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相似文献
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1.
曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒(HBV)变异株,其HBsAg主蛋白aa126发生Ile(ATT)到Ser(AGT)的取代。已知adr/ayr亚型HBsAg126位为Ile,而adw/ayw亚型HBsAg126位为Thr,表明HBsAg126Ser是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体HBsAg126Ser主蛋白aa120-aa130区段的二级结构与野生型adrHBVHBsAg126Ile相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响a抗原决定簇(a124-aa147)的抗原性。为了证实这一点,构建了突变S基因表达质粒,在SV40早期启动子的控制下进行抗原表达。利用HBsAg9肽(Thr-Ile126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗i单克隆抗体和9肽(Thr-Thr126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗t单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ser126突变蛋白对抗i单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗t单克隆抗体的反应性则与HBsAg126Thr接近。但用三种抗-a单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白HBsAg126  相似文献   

2.
为了阐明牛凝乳酶的第二个发夹结构中的Ⅵ型β-转角的功能,利用基因突变技术,将该转角的氨基酸残基(Leu20-Gly21-The22-Pro23-Pro24-Gln25)改为(Leu20-Gly-Gly-Gln25)、(Leu20SerGlyGln25)或(Leu20GlySerGln25),得到3个突变牛凝乳酶原表达质粒Pmcgg,Pmcsg和Pmcgs。除Pmcgs不能在大肠杆菌中表达外,Pmcgg和Pmcsg均能以包含体的形式进行表达,且表达水平与野生型相当。像野生型凝乳酶原一样,Pmcgg和Pmcsg的表达产物经过变性复性,均能自活化为假凝乳酶,而且复性后的酶原突变体在DEAESepharose CL6B上的柱行为与野生型相类似,但突变体假凝乳酶的凝乳及水解酪蛋白活性均明显低于野生型。说明突变对酶原的折叠影响较小,但对酶的催化效率影响较大。  相似文献   

3.
p16抑癌基因定点突变及其在大肠杆菌中的表达与纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
为了研究错义突变对p16功能的影响,应用PCR体外定点突变方法对p16cDNA进行体外定点突变,并将野生型和突变型p16cDNA克隆于pGEX-5T载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,Western印迹鉴定确证表达.而后用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析纯化野生型和突变型p16融合蛋白.得到了第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)突变的p16-P48突变体,并在大肠杆菌中表达了42kD的GST-p16和GST-p16P48L融合蛋白.最后经纯化得到了野生和P48L突变的p16融合蛋白  相似文献   

4.
王不留行环肽研究   总被引:9,自引:2,他引:7  
从中药王不留行(Vacariasegetalis)种子中分离并鉴定了4个环肽化合物,分别命名为王不留行环肽A,B,C,D(vaccarinsA,B,C,D),其中王不留行环肽A为新环肽化合物。其结构通过光谱和化学方法分别确定为:vaccarinA——cyclo-(Trp-Ala1-Gly-Val-Ala2),vaccarinB———cyclo-(Pro-Gly-Leu-Ser-Phe1-Ala-Phe2),vaccarinC———cyclo-(Pro1-Gly-Tyr-Val-Pro2-Leu-Trp),vacarinD———cyclo-(Pro-Val1-Trp-Ala-Gly-Val2).  相似文献   

5.
将猪骨胶原蛋白粗提物用胰蛋白酶水解,经阳离子交换树脂层析,SephadexG-25柱凝胶过滤,以及数次反相高效液相层析,最终获得一具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的单一峰值的多肽。其氨基酸组成为Ile,His,Ser,Gly,Ala,Pro,Tyr,Leu,Asp.以Hip-Gly-Gly为底物,在pH为7.1的条件下,此肽对猪肺ACE的I_(50)值为26μmol/L。  相似文献   

6.
从织锦芋螺中克隆α芋螺毒素序列   总被引:13,自引:0,他引:13  
为了从我国南海产织锦芋螺(Conustextile)中分离新的毒素序列并研究其应用价值,进行了织锦芋螺毒素基因的分离工作.从织锦芋螺毒管中提取mRNA,以A族芋螺毒素的信号肽编码部分和3′端非翻译部分的保守序列为引物,通过RT-PCR扩增和序列分析方法获得新的芋螺毒素序列.结果得到两种不同的α芋螺毒素序列,两者都属于α4/7亚型芋螺毒素,预测其成熟肽序列分别为Pro-Glu-Cys-Cys-Ser-Asp-Pro-Arg-Cys-Asn-Ser-Ser-His-Pro-Glu-Leu-Cys-Gly(C端Gly可能被酰胺化)和Pro-Glu-Cys-Cys-Ser-His-Pro-Ala-Cys-Asn-Val-Asp-His-Pro-Glu-Ile-Cys-Arg.采用传统的生化分离手段尚未从织锦芋螺中获得过α芋螺毒素序列,这两种α芋螺毒素作用的种属特异性、受体类型特异性和在小细胞肺癌的诊断和治疗中的应用价值有待进一步研究  相似文献   

7.
根据人白细胞介素-2(IL-2)α螺旋B中氨基酸残基的空间分布选择性地突变了一些氨基酸残基,结果发现:57Gln→Glu,62Glu→Leu,62Glu→Arg和65Pro→Arg这些替换均使IL-2活性显著降低或丧失,而63Leu→Ser或64Lys→Ala对IL-2活性影响不大。从受体竞争抑制结合实验结果可知,上述不表现活性的突变体也同时丧夫了与高亲和力受体的结合能力,这说明α螺旋B中这些位点  相似文献   

8.
蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建,表达及其活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过PCR定点突变的技术,将蛇毒蛋白Echistatin基因的C端进行了突变(Ala48→Arg48→,Thr49→Val49),模拟纤维蛋白N端的四肽(Gly-Pro-Arg-Val),以期增加Ecs(Echistatin)的活性,突变的基因重组到表达质粒pJC264上,经IPTG诱导,以CheY-Ecs融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的15 ̄20%,Sephadex G-75初步纯化  相似文献   

9.
将尿激酶原(pro-UK)cDNA和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)A链cDNA克隆到M13mp18中,经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到u-PA(Leu144-Gly408)/t-PA(Ser1-Thr263)(ut-PA)融合基因.将ut-PA融合基因克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCM-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞,筛选稳定表达株.收集无血清表达上清,经苯甲脒柱纯化得到ut-PA纯品,SDS-PAGE和纤维蛋白自显影显示ut-PA有两种分子量形式,分子量分别为68kD和61kD.纤维蛋白亲和性试验表明,LUK(低分子量尿激酶)对纤维蛋白没有亲和性,而含有LUK的ut-PA则对纤维蛋白表现出很强的亲和性,但ut-PA的亲和性略低于亲本t-PA.  相似文献   

10.
本文报道PHO2蛋白能被一种未知的蛋白激酶磷酸化PHO2蛋白的第230-233位氨基酸残基组成一个可能被p34相关的蛋白激酶识别的一致序列(SPIK),用点突变的方法将Ser-230变成Ala可导致PHO2蛋白激活PHO5表达能力的完全丧失。进一步的研究显示,将Pro-231突变成Ser同样可导致PHO2的矢活,而Ser-230突变成Asp则不影响PHO2的活力。由于PHO2(Asp-230)突变体通过在第230位残基引入了一个负电荷,可以看成Ser-230被磷酸化的状态,由此推测PHO2蛋白可能需要在Ser-230被磷酸化后才会具有激活PHO5基因转录的能力。体外磷酸化分析的结果表明,大肠杆菌表达的GSTI-PHO2(野生型)融合蛋白能够被酵母YPH499总蛋白抽提物磷酸化,如果以SPIK(230-233)一致序列被破坏的GST-PHO2(Pro-231→Ser)突变体作为底物,则观察不到该融合蛋白被酸磷化标记。结果表明PHO2在细胞内是一种磷骏化蛋白,第230位Ser的磷酸化是该转录因子较制PHO5基因表达的活性所必需。  相似文献   

11.
通过PCR定点突变的技术,将蛇毒蛋白Echistatin基因的C端进行了突变(Ala48→Arg48→,Thr49→Val49),模拟纤维蛋白N端的四肽(Gly-Pro-Arg-Val),以期增加Ecs(Echistatin)的活性。突变的基因重组到表达质粒pJC264上,经IPTG诱导,以CheY-Ecs融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的15~20%。SephadexG-75初步纯化该融合蛋白,然后用CNBr裂解,透析,冻干,反相HPLC纯化C端突变体Ecs蛇毒蛋白,N端十个氨基酸分析与天然的相符,在PRP(platelet-richplasma)测活体系中,10μmol/L的ADP诱导,C端突变体Ecs抑制血小板凝聚的活性约为野生型4倍。得到了Ecs的C端突变后使Ecs抑制血小板凝聚的活性提高的结果。  相似文献   

12.
根据人白细胞介素-2(IL-2)a螺旋B中氨基酸残基的空间分布选择性地突变了一些氨基酸残基,结果发现.57Gln→Gln,62Gln→Leu,62Gln→Arg和65Pro→Arg这些替换均使IL-2活性显著降低或丧失,而63Leu→Ser或64Lys→Ala对IL-2活性影响不大。从受体竞争抑制结合实验结果可知,上述不表现活性的突变体也同时丧失了与高亲和力受体的结合能力,这说明α螺旋B中这些位点对IL-2与受体结合有贡献,事实上,那些直接与受体β、γ亚基结合的残基所在螺旋为A、D螺旋而非α螺旋B,由此我们认为α螺旋B虽不直接参与与受体β、γ亚基结合,但它在空间结构上对IL-2与受体β、γ亚基的结合产生了有利的影响,而57Gln、62Gln、65Pro等残基则在此过程中发挥重要作用。  相似文献   

13.
少棘巨蜈蚣(ScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch)经95%乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过SephadexG-25柱,等电聚焦制备电泳,再经SephadexG-150柱,SephadexG-100柱,最后经HPLC制备得到一个纯的碱性蛋白,命名为SSmp-d.该蛋白经HPLC、超薄等电聚焦电泳检验是均一的.采用HPLC和Protein-PakTM125柱测定其分子量为24.64kD.IEF-HPCE显示其等电点为9.27.氨基酸分析表明SSmp-d含较多的Arg、Lys等碱性氨基酸,另外还含有较多的Ala、Leu.使用蛋白质自动序列分析仪测定了SSmp-dN端的11个氨基酸,序列为NH3+-Asp-Val-Asn-Phe-Arg-Leu-Ser-Gly-Ala-Asp-Pro.  相似文献   

14.
凤眼莲(Eichhorniacrassipes)的根分泌物中含有Met等多种氨基酸,其中Met、GABA、Gly、Ala、Asp、Ser、Val和Leu(10-7~10-2mol·L-1)均对凤眼莲的根际肠杆菌属F2(Enterobactersp.F2)细菌有强烈的正趋化作用;Glu、Thr和His(10-7~10-3mol·L-1)也对该菌有一定的正趋化作用;而Lys、Cys、Arg、Tyr、Pro、Asn、Gln、Ile、Phe和Typ则对该菌表现出一定的负趋化作用.对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围.具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高,而具有负趋化作用的浓度则较低,这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一.  相似文献   

15.
彭天剑  郭礼和 《遗传学报》1994,21(2):155-160
本研究用缺口以链法对肠杆菌青霉素G酰化酶(PGA)基因Ser177进行寡核苷酸定点突变。通过NIPAB(2-硝基-5-苯乙酰胺苯甲酸)试纸法筛选和测序鉴定,获得突变体Cys177,Gly177,Arg177和Asn177。它们的PGA活性均已丧失。酶蛋白电泳分析表明突变体蛋白在体内正常表达。推测PGA Ser177秀可能位于酶底物结合中心,是酶活性所必需,不能被置换。  相似文献   

16.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。  相似文献   

17.
杨永平  江永珍 《病毒学报》1994,10(3):229-234
通过逆转录-聚合酶链式反应,从中国人丙型肝炎病毒携带者的血清中扩增并克隆到2段cDNA片段,即HCV基因组C区抗原基因C831cDNA片断和NS3区抗原基因C33cDNA片段同C831cDNA片段经连接肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33cDNA片段同C831cDNA片段经连接肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33c-C831.C33c-C831基因嵌合体同温  相似文献   

18.
凝乳酶原(凝乳酶)二硫键Cys206—Cys210的定位突变   总被引:2,自引:0,他引:2  
在对凝乳酶原二硫键Cys206-Cys210进行定位突变过程中发现,在相应的模板序列中有自身形成自由能为-16.1kcal/mol的茎环结构倾向,妨碍与引物结合,从而难以合成突变的DNA,采用快退火可解决此矛盾。5个突变基因均能在大肠杆菌中高效表达,除C206A外,约占细胞总蛋白的50%左右,突变的复性结果表明,Cys206-Cys210对凝乳酶原正确折叠不是绝对必需的,但相应位置的氨基酸取代对复性效率有显著影响,在5个突变体中,C206A/C210A的复性率分别为C206S/C210S、C210A、C210S的4.5倍、20倍和30倍,而C206A不能复性。C206A/C210A与C206S/C210S的远紫外CD光谱与野生型基本相同,其荧光发射光谱与野生型相比最大发射峰不变,而荧光强度有显著增加由于上述3个蛋白具有相同比活,说明突变分子能形成具有生物活性的空间构象,而只是某些色氨酸残基微环境受到微扰。  相似文献   

19.
瓦草中三个新环肽   总被引:10,自引:3,他引:7  
从云南民间中草药瓦草(Sileneszechuensis)的根中分离鉴定了3个新的环肽,分别命名为瓦草环肽A,B,C(sileninsA,B,C)用光谱和化学方法确定它们均为环八肽,其结构分别为:sileniaA-cyclo-(Pro-Leu-Ser-Phe-Pro-Tyr-Leu-Val),sileninB--cyclo-(Phe-Leu-Ala-Pro-Leu-Pro-Phe-Pro),sil  相似文献   

20.
本文利用pAmy413质粒通过定点诱变技术,在α-淀粉酶基因的287和291位分别引入1个G和C,代替原来的T和G,构建成质粒pAmy413B,使成熟的α-淀粉酶N-端(7)Leu(8)Met变为(7)Arg(8)Ile。pAmy413Lα-淀粉酶信号序列因引入1个多酶切点接头而比pAmy413的29个氨基酸增加了13个氨基酸,创造了1个新的信号肽酶I识别窗口Ala-Gln-Ala↓Ser,利用计算机对该信号肽进行了二级结构分析。这两株突变株产酶能力分别为野生株(pAmy413)的3%和36%;胞外α-淀粉酶的分子量同于野生株;末端分析显示,成熟酶第一个氨基酸为Ala,表明信号肽酶I在野生型识别窗口Ala-Ala-Ala↓Ala处切割。结果还表明,B.licheniformisα-淀粉酶在B.subtilis中分泌作用属共翻译转移模型  相似文献   

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