邻位连接技术：一种新的高灵敏度蛋白质检测技术

蛋白质组学(proteomics)诞生以来,高效准确的蛋白质检测技术受到越来越多的关注.最近 ,一种高灵敏度的蛋白质检测技术,邻位连接技术(proximity ligation assay, PLA)被建 立.该技术采用核酸适体(aptamer)或单/多克隆抗体 核酸复合物作为邻位连接探针(proximity probes).当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时,它们将在空间位置上相互临近,通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列,该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度.该技术将对蛋白质的检测转变为对DNA核酸序列的检测,实现了特殊蛋白质的检测,定量及定位.文章从该方法的产生背景,发展过程,原理以及探针制备等方面对该方法进行了系统的介绍,列举了该方法的几种重要应用,并对该方法在蛋白质组学研究领域的应用前景进行了展望.     

核酸-蛋白质结合能在剪切位点识别中的应用

把最大信息原理应用到核酸序列的保守位点分析中。利用最大信息原理,推导出了核酸和蛋白质特异性结合时的结合能表达式,并且估计了和蛋白质发生相互作用的核酸序列上的位点范围。为了检验此理论是否较为成功地反映了核酸和蛋白质结合时的实际情况,把它应用到基因内含子剪切位点的识别中,识别结果达到了较高的敏感性和特异性,这说明利用最大信息原理推导结合能表达式及估计核酸序列上参与反应的位点范围的理论是较为成功的。此研究结果一方面有助于核酸和蛋白质相互作用的理解,另一方面,也有助于和蛋白质发生相互作用的各种核酸序列的计算机识别研究。     

适配体结合蛋白质靶标的亲和力表征方法及其在疾病诊断中的应用

核酸适配体是通过体外指数富集配体系统进化（SELEX）技术筛选获得,并能够和蛋白质靶标高特异性、高亲和力结合的单链寡核苷酸。核酸适配体不但具有抗体的识别特性,而且具有自己独特的优良性能,目前已应用于分析检验、食品安全和生物医药等各个领域。蛋白质具有多种多样的生物功能以及临床诊断价值。因此,核酸适配体针对蛋白质靶标并在蛋白质相关的基础研究领域受到广泛的关注。核酸适配体应用性能的优劣取决于与其靶标蛋白质的亲和力与特异性。本文主要综述核酸适配体对蛋白质靶标的亲和力表征方法,以及在药物研发、肿瘤检测、生物成像以及生物传感器方面的应用。     

基于核酸侵入反应的生物分子检测技术的研究进展

核酸侵入反应是由5＇核酸内切酶或flap内切酶催化的,能够识别切割核酸片段形成的特异性结构的一类反应。近年来发展了很多基于该反应的生物大分子检测技术,能够对DNA、RNA、miRNA及蛋白质进行高灵敏、高特异性的测定。这些技术大都无需扩增待测靶标,极大地降低了扩增产物交叉污染的风险,在临床检测中具有很大的应用前景。本文对这些检测技术的原理及应用作简要综述。     

基于核酸侵入反应的生物分子检测技术的研究进展

核酸侵入反应是由5’核酸内切酶或flap内切酶催化的,能够识别切割核酸片段形成的特异性结构的一类反应。近年来发展了很多基于该反应的生物大分子检测技术,能够对DNA、RNA、miRNA及蛋白质进行高灵敏、高特异性的测定。这些技术大都无需扩增待测靶标,极大地降低了扩增产物交叉污染的风险,在临床检测中具有很大的应用前景。本文对这些检测技术的原理及应用作简要综述。     

不同阶段乙型流行性感冒病毒核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳图

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),比较了7株不同阶段乙型流感病毒代表株的核酸电泳迁移率,发现不同阶段毒株的PAGE基因图是不同的。这种差别与乙型流感病毒血清学的结果基本相符。     

前列腺癌潜在的标志物PAGE4/CT16.7

前列腺癌相关基因4(prostate-associated gene 4,PAGE4)是癌-睾丸抗原家族成员之一,具有在生殖系统组织中表达,而在非生殖系统组织中几乎不表达的特性。目前已发现前列腺癌患者可引起PAGE4的细胞免疫反应,前列腺炎患者血清中可检测到PAGE4蛋白。因此PAGE4有望成为前列腺癌免疫治疗潜在靶点及前列腺疾病筛查的又一新的血清标志物。对PAGE4基因及蛋白质的结构特点、表达特性、抗原肽筛选和生物学功能等方面进行综述。     

女贞的一种小分子闭环RNA

女贞(Ligustrum Cornpactum)叶片的核酸提取物,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),出现两条低分子量的核酸带,DNase 1及RNase A处理证实两条核酸带均为RNA,初步测得迁移率较小的RNA的分子量约为0.7×10~5道尔顿,5＇末端标记,双相及双方向PAGE分析证实,该RNA是存在于女贞叶片细胞内的一种小分子闭环RNA(简称psc RNA),不同离子强度下的RNase A处理揭示,psc RNA分子内有大量碱基互补结构,从点杂交结果推断psc RNA的一级结构中,不含绝大多数闭环类病毒RNA所共同具有的中心保守区段,在本实验的条件下pscRNA不能感染爪哇三七,女贞叶片汁液和按照提取,纯化病毒粒子的程序制备的溶液。在电镜下均没有观察到病毒颗粒,结果表明,女贞叶片细胞中存在一种无蛋白质外壳包被的、具有次量分子内碱基互辅结构的共价闭合环状RNA分子,在其它两种植物中,亦初步检测到此类闭环RNA分子,讨论了此种闭环RNA分子的意义。     

轮状病毒肠炎的快速诊断：PAGE检测方法的改良

应用PAGE技术对轮状病毒肠炎进行实验诊断研究,同时对PAGE检测方法、实验条件进行了摸索加以改进。作者采用加大电流、提高电压、缩短电泳、固定、染色时间等方法,使实验全过程减少到2h左右。改良法与常规法比较,在敏感性、特异性、重复性方面均无差异.但实际工作中改良法更具有需时短、快速,方法更简便,核酸损失小等优点,从而为本病毒感染提供了理想的快速诊断方法,造宜于各基层医疗单位应用。     

核酸条形码技术：扩展蛋白质-蛋白质相互作用检测通量的新方法

蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)几乎参与了机体内所有重要的生物学过程,在细胞的基本生命过程中扮演了至关重要的角色,开发高通量的PPI检测新方法具有重要的生物学意义。目前,下一代测序技术(next-generation sequencing, NGS)发展快速,能在几天内测定超过10亿个模板的DNA序列。由于并行DNA测序技术所特有的敏感性、特异性、高通量和多路复用优势,其已被用作广谱分子计数器,应用于基因组测序和转录物组测序等领域。核酸条形码技术通过将寡核苷酸标签与目标蛋白质连接起来,从而标记编码蛋白质。之后,利用高通量的测序方法检测相互作用的蛋白质,实现了PPI的高通量检测。这一技术推动了PPI检测方法的飞速发展,提升了单次实验检测的通量,为构建PPI网络提供了强有力的技术支持。本文详细阐述了核酸条形码在PPI检测方法中的设计、生成和读取;通过分析核酸条形码技术在PPI研究中的应用范例,探讨了各自的优势和不足,并评估了数据的可靠性,讨论了基于核酸条形码技术的PPI检测方法未来的发展趋势。     

亲和层析法分离鉴定人类端粒酶复合体及其蛋白质组分分析

为分离纯化人类端粒酶复合体并对其蛋白质组分进行分析 ,自行设计一套特异的以端粒重复序列为配体 ,以亲和磁珠为介质 ,以竞争性碱基序列为洗脱原则的寡核苷酸亲和纯化法 ,对He La细胞端粒酶复合体进行分离纯化 .并采用近年发展起来的主要用于检测序列特异性 DNA结合蛋白的凝胶迁移阻滞分析法对纯化产物进行鉴定分析 .应用 SDS- PAGE对纯化蛋白质亚基组分进行分析与鉴定 ,并采用电泳迁移率和已知蛋白质分子质量标准的对数作图分析测得所得蛋白质亚基成分的相对分子质量 .结果表明 ,纯化产物以 TRAP法检测酶活性可见典型的梯形条带 ;比活性为每 mg蛋白质的 cpm值为 1 80× 1 0 9,纯化倍数 1 80 0 ,得率 90 % .凝胶迁移阻滞法分析显示特异的凝胶迁移阻滞性电泳条带 ;以 SDS- PAGE检测得到 4种蛋白质亚基成分 ,其蛋白质相对分子质量分别为 2 2 0 ku、2 1 2 ku、1 1 6ku和 43ku.由上述可见 ,采用自行设计的寡核苷酸亲和纯化法获得了人端粒酶复合体及 4种蛋白质亚基组分 .     

纳米生物条形码技术在分子诊断中的应用

纳米生物条形码技术是一种新型的分子诊断技术,在核酸和蛋白质检测领域已经分别达到和超过现今的检测灵敏度.该技术采用纳米颗粒修饰的核酸或抗体对靶分子进行识别,并利用磁场将其分离,操作简单,不依赖酶反应,具有广泛的应用前景.该技术在病毒DNA、癌症的指标蛋白质等方面的应用已有文献报道,并有望成为一种常规的分子诊断工具.     

外源DNA导入烟草后D1代植株的蛋白质电泳分析

检测使用花粉管通道技术向受体烟草NC89导入供体烟草CV87的总DNA后,得到的D1代植株及其亲本蛋白质的PNGE和SDS—PAGE的结果显示,供体、受体及D1代个体在SDS和SDS—PAGE的谱带上存在多态性。供体有特征谱带,DZ9811和QD9812等个体表现了供体的特征谱带。     

三种革螨的蛋白质,糖蛋白,脂蛋白的比较研究

应用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳(PAGE)对3种革螨的蛋白质、糖蛋白和脂蛋白进行了检测。其中蛋白质尚首次采用SDS-PAGE进行分析。PAGE检测结果显示:格氏血厉螨可见15条蛋白带,4条糖蛋白带,4条脂蛋白带;溜下盾螨呈现15条蛋白带,5条糖蛋白带,5条脂蛋白带;鼠颚毛厉螨出现11条蛋白带,2条糖蛋白带和2条脂蛋白带。SDS-PAGE分析上述3种革螨分别显示出25、23、23条蛋白带。3种革螨的蛋白区带及Rf值均有明显的差别,糖蛋白、脂蛋白的电泳谱带也各异。     

生物条形码检测技术及其研究进展

生物条形码检测技术是利用磁场作用收集"金纳米颗粒-被检物-磁性微球"复合物,再释放其中的条形码链,然后可选用多种方法对条形码链进行下一步检测。生物条形码检测技术在蛋白质及核酸的检测方面显示出极高的灵敏度,在不依赖酶反应的情况下,检测蛋白质可以达到10-18mol水平,同时在核酸检测方面也能达到PCR反应的灵敏度。该技术是一种新型的诊断技术,在临床诊断方面有着广泛的应用前景。     

蛋白质- 核酸对接方法研究进展

分子对接技术作为预测蛋白质-核酸复合物结构的有效方法,为研究在生物学过程中蛋白质-核酸的相互作用提供了重要的工具。本文首先分析了当前蛋白质-核酸对接研究中的主要困难,例如构象变化和核糖磷酸骨架的带电性问题。然后从构象搜索、打分函数、柔性策略三个方面比较和总结了蛋白质-核酸对接中主要的计算方法。最后回顾了蛋白质-核酸对接计算模型的应用,并对未来的工作进行了展望。     

悬浮芯片在核酸和蛋白质检测中的应用

悬浮芯片是近年来兴起的一种新型检测技术,不同于固相基因芯片,它整合了高分子化学、分子生物学、免疫学、激光检测、微流体、高速数字信号处理、计算机分析等方面的先进技术,能够对少量样本进行高通量的定性、定量检测。主要综述了悬浮芯片技术的基本原理,并概要介绍了其在核酸和蛋白质检测中的应用。悬浮芯片技术在核酸和蛋白质检测中有着显著的优点,如高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等,不但可以广泛应用于科学研究领域,而且还将逐渐普及于临床诊断实验室,具有广阔的应用前景。     

纳米磁性液体的性质、制备方法及其在生物医药中的应用进展

纳米磁性液体是一种新型的功能材料,其在蛋白质、核酸分离纯化、微生物检测、基因治疗等方面有着广泛的应用前景。磁性纳米材料现已广泛应用于我们生产生活中的各个领域,其应用可谓包罗万象,它在旋转轴动态密封、扬声器制作、阻尼器件制造、选矿分离、治疗癌症、精密研磨和抛光等方面具有极大的价值。本文对纳米磁性液体的性质和制备进行了简介,并详细介绍了其功能及其在蛋白质、核酸分离纯化和在细胞分离、微生物检测、基因治疗方面的应用。并对其发展前景进行了展望。     

研究核酸-蛋白质系统的-种凝胶电泳方法

核酸蛋白质相互作用是生命科学研究的中心课题之一,凝胶电泳是研究核酸和蛋白质的常用技术。本文试图介绍一种研究核酸-蛋白质系统的凝胶电泳方法,以及该法在研究基因表达、调控和鉴定、分离DNA结合蛋白中的应用。     

滚环扩增技术的原理及其应用的研究

滚环扩增是近年来发展起来的一种恒温核酸扩增方法。这种方法不仅可以直接扩增DNA和RNA,还可以实现对靶核酸的信号放大,灵敏度达到一个拷贝的核酸分子,因此,RCA技术在全基因组扩增、单核苷酸多态性、DNA芯片、蛋白质芯片等方面检测中具有很大的应用价值和潜力。