一种快速鉴定猪肺炎支原体免疫显性蛋白抗原的ELISA方法的建立

旨在建立一种快速鉴定猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)血清体液免疫显性蛋白抗原的方法。通过构建p GEX-6P-1-mhp366重组表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3),将GST-Mhp366重组蛋白进行原核表达。将GST-Mhp366重组菌和GST工程菌裂解液加入谷胱甘肽包被板进行抗原包被,分别与17份Mhp阳性血清和13份Mhp阴性血清反应,通过对抗原包被量、封闭液、血清和二抗稀释度的优化,确定间接ELISA的反应条件。最终确定GST-Mhp366重组菌和GST工程菌裂解液原液为抗原的最佳包被量,PBS+10%FBS+2.5%脱脂奶粉为最佳封闭液,分别将血清按照1∶500稀释、酶标二抗按照1∶40 000稀释作为最佳工作浓度,从而建立了一种基于间接ELISA的快速鉴定Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原的方法,同时通过已知的血清体液免疫显性蛋白Mhp156和Mhp364对所建立的方法进行了验证。该方法的建立能够用于在基因组水平高通量筛选Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原,并为Mhp初乳体液免疫和黏膜免疫显性蛋白抗原鉴定方法的建立奠定基础。     

Hg2+、Pd2+、Cd2+和Cu2+对沼泽红假单胞菌生长及净化氮、磷能力的影响

研究了在培养基中分别添加不同浓度的重金属离子Hg2+、Pd2+、Cd2+和Cu2+作为人工配制的污水对光合细菌沼泽红假单胞菌生长与净化PO4-P和NH4-N能力的影响.实验结果表明当培养基中Hg2+的浓度达到2×10-6mol@L-1,该菌生长趋势开始减慢;当增至4×10-6mol@L-1时,生长完全被抑制.Cu2+的浓度达到1×10-6mol@L-1,该菌生长趋势也开始减慢;当增至8×10-6mol@L-1时生长完全被抑制.Cd2+的浓度达4×10-5mol@L-1时,其延缓期大大延长;增至16×10-5mol@L-4时生长完全被抑制.培养基中Pd2+的浓度达到8×10-4mol@L-1时,对该菌生长并未产生影响.当培养基中重金属离子浓度未达到完全抑制其生长时,对其净化PO4-P和NH4-N能力的影响不显著.     

血清中WBC、CRP和PCT检测对细菌性肺炎的临床价值

目的 探讨血清白细胞计数（WBC）、C-反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）对细菌性肺炎的临床价值。方法 本院2015年5月—2017年9月收治肺炎患者160例,其中包括细菌性肺炎100例,非细菌性肺炎60例,选择同时期健康体检者60例,作为对照组,分别测定WBC、CRP、PCT的水平,同时比较细菌性肺炎患者预后不同指标的差异。结果 与对照组比较,细菌性肺炎组和非细菌性肺炎组WBC、CRP和PCT这三项水平均升高（Ps<0.05）,且细菌性肺炎组这三项指标水平均显著高于非细菌性肺炎组（Ps<0.05）。在细菌性肺炎组中,死亡者的这三项指标均明显高于存活者（Ps<0.05）。在单项检测中,PCT敏感性和特异性最高,WBC最低（Ps<0.05）;三项联合检测敏感性和特异性高于单项检测（Ps<0.05）。结论 血清中WBC、CRP和PCT这三项指标对细菌性肺炎的诊断和预后有一定评估价值。     

浦乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S＋PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞（转基因GdSS1-18细胞系）分泌的乙型肝炎（乙肝）病毒表面S＋PreS1融合抗原（SS1）纯品的理化及生物学性状,结果表明,经HPLC柱层近呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS－PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝扫描分析其各条带分别各占22．3％,77．7％、0％、Western blot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明,S、PreS1是特异性条带;N－末端的氨基酸序列和与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明：与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。     

结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达

CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGH pA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGH pA,使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK 293T细胞中进行体外表达实验,48 h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Western blotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK 293T中得到表达,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。     

CD15s抗原、CD44v6和E-上皮钙粘附素表达与胆管癌生物学行为的关系

目的　探讨CD15s抗原、CD44v6和E 上皮钙粘附素 (E cadherin ,ED)表达与胆管癌生物学行为的关系。方法　应用催化信号放大免疫组织化学方法 ,检测 43例胆管癌组织中CD15s抗原、CD44v6和ED表达 ,综合分析了CD15s抗原、CD44v6和ED蛋白表达与胆管癌临床病理因素间的关系。结果　在胆管癌组织中 ,CD15s抗原、CD44v6和ED表达阳性率分别为 6 7 4%、 6 2 8%和 5 3 5 %。CD15s抗原和CD44v6呈高表达及ED呈低表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移密切相关 (P <0 0 5 )。CD15s表达与CD44v6表达呈正相关 (r =0 49,P <0 0 0 1) ;CD15s抗原和CD44v6表达与ED表达呈负相关 (r =- 0 45 ,r=- 0 5 2 ,P <0 0 0 1)。结论　CD15s抗原、CD44v6和ED异常表达提示胆管癌生物学行为不良。