鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响

目的：探讨鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响。方法：构建ODC反义RNA的真核表达质粒,将此质粒转染HepG2细胞后,RT-PCR和Western印迹法筛选ODC表达抑制的细胞株。以此细胞株为模型,分析ODC反义RNA对细胞生长、细胞周期和对抗癌药物米托蒽醌敏感性的影响。结果：成功构建ODC反义RNA真核表达载体并获得稳定低表达ODC的肝癌细胞株Hr1。与对照细胞相比,ODC低表达引起HepG2细胞生长抑制,72h生长抑制率为31%;流式细胞术检测细胞周期发现,Hr1G1期细胞数（56.2%）显著性高于对照（48.2%）,而S期细胞（25.5%）则显著性低于对照（34.9%）,提示ODC低表达导致G1期阻滞;用米托蒽醌（100μg/L）处理两种细胞后发现,Hr1对药物的敏感性显著性高于对照细胞,处理48h后药物对HepG2和Hr1的抑制率分别是33.4%和60.6%,72h后的抑制率分别是60.8%和83.8%。结论：ODC反义RNA能抑制肝癌HepG2细胞生长,在抗肿瘤治疗中具有潜在的临应用价值。     

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用

为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染滴度 ,再采用Western印迹和流式细胞术检测rAd ODC Ex3as对细胞中ODC表达的抑制作用、对细胞周期和凋亡的影响以及与CDK抑制物p2 1的关系 .实验显示 ,rAd ODC Ex3as分别以 5 0MOI、2 5MOI感染PC 3和LNCap细胞可明显抑制其生长增殖 ,而不引起细胞毒性作用 ;其对两种细胞中ODC表达的抑制作用分别为4 5 %和 5 9% .流式细胞DNA含量分析证实 ,rAd ODC Ex3as可引起PC 3和LNCap细胞周期G1期阻滞 ,但并未引起凋亡 .通过Western印迹发现 ,细胞中ODC表达的降低可诱导p2 1蛋白的过表达 .结果表明 ,rAd ODC Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达 ,并通过诱导p2 1的过表达使其细胞周期停于G1期 ,从而抑制前列腺癌细胞PC 3和LNCap的增殖 ,为其进一步基因治疗的研究打下基础 .     

垂体瘤转化基因1(PTTG1)的表达变化对人前列腺癌细胞LNCaP生长增殖的影响

垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)具有促进肿瘤生长和转移的作用.通过上调或下调基因表达的策略,观察PTTG1基因对人前列腺癌细胞株LNCaP细胞生长增殖的影响.利用PCR技术分离出PTTG1全长cDNA,分别正向和反向插入真核表达载体pIRES2-EGFP,重组载体分别命名为正义PTTG1-S/pIRES2-EGFP(即pI-P-S)和反义PTTG1-AS/pIRES2-EGFP(即pI-P-AS),将这两种重组载体稳定转染LNCaP细胞,通过流式细胞仪和MTT法分别检测了细胞周期和细胞增殖的情况.转染正义PTTG1后处于S期和G2期的细胞明显增加,细胞生长增殖能力增强;相反,转染反义PTTG1后处于S期和G2期细胞明显减少,细胞生长增殖能力减弱(P<0.05).结果表明,PTTG1能明显改变人前列腺癌细胞株LNCaP的细胞周期和细胞生长增殖能力,它的异常表达可能参与前列腺癌细胞生长增殖过程.     

尿激酶受体反义RNA抑制人乳腺癌细胞的侵袭作用

将尿激酶受体 u PAR反义 RNA表达质粒 p URAS以脂质体法转染高侵袭性人乳腺癌细胞株 MDA- MB- 2 31 ,G41 8筛选抗性克隆 .Northern印迹法检测 u PAR反义 RNA的表达 ,RT- PCR法检测 u PAR的表达 ,牛奶板法测定细胞培养上清中纤溶活性 .改良 Boyden小室模型和裸小鼠乳房脂肪垫接种试验分别检测肿瘤细胞体外和体内侵袭能力 .反义克隆细胞能表达 u PAR反义RNA,其 u PAR表达水平及培养上清中纤溶活性明显降低 .反义细胞克隆体外侵袭能力比原代细胞 MDA- MB- 2 31和转染载体细胞克隆显著降低 .裸小鼠体内侵袭实验表明 ,反义细胞克隆的成瘤性、生长性和侵袭性均显著受到抑制 .u PAR至少在一部分恶性乳腺癌侵袭行为中发挥重要作用 ,反义 RNA可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段 .     

反义RNA抑制存活素基因的表达对HeLa细胞的影响

为研究存活素（survivin)基因在肿瘤细胞中的应用,通过RT-PCR从HeLa细胞中克隆得到存活素cDNA的编码区,将其反向克隆到可诱导型表达载体pHC中,得到存活素反义RNA表达的载体pHSC,通过脂质体的介导,将pHSC导入HeLa细胞中,经C418（800nmol/L)筛选获得可以诱导表达存活素反义RNA的稳定细胞株HeLa-pHSC。获得的细胞株在2mmol/LZn^2 的诱导下,可以表达存活素反义RNA,从而抑制存活素基因的表达,此时HeLa细胞的增殖受到抑制,对化疗药物的敏感性增加,在G2/M期可以减缓细胞周期的进行性,这表明存活素对维持肿瘤细胞的增殖以及细胞周期的进行具有非常重要的作用。     

RAB5A蛋白G81R位点突变对其功能的影响

为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响,将RAB5A G81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3．1／V5-His TOPO真核表达载体,并转染到Anip973细胞。用Western blot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平,通过血清饥饿法使Anip973和转染后的细胞同步化,停滞于G0～G1期,再恢复血清培养使细胞从G0～G1期释放,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比。结果显示RAB5A G81R突变体的反义RNA可完全封闭Anip973细胞中RAB5A的表达,正常RAB5A反义RNA部分封闭RAB5A表达。并且,Anip973细胞周期的长短与RAB5A的表达程度成反比。RAB5A G81R反义RNA能够有效地阻断Anip973细胞中RAB5A蛋白的表达。阻断或降低RAB5A的表达可延长细胞周期。     

siRNA-cyclin D1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株cyclin D1表达的抑制及对细胞增殖的影响。化学合成针对cyclin D1基因的siRNA,转染MCF-7细胞株;分别应用荧光定量PCR和免疫印迹测定cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂培养检测细胞克隆形成能力。在实验中,10、50、100 nmol/L siRNA-cyclin D1分别使MCF-7细胞cyclin D1 mRNA表达降低了57．85%、63．22%和68．02%,蛋白表达降低了51．13%、62．09%、77．68%。转染siRNA-cyclin D1后,细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞于G1期,软琼脂克隆形成率降低。结果提示siRNA可以有效抑制MCF-7细胞株中cyclin D1的表达,使细胞周期阻滞于G1期,从而抑制细胞增殖。     

反义细胞周期蛋白E真核表达载体的构建及其对体外人乳腺癌细胞的抑制作用

 为了探讨细胞周期蛋白 E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性 ,利用反义 RNA抑制基因表达的技术 ,构建了细胞周期蛋白 E反义 RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中 .通过 G41 8筛选出阳性克隆 ,经 PCR和 Western印迹检测 ,确定细胞中含有重组质粒 ,并且细胞周期蛋白 E蛋白的水平明显降低 ,由此获得了反义 RNA表达载体导致的细胞周期蛋白 E表达受抑制的细胞 .细胞模型建立后 ,观察分析了细胞形态 ,细胞生长的血清依赖性以及软琼脂成集落能力 ,与对照细胞相比所发生的变化 .结果显示 ,细胞周期蛋白 E受抑制后 ,乳腺癌细胞体积变大 ,细胞生长对血清依赖性增加 ,低血清培养到第 6d时 ,细胞密度约为对照细胞的五分之一 ,细胞成集落能力也显著下降 ,软琼脂中克隆形成率下降 57% .这些变化都表明乳腺癌细胞恶性程度由于细胞周期蛋白 E表达受抑制而减弱 ,可以推测 cyclin E与乳腺癌细胞的恶性增殖及非锚定依赖性生长有着明显的关系 .     

miRNA-21反义核酸对人淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用研究

为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸（AMO-miR-21）对淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用,使用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染Raji细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR技术检测细胞miRNA-21水平改变;PI和Annexin V双染,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果显示转染Raji细胞48～72h,反义核酸组细胞生长受到明显抑制,反义核酸抑制细胞活性的最佳浓度是0.4μmol/L;细胞内miRNA-21的表达水平明显下调;细胞凋亡明显增加;此外,反义组细胞中抑癌基因Pdcd4的mRNA和蛋白质呈高水平表达.提示以miRNA-21为靶标的反义核酸是人淋巴瘤Raji细胞生长的有效抑制剂和凋亡诱导剂.miRNA-21可能是淋巴瘤治疗的潜在靶标,其通过下调抑癌基因Pdcd4的表达水平发挥抗肿瘤作用.     

STAT3反义核酸对HL-60细胞周期及c-myc mRNA表达的影响

实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组,转染后,应用四唑盐（MTT）比色法分析细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA和c-myc mRNA的表达。探讨STAT3反义寡核苷酸对白血病细胞HL-60细胞周期及c-myc的影响。STAT3 ASODN抑制HL-60细胞增殖呈时间和浓度依赖性;反义寡核苷酸作用后,G0/G1期细胞明显减少,S期细胞增多,细胞周期进程受到明显阻滞;反义寡核苷酸作用48h后细胞内STAT3mRNA及c-myc mRNA的表达水平下降,与各对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。STAT3 ASODN能够明显抑制HL-60细胞增殖,并能阻滞HL-60细胞于G0/G1期、并下调c-myc mRNA的表达。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

Analysis of mechanism of formation of epidemic variant of disease activator

Pre-epidemic circulation of a multivariate agent is simulated. An assumption on the possibility of forming a new variant as a combination of properties of circulating variants is examined.