛋白的分子量

针对抗冻蛋白分子量较小的特点,该文采用了一种改进的Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量。采用三层胶系统并在电极缓冲液中以Ｔｒｉｃｉｎｅ代替Ｇｌｙｃｉｎｅ。     

SDS-PAGE电泳对小分子多肽的分析

对一些小分子多肽进行电泳分析时,在固定、染色、脱色过程中极易扩散丢失;即使用常规尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ系统测定寡肽分子量,银染色后小于８ｋＤａ的标准品也无着色带显示。我们实践摸索出提高分离胶的浓度和交联度,制成２０％Ｔ,６％Ｃ和１５％Ｔ,３％Ｃ的梯度胶,胶中不加尿素,且不需银染均可见小分子多肽着色带的方法。     

应用SDS—PAGE显示小分子多肽技术的探讨

为探讨显示小分子多肽技术,应用SDS－PAGE寻找更简单,快捷的分析小分子多肽的方法。采用8％,T,3％C的丙烯酰胺浓缩胶和含6mol/L脲（或含24％的甘油）的16％T,6％C的丙烯酰胺分离胶 的双层不连续SDS－PAGE和三羟基甘氨酸电泳缓冲液显示蛋白分子量标准（2．512－16．949KD）和待测样品,并对蛋白分子量标准在这两种分离胶中进行了回归分析。结果表明在这两种条件下均能显示分子量小至2．512KD的多肽;多肽样品在含脲和在含甘油的2L－T－SDS－PAGE中均有较好的显带,蛋白分子量标准的直线回归系数分别为r=-0.966和r=-0.964,它们是显示小分子多肽和估测其相对分 子质量及对多肽分子进行进一步分析和更为简便易行的方法。     

有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法

目的：建立一种有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。方法：针对1kDa分子量环脂肽的特点,对凝胶的组分和比例、凝胶的聚合速度等电泳条件进行了优化。结果：改进凝胶组分和比例,使得浓缩胶为7％T、3％C,夹层胶为12％T、3％C,致密胶为16．5％T、6％C;并在胶中加入尿素和甘油;同时加大APS的量使聚合速度加快。由此得到的环脂肽电泳条带清晰、平稳、紧凑,显示分子量为1．05kDa,与质谱结果吻合。结论：新建立的Tricine—SDS—PAGE是一种有效的分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。     

尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的：探讨尿素对Tricine—SDS—PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法：利用常规SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE分离小分子肽,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果：调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为5．05％,能够改善小分子肽的分离效果。加入36％的尿素比加入甘油可以更有效分离1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论：尿素改善SDS—PAGE分离小分子肽的效果,制作尿素胶时,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。     

抗肿瘤小分子多肽的研究进展

抗肿瘤小分子多肽具有分子量小、低毒性、高活性、易于穿透肿瘤细胞等特点,一些抗肿瘤小分子多肽已进入临床研究,成为肿瘤药物研发的新热点。本文从抗肿瘤小分子多肽的不同来源途径、结构改造及生物活性等方面,对其近年来的研究进展作简要概述。     

一种简易的聚丙烯酰胺凝胶脱色方法

PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法,常规SDS-PAGE分析蛋白过程中考马斯亮蓝色素脱除过程耗时低效。改变脱色液配方,使用20%的乙醇和10％冰醋酸作为脱色剂,在脱色液中放置3-5片纸巾吸附色素,并在脱色过程中换纸1-2次,可缩短脱色时间3-4h,减少脱色液用量2-3倍。     

SDS—PAPGE法测定His—tag融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓ－ｔａｇ／Ｎｉ－ＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓ－ｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个Ｈｉｓ－ｔａｇ融合蛋白Ｐ７３－Ｈｉｓ时,首先用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对     

幽门螺杆菌尿素酶的纯化及其特性

本文利用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００和Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步层析,从ＨＰ蒸馏水浸液中提取纯化尿素酶,并对其特性进行了测定,证明ＨＰ尿素酶各含一个６６ｋＤ和２９．５ｋＤ的亚单位,并以６个分子聚合成６２５ｋＤ大分子蛋白,有很好的抗原性,并显示特异的血清学反应。用ＨＰ超声浸液抗原和尿素酶,加入２μｇ霍乱毒素粘膜佐剂,给ＳＰＦ ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠口服免疫,可使８０％小鼠抵抗ＨＰ活菌的攻击,证明尿素酶是一种抗ＨＰ的保护性抗原。     

抗肿瘤小分子多肽的来源及抗肿瘤机制

小分子多肽广泛存在于自然界,并可通过人工方法合成。目前对具抗肿瘤活性小分子多肽的研究日渐深入,它们可针对肿瘤发生发展的机制,特异性杀伤肿瘤细胞,由于具有分子小、活性高、毒性低的特点．在肿瘤的临床治疗上有重要的价值。     

小分子牡蛎多肽对雄性小鼠性功能的影响

探究不同剂量的小分子牡蛎多肽对雄性小鼠性功能的影响。将6周龄的雄性昆明小鼠随机分成4组,连续灌胃6周。分别测定每组小鼠交配能力,性腺器官的重量和脏器指数,精子数目、活力和畸形率;采用分光光度法测定小鼠血清中胆固醇和阴茎中NO含量;采用ELISA法测定小鼠血清中睾酮(testosterone, T)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH)和卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)的含量;采用实时荧光定量PCR检测SRPK2及3个雄激素限速酶(类固醇生成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD))基因的表达情况。结果表明,小分子牡蛎多肽可以通过提高小鼠的交配能力、性腺器官重量和脏器系数以及精子质量,增加小鼠血清中胆固醇和性激素以及阴茎中NO的含量,提高性功能相关基因的表达量来增强雄性小鼠的性功能。在一定剂量范围内,性功能的增强程度具有一定剂量依赖性。     

腮腺炎病毒的结构多肽——分子量的电泳测定

腮腺炎病毒感染鸡胚后收集尿液和羊水,通过差异离心和蔗糖密度梯度离心提纯宥毒。经SDS—PAGE分离,以铬银染色法结合溴化乙锭和考马斯亮兰染色,发现病毒含有13种结构多肽,分子量分别为79,74,70,65,61,59,56,53,50,45,41,34和31 x103d。     

8mol/L脲中rhIL-3含量的测定

为解决8mol／L脉中rhIL－3的定量问题,以卵清蛋白作内标,进行常规SDS－PAGE后,作激光灰度扫描,并计算rhIL－3和卵清蛋白的峰面积,发现两种蛋白峰面积的比值与rhIL－3浓度在0．2－1．0mg／ml间呈良好线性关系。查标准曲线可以计算出8mol／L脲中rhIL－3的含量。重复性测定表明该法具有较好的重现性。     

用于串联质谱鉴定多肽的计量方法

目前已有多种对串联质谱与数据库中多肽的理论质谱的一致性进行评估的高通量计量算法用于鸟枪法蛋白质组学 (shotgunproteomics)研究。然而这些方法操作时存在大量错误的多肽鉴定。这里提出一种新的串联质谱识别多肽序列的计量算法。该算法综合考虑了串联质谱中不同离子出现的概率、多肽的酶切位点数、理论离子与实验离子的匹配程度和匹配模式。对大容量的串联质谱数据集的测试表明 ,根据算法开发的软件PepSearch比目前最常用的软件SEQUEST有更好的鉴定准确性。PepSearch可从http : compbio.sibsnet.org projects pepsearch下载。