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1.
表达核糖核酸酶基因的雄性不育油菜的获得 总被引:25,自引:1,他引:25
从细菌Bacillusamyloliquefaciens染色体DNA中克隆了RNase(barnase)基因,构建了TA-29基因5'调控区(-1300-+3)与barnase基因的嵌合基因,通过农杆菌介导的遗传转化,获得了“双低”甘蓝型油菜“中双821”的转基因植株。转化植株与末转化植株在高度、生长速度、花器形态、花色等方面基本相同,但转化植株花丝短小、花药干瘪、没有花粉;自花授粉或以其为父本进行的异花授粉均不能结实,表现为完全的雄性不育。花药的横向解剖结构表明:转基因油菜雄性不育与绒毡层细胞的破坏有关 相似文献
2.
表达barstar基因及bar基因的转基因油菜的研究 总被引:30,自引:0,他引:30
从细菌Bacilusamyloliquefaciens染色体DNA中克隆了barnase抑制剂barstar的基因,构建了带有TA-29基因5′调控区(-1300-+3)与barstar基因编码区、CaMV35S启动子与除草剂抗性基因bar两个表达框架的植物表达质粒pBBS。以“双低”油菜“5-4”的子叶柄为受体,通过农杆菌介导的遗传转化,获得了在含有10mg/L卡那霉素和20mg/LPPT的筛选培养基上再生的转基因植株。PCR分析结果表明,barstar基因已整合到油菜染色体上;Northernblot检测表明,barstar基因及bar基因在转基因植物中得到了正确的调控与表达。以转基因油菜“5-4”为父本授粉给表达barnase基因的雄性不育植株,不育株能正常结实。 相似文献
3.
将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒(PotatoLeafrolVirus,PLRV)中国分离株的基因间隔区(intergenicsequence,IS)双链cDNA以正、反向两种方式分别构建于转化载体pROK2中,通过致瘤农杆菌介导,以马铃薯叶圆片为转化材料,转化马铃薯栽培品种Desire,获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和PCR检测目的基因,证明PLRVIS双链cDNA已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种PLRV,观察症状并用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测转基因植株中PLRV含量。结果表明,表达PLRVIS正意和反意RNA的转基因植株,接种病毒后表现无症状或症状轻微,PLRV平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意RNA的转基因植株PLRV滴度降低43%~72%,表达反意RNA的转基因植株PLRV滴度降低72%~86%,由此可见,表达PLRVIS反意RNA的转基因马铃薯对PLRV抗性较强。 相似文献
4.
抗芜菁花叶病毒转基因甘蓝型油菜的研究 总被引:31,自引:0,他引:31
以子叶柄为材料,建立了甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)双低品种的再生体系。通过子叶柄与农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA4404)共培养,将表达载体pBTu中芜菁花叶病毒外壳蛋白(TuMV-CP)基因以整合方式导入甘蓝型油菜,然后用卡那霉素进行筛选,获得了油菜再生植株。经PCR特异性扩增、点杂交和Southern印迹分析,证明再生植株基因组DNA中整合了TuMV-CP基因。攻毒实验表明,有TuMV-CP基因插入的工程油菜对TuMV均有不同程度的抗性。 相似文献
5.
利用以3′-氨基糖苷磷酸转移酶基因(APHI)为报道基因的一套启动子探针质粒pSK-kan401、pSK-kan1105、pSK-kan1238,从酵母Klyveromyces cicerisporus基因组中克隆到8个有较强启动功能的DNA片段,分析出3′端DNA序列,并在酵母Kluyvero8mycese lactis中通过检测报告基因与3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(APDH)的mRNA表达量的比 相似文献
6.
从印度木薯花叶病毒(ICMV)侵染的植物中纯化特异的核酸,经RNAase,DNAasc,Nucle-aseSl,ExonucleaseⅢ和EcoRI酶切,Southern和Dotblots杂交证实,在感病的植株中,存在两种形式的病毒核酸:环状双链DNA和环状单链DNA,后者可能是病毒DNA的(-)链,环状双链DNA经限制性内切酶作用可得2.7kb的线性双链DNA纯化的病毒核酸含DNA1和DNA2两个分子量相近的组份。 相似文献
7.
牛生长激素基因在马铃薯中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
将牛生长激素基因cDNA 与Patatin ClassI启动子及NOS3终止子连接,构建了表达载体pPBGT. 用直接法将表达载体转入农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) LBA4404(pRAL4404)菌株, 用此菌株转化马铃薯(Solanum tuberosum )得到再生植株. 经NPTⅡ活性检测,总DNA PCR和Southern blot证明目的基因已整合到马铃薯基因组中.RNA 点杂交和Western blot表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达 相似文献
8.
紫云英细胞转化条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了紫云英(AstragalussinicusL.)细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)经含乙酰丁香酮的低pH/PO3-4 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞GUS瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌vir基因,促进了T-DNA 向植物细胞转移。在PEG介导的DNA 转移中,较高的pH 和Ca2+ 浓度能够提高细胞GUS活性。质粒DNA 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体-农杆菌共培养法,获得GUS和NPT Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株 相似文献
9.
构建了来自根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) T-DNA 的细胞分裂素基因(T-cyt)启动子驱动下的GUS基因的表达质粒,并用以转化烟草(Nicotiana tabacum cv. W 38)和马铃薯(Solanum tubero-sum L. cv. Desiree),研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明,T-cyt启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的:在维管束部分表达较强,在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外,在培养基中加入0.1 m g/LBAP,转基因烟草茎中GUS基因的表达活性增强,而对NAA 没有明显的反应。看来某些外源植物激素对T-cyt启动子的活性有一定的诱导作用 相似文献
10.
利用能形成多角体的杆状病毒载体系统pSXIVVI+X3,把萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase,Luc)cDNA克隆到转移功体质粒pSXIVVI^+3/3通过共转染草地夜蛾(Spodopterafrugiperda,Sf)细胞得到重组毒株TnNPV-Luc-OCC,在该重组杆状病毒株中Luc基因受到合成启动子和XIV启动子的双重调控。该重组杆状病毒株在Sf9细胞中能形成多角体,有X- 相似文献
11.
虫草多型现象的5.8S rDNA和ITS2序列测定研究 总被引:3,自引:0,他引:3
新定名的甘肃虫草Cordyceps gansuensi与冬虫草Cordyceps sinensi形态相似。蛹虫草Cordyceps militaris具有拟青霉型(Paecilomyces-type)和轮枝孢型(Verticillium-type)两类无性型。此研究对5.8S rRNA基因及ITS2间区DNA序列的分析结果表明,甘肃虫草和冬虫夏草的DNA序列相同,属于同一种;蛹虫草的两类无性型具有 相似文献
12.
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RiceRaggedStuntVirus,Philippineisolate,简称RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment1到Segment10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX-3X上,在大肠杆菌菌株DE3中用IPTG诱导表达,经超声波破菌、离心、Glutathione-sepharose4B亲和层析,得到纯化的分子量为64kD的融合蛋白。 相似文献
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酵母K.cicerisporus基因组中有启动子功能的DNA片段的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
利用以3′-氨基糖苷磷酸转移酶基因(APHI)为报告基因的一套启动子探针质粒pSK-kan401、pSK-kan1105、pSK-kan1238,从酵母Kluyveromycescicerisporus基因组中克隆到8个有较强启动功能的DNA片段,分析出3′端DNA序列,并在酵母Kluyveromyceslactis中通过检测报告基因与3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)的mRNA表达量的比值,确定它们的功能强度,其中pSK-kan401-41和pSK-kan1105-51两个克隆的插入片段具有较强的启动子功能,并证明这两个片段在酵母K.cicerisporus中也有启动子功能。 相似文献
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农杆菌转化获得转B.t.基因水稻及其生物学鉴定 总被引:8,自引:0,他引:8
以水稻主栽品种“秀水11”和“春江11”预培养4d未成熟胚为转化受体,经农杆菌LBA4404/pGBI4A2B(含B.t.基因)感染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率达44% ̄70%,转化植株产生频率达27% ̄64%。转基因植物总DNA经PCR和Southern blot分子杂交试验表明,T-DNA上的外源基因已整合到水稻的基因组里。对转B.t.基因水稻植株进行了两种水 相似文献
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产气肠杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性?… 总被引:3,自引:0,他引:3
用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出0.9kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒,pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。 相似文献
16.
本文报导了用PCR方法(Polymerase Chain Reaction)从抗胃癌单抗3Gg杂交瘤细胞的基因组DNA中,扩增出333bp的轻链可变区基因,克隆至pBluescript Ⅱks +/-载体上,筛选到阳性克隆。核苷酸序列分析表明:有53%的核苷酸序列与抗体基因库中的一般序列相符。证明已获得抗胃癌单抗轻链可变区基因。 相似文献
17.
通过组织培养从普通小麦(TriticumaestivumL.)与八倍体小黑麦(×TriticosecaleWitmack)杂种F0幼胚再生植株后代中获得2个代换系930498、930483和1个附加系930029。以黑麦(SecalecerealeL.)基因组DNA为探针,采用荧光原位杂交(FISH)证实了黑麦染色体的存在。在有丝分裂中期,经FISH处理的黑麦染色体为黄绿色,明显区别于红色的小麦染色体。染色体配对、C分带、麦谷蛋白电泳分析,证明两个代换系为1D/1R代换,附加的也是黑麦1R染色体 相似文献
18.
将鼠二甲基甘氨脱氨酶样基因(imethylglycinedehydrogenase-likegene)的部分 编码序列对EST数据库进行同源性分析,得到与其显著相似的1个人EST(GenBankH28856)(330bp)。此EST与9q34上的2个gDNA的文库中载体臂上上两端的引物PCR,在所得cDNA上再设计引物与cDNA文库载体臂上引物PCR,最终在肝cDNA文库获得1个完整编码区的cDN 相似文献
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鼻咽癌中差异表达基因的分析和克隆 总被引:13,自引:0,他引:13
为了验证通过CDNA代表性差性分析法(cDNA representational difference analysis,cDNA RDA)分离的CDNA序列在鼻咽癌活给组织中的差异表达,并进一不克隆鼻咽癌差异表达基因,采用RT-PCR方法并结合Notthern杂交确定其转录本的大小,进而充分利用生物信息学对有差异表达CDNA全长进行克隆,并对其基因产物进行了结构和功能预测。结果显示,AF0915 相似文献
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毛细血管扩张性共济失调突变蛋白在细胞凋亡过程中被Caspase┐3降解 总被引:1,自引:0,他引:1
新近的研究揭示:caspase蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能.一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被caspase特异切割,其中参与DNA损伤修复过程的聚ADP核糖聚合酶(PARP)以及DNA依赖的蛋白激酶(DNA-PK),在细胞凋亡过程中被caspase选择性切割具有特殊的功能意义.为探索与DNA-PK催化亚基有较高同源性,含有caspase切割位点,且功能上目前也被认为是感受DNA损伤和参与信号传导途径的ATM(Ataxiatelang-iectasiamutated)蛋白,是否在凋亡过程中也可被切割而降解?应用体外转录与翻译系统获得ATM蛋白的PI3K结构域,同时通过建立无细胞反应体系获得含caspase活性的细胞抽提液,将两者在体外共同保温.结果发现:ATM蛋白与caspase-3能免疫共沉淀,ATM蛋白的PI3K结构域可被caspase-3特异切割,并观察到辐射诱发细胞调亡中ATM蛋白的降解.从而进一步证实了DNA损伤修复的抑制,促进细胞凋亡的发生. 相似文献