限制性片段长度多态性（RFLPS）及其原因

DNA是绝大多数生物(RNA病毒除外)携带和传递遗传信息的复杂的生物聚合体。能被限制性核酸内切酶在特定的核苷酸顺序上切割,形成各种长度的DNA片段,通过电源能将这些片段分开。 生物个体间的差异,本质上是DNA水平上的差异。这是由于进化过程中染色体DNA上核苷酸顺序发生了改变,当这种改变涉及到限制性酶切位点时,酶切后产生的DNA片段长度     

山羊品种间线粒体DNA限制性片段长度多态性研究

本试验利用ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｃｌⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨａｅⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ计１８种限制性内切酶,研究了来自欧洲,非洲及国内的５个山羊品种共计３３只个体的ｍｔＤＮＡ,共检测了２７处限制性态型,可归结为８种单倍型。结果表明,国内２个百品种的基本单倍型为ＢａｍＨⅠ－Ａ,ＢｃｌⅠ－Ｂ、ＣｌａⅠ－Ａ     

香菇135菌株特异SCAR标记在其原生质体单核中的分布

以香菇保藏菌种庆元135以及庆元出菇的135新鲜子实体组织分离得到的菌丝为材料制备原生质体,分别获得58和83个原生质体单核体;经交配型鉴定后,用已获得的135特异SCAR引物对单核进行PCR扩增,统计SCAR条带的分布。结果显示：原生质体单核体分为A1B1和A2B2两种交配型,而特异条带仅存在于后者中,证明135特异SCAR标记是稳定遗传的,也为鉴定以带标记核为亲本之一的杂交后代提供了依据,这就进一步拓宽了分子标记应用于菌株鉴定的适用范围。     

香菇135菌株特异SCAR标记在其原生质体单核中的分布

以香菇保藏菌种庆元135以及庆元出菇的135新鲜子实体组织分离得到的菌丝为材料制备原生质体,分别获得58和83个原生质体单核体;经交配型鉴定后,用已获得的135特异SCAR引物对单核进行PCR扩增,统计SCAR条带的分布。结果显示：原生质体单核体分为A1B1和A2B2两种交配型,而特异条带仅存在于后者中,证明135特异SCAR标记是稳定遗传的,也为鉴定以带标记核为亲本之一的杂交后代提供了依据,这就进一步拓宽了分子标记应用于菌株鉴定的适用范围。     

香菇135菌株特异SCAR标记在其原生质体单核中的分布

以香菇保藏菌种庆元135以及庆元出菇的135新鲜子实体组织分离得到的菌丝为材料制备原生质体,分别获得58和83个原生质体单核体;经交配型鉴定后,用已获得的135特异SCAR引物对单核进行PCR扩增,统计SCAR条带的分布。结果显示:原生质体单核体分为A1B1和A2B2两种交配型,而特异条带仅存在于后者中,证明135特异SCAR标记是稳定遗传的,也为鉴定以带标记核为亲本之一的杂交后代提供了依据,这就进一步拓宽了分子标记应用于菌株鉴定的适用范围。     

黑叶猴和灰叶猴的线粒体DNA限制性片段长度多态研究

本文以15种限制性内切酶分析黑叶猴和灰叶猴种内及种间mtDNA多态。从各个样品中分别检出了41—50个酶切位点。综合15种限制内酶的酶切类型,在2只黑叶猴和2只灰叶猴中分别检出了两种限制性类型,并与其4个地理来源相对应。结合恒河猴和红面猴的资料,构建了4种猴科动物的分子系统树。结果表明,黑叶猴和灰叶猴种内的分歧分别始于30和35万年以前,两种叶猴的分离始于190万年以前,猴亚科和疣猴亚科的分离应早于1100万年。叶猴属在中国的扩散不是很晚才发生的。     

影响籼稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青（籼稻）和京系１７（粳稻）的ＲＦＬＰ进行了系统分析。结果表明，某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关（ｒ＝０．９６２＊＊）。由此推论，籼粳稻大部分ＲＦＬＰ可能来自大范围ＤＮＡ的结构变化而不是碱基取代。ｃＤＮＡ克隆虽然具有高度的保守性，但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内，探针长度和检测到多态性无相关性。由探针检测到的多态性位     

荧光标记香菇原生质体融合菌株的鉴定

以异硫氰基荧光素（FITC）标记和香菇单核L4菌株的原生质体和未经标记的香菇单核B14菌株的原生质体为亲本,在聚乙二醇（PEG）的促融下进行融合,选取一个带有荧光,另一个不带荧光的原生质体粘合对进行再生培养,通过对利用“锁状联合”筛选得到的菌株进行鉴定后表明：融合菌株为双核菌丝,与双亲产生明显拮抗,其酯酶同工酶及可溶性蛋白质凝胶电泳图谱分析表明融合菌株均与双亲有区别,经琼脂平板快速出菇及出菇实验证明融合菌株出菇早,产量有所提高。     

多个遗传标记情形下的RFLP的可诊断率估计

限制性酶切片段长度多态性(RFLP)作为共显性的遗传标记,已广泛应用于遗传病的产前诊断。为评价各遗传标记的适用性,本文给出了在多个遗传标记情形下的RFLP的可诊断率的估计方法,即在使用若干个遗传标记时,群体中可被诊断后代罹病与否的婚配类型的比例的估计方法,包括致病基因为常染色体显性、常染色体隐性、X连锁显性和X连锁隐性的情况,并认为增加遗传标记的个数和选择具较多等位基因的遗传标记,是提高产前诊断可诊断率的有效途径。同时,根据各遗传标记在群体中的多态性分布,可估计各遗传标记及其各种不同组合的可诊断率,以此选择在该群体中最为适合的遗传标记或其组合,以指导RFLP在产前诊断中的应用。     

影响籼粳稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青(籼稻)和京系17(梗稻)的RFLP进行了系统分析。结果表明,某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关(r=0.962**)。由此推论,籼粳稻大部分RFLP可能来自大范围DNA的结构变化而不是碱基取代。cDNA克隆虽然具有高度的保守性,但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内,探针长度和检测到的多态性无相关性。由探针检测到的多态性位点均匀地散布在水稻的12对染色体上,这可能是这两个品种所属的亚种之间的遗传距离较大的原因。     

小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)

应用一对寡核苷酸引物ITS1与ITS4对核DNAG＋C百分数小于30％的小克银汉霉（Cunninghamella）属的核糖体DNA（rDNA）内转录间区（YTS）进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为;第一组4种1变种,小于764碱基对（bp）;第二组2种,765～824bp;第三组2种1变种,大于825bp。所研究的许多种中,特别是第三组,单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI,TaqI;Tru9I,和HinfI4种限制性内切酶,对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克银汉霉（Celegans）、巴西玉蕊小克银汉霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各种的限制性酶切图谱,种内非常一致而种与种之间有差别。反之,在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同,在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下,只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR－RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义,并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。     

S-PI对香菇酸性蛋白酶的抑制机理及其促进出菇的生化解释

S-PI对纯化的香菇酸性蛋白酶具有强烈的抑制作用,10μmol／L的S-PI可使酶活降低77％,这种抑制属于可逆竞争抛物线型抑制。经25μmol／L酸性蛋白酶水解6小时后,香菇胞外酸性磷酸酶的活性从24．6单位降低到20．8单位,同时C1酶和Cx酶的活性分别比对照降低了76％和58％,这表明香菇酸性蛋白酶不仅直接左右着香菇发育的氮代谢,同时也间接地影响着碳代谢及能量转换。     

小鼠DNA的限制性片段长度多态性分析

用人类肌红蛋白基因内含子中３３ｂｐ的小卫星ＤＮＡ重复序列为探针,经ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲ Ｉ正向测序引物和α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ在Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶作用下做合成标记,与６种小鼠的ＤＮＡ限制性片段杂交。结果显示,每个品系平均出现可分辨带纹在１３条以上,不同品系小鼠间的杂交带纹表现出高度的多态性。多态性带纹主要分布在６￣２３ｋｂ区段;同一近交系的不同个体间的带纹特点及分布完全一致;ＣＳ７与ＡＫＲ及二者     

中国脊髓灰质炎Ⅰ型野毒株的PCR－RFLP法分析

近年来我国流行地区分离的脊髓灰质炎病毒多为Ⅰ型野毒。本文报导对我国一些省、自治区防疫站从急性驰缓性麻痹病人粪便中分离的７７株Ⅰ型野毒株,经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法分析结果,发现不同地区分离的野毒株在电泳图像上有明显差异。根据电泳图像所显示的三种酶切条带的数目,可分为１４个类型,而且同一省、自治区内不同地区（如新疆）,或同一地区不同年份（如广东）的毒株也存在着明显差异。但在某些相邻省份如广东省与海南省,９２年流行毒株电泳图像完全一致。说明本法虽不如核酸序列分析精确,但在一定程度上也能反映毒株间的差异,有助于说明流行株的亲疏关系,可用于研究毒株的分子流行病学。     

正常中国人和DMD患者X染色体Xp~(21)区的RFLP研究

本文应用从人类X柒色体Xp~(21)区不同部位分离得到的9种DNA探针,分析了100名正常中国人,38名DMD患者及其母亲X柒色体Xp~(21)区的14个限制性位点多态性(RSP;又称限制性片段长度多态性,RFLP)。发现正常的X染色体与携带DMD基因的X染色体Xp~(21)区的RFLP频率没有明显差别;在38例DMD患者中有7例的X染色体有DNA片段缺失;在本文分析的24例患者母杀中有17例是DMD基因携带者,她们在Xp~(21)区的RFLP均存在杂合的多态性,因此可以应用RFLP连锁分析对这些家系进行DMD的产前诊断。     

香菇栽培种线粒体DNA和核糖体DNA多态性研究初探

本文应用RFLP技术研究了10个香菇主栽品种的线粒体DNA（mtDNA）和核糖体DNA（rDNA）的部分小区段,利用PCR技术扩增了rDNA5．8＋ITS区段及mtDNA的小区段,分析这些片段的限制性酸切图谱,并进行菌株间的遗传相似系数的估算。结果显示：菌株间的rDNA在5．8＋ITS区段差异很小,表明同一种内菌株间的rDNA具有相对的遗传稳定性;不同菌株间未检出mtDNA的差异,表明菌株间在所研究的区段具有很高的遗传相似性。     

营养条件对香菇生长发育的影响

本文报道香菇(Lentinus edodes)营养生长和生殖生长阶段对营养条件的要求。在基本培养基上添加0.2％水解乳蛋白和1毫克/升6-BA的结果,提高了菌丝体的生长速度和干重。单加6-BA的培养基上,菌落的生长比单加β-蜕皮激素的效果好。在低营养水平的木屑菌砖上追加2ppm 6-BA和3％葡萄糖液,促进了原基的分化和子实体的形成。在菇蕾基部追加不同比例的碳、氮溶液,鲜菇的重量增加,加C/N=30:1的营养液,菇的鲜重比对照提高73％。     

幽门螺杆菌hpaA基因RFLP研究

用限制性片段长度多态性(RFLP)的方法评价幽门螺杆菌不同菌株鞭毛粘附素基因(hpaA)的变异性。PCR扩增9株幽门螺杆菌710bp的hpaA基因,用Hha Ⅰ、HaeⅢ限制性内切酶对该基因片段进行酶切分析。hpaA基因HaeⅢ单酶切可见4种带型,HhaⅠ单酶切出现5种带型。从临床分离的H.pylori菌株hpaA RFLP互有差异,且不同于国际标准菌株;临床分离株感染动物后分离得到的动物适应株其hpaA基因也发生了变异。不同H.pylori菌株间hpaA基因表现出明显的多态性,为开展H.pylori的分子流行病学调查提供了一种有效的方法。     

用RT-PCR和RFLP对禽传染性支气管炎病毒中国分离株的分型

用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准毒株Ｍ４１、Ｈ５２、Ａ５９６８和国内分离株Ｄ４１、Ｆ、Ｇ的Ｓ１基因,对它们做ＲＦＬＰ分析,发现Ｄ４１、Ｆ株属于马萨诸塞血清型、Ｇ株为变异株。对用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ来区分ＩＢＶ的分型方法的应用理论和前景进行了论述。