提高肾小球基底膜PASM染色法质量的技巧

在肾小球疾病的病理诊断中,观察与研究肾小球基底膜的改变具有极为重要的诊断价值。显示肾小球基底膜多采用PASM（Periodic Acid—Silver Methenamine）染色法,应用过程中,发现传统的PASM肾小球基底膜染色法染色效果不佳,基底膜染色显示较浅,背景较深,染色时间过长。我们经大量实验,对染液的配比、染色时间、染色孵育温度等进行了调整,收到较好的染色效果。     

微波在肾小球基底膜PASM染色方法中的应用改进

临床诊断肾小球疾病中,经皮肾穿刺活检(肾穿刺)是重要的检查方法之一,对于肾脏疾病的正确诊断和分类起到很重要的作用,实际应用中,除做免疫荧光抗体外,用特殊染色Gomori六胺银(PASM)方法来显示肾基底膜的改变。在光镜下用HE染色难以观察肾血管球基底膜的改变,如基底膜增厚、“钉突”、“双轨”等改变。通过PASM染色能观察到以上改变。按常规的PASM染色法较复杂,染色过程比较费时,温度和时间较难控制。为了克服这一缺点,我们利用微波炉染色取得了较好的效果,现方法介绍如下。材料和方法1·标本与切片标本来自广州军区广州总医院肾穿刺…     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

基底膜染色方法比较及在胃粘膜异型增生与胃腺癌中的应用

目的探讨胃粘膜上皮基底膜有效、便捷、直观的实验方法,及基底膜、Ki67免疫组织化学、粘液多重染色在胃腺癌组织染色中的可行性。方法用过碘酸希夫(periodie acid Schiff,PAS)反应、六胺银法(methenamine silvermethod,PASM)、网状纤维染色、苦味酸-天狼猩红(Picrosirius red,SR)和IV型胶原免疫组织化学5种染色方法对多种胃粘膜异型增生及胃腺癌病理标本基底膜进行染色,并利用Friedman检验、Wilcoxon检验定量分析、比较基底膜阳性区域面积。此外,在同一张胃腺癌组织切片上进行显示基底膜、蛋白质、粘液的多重染色。结果 5种基底膜染色方法中,IV型胶原免疫反应阳性面积与SR染色阳性面积(胃粘膜中-重度异型增生标本除外)无显著性差异、PAS与PASM染色阳性面积无显著性差异、网状纤维染色阳性面积最大。多重染色实验结果显示胃腺癌Ki-67、阿尔新蓝(Alcian blue,AB)-PAS二重染色和Ki-67、AB、SR三重染色,分别显示对应结构,效果良好。结论观察基底膜,胃粘膜中-重度异型增生标本中IV型胶原免疫组织化学与SR染色要分别选用;胃粘膜轻度异型增生及胃腺癌标本中IV型与SR染色可相互替代;PAS与PASM染色法可相互替代,我们推荐较为便捷的SR和PAS染色;网状纤维染色观察比较直观,可选用。此外,SR、PAS也可分别应用于胃腺癌Ki67免疫组织化学与AB的多重染色中,效果良好。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

病理组织芽生菌感染的特殊染色方法分析

目的 分析比较显示真菌的4种特殊染色方法,旨在寻找一种显示芽生菌并适合于临床病理诊断的染色方法.方法 对病理石蜡组织芽生菌感染标本进行PAS染色、PASM染色、抗酸染色及爱尔新蓝染色(pH2.5),光学显微镜下观察染色效果.结果 HE染色切片上见多数圆形、厚壁、棕色的硬壳小体,PAS染色呈红色,PASM染色呈黑色,抗酸...     

抗酸染色后不同复染方法的比较

目的 比较抗酸染色后3种复染剂的染色效果,选择更适于抗酸菌感染临床病理诊断的复染剂种类.方法 用确诊结核菌或麻风菌的病例进行抗酸染色后用Mayer氏苏木精、亚甲蓝、甲基绿分别复染.结果 用Mayer氏苏木精进行衬染的阳性位置定位清楚,对比清晰,背景干净.结论 用Mayer氏苏木精复染有利于病理医生的观察,对提高抗酸菌阳...     

一种改良鞭毛染色法

鞭毛染色是一项常用而又难达到预期效果的技术。欲使染出鞭毛结构清晰、形态完整、本底干净需反复摸索染色条件。现有的鞭毛染色方法,有些烦琐且结果不稳定。我们所用的改良鞭毛染色法,方法简便易行,染色效果亦较好。现将具体的染色方法及染色结果报告如下：     

免疫组织化学染色技术EV二步法和LSAB法的应用比较

将目前广泛使用的 L SAB法和 EV二步法进行应用比较 ,经反复实验后发现这两种方法有许多共同点 ,也有各自的优点。切片经 DAB显色后 ,颜色鲜艳呈棕黄色 ,二者没有差别 ;背景清晰干净 ,无非特异性染色 ,阳性物明显易辨 ,二者没有明显区分 ;对于强、中、弱反应的病例 ,二者的敏感性不分上下 ;阳性物的定位和定性以及试剂使用的便利性 ,二者都一样。在时间使用上 ,EV二步法至少要少 30分钟 ,在步骤上前者比后者少两个步骤 ,EV法比 L SAB法每例的试剂花费要高出 1.5元。在进行常规免疫组化染色的时候 ,首先要决定用什么方法来进行染色 ,…     

介绍一种简单适用的胸腹水脱落细胞石蜡包埋法

常规胸腹水脱落细胞检测多采用直接涂片法,该法简便、快速,在临床上得以广泛应用。但在实际工作中,我们发现直接涂片常出现细胞重叠,堆积,厚薄不均匀,细胞结构及背景不清晰,细胞量少,细胞脱落等现象,往往导致癌细胞检出率低。特别是某些需要通过免疫细胞化学进行鉴别诊断的病例,如转移性腺癌细胞与问皮源性细胞,诊断前一般并未预留涂片,在进行HE染色涂片观察后,     

用微波技术改进的PAM染色

ＰＡＭ染色法是一种显示肾小球基底膜的六胺银染色与Ｍａｓｓｏｎ三色法结合起来应用的复合染色法,它可在同一切片上显示多种组织成分,是肾穿活检中必不可少的方法。但它步骤多,耗时长,严重影响制片速度,为此,我们用微波技术对ＰＡＭ染色法进行改进（简称为ＭＷ－Ｐ...     

六胺银染液配制方法的改进

六胺银 (Methenamie silver)染色广泛用于病理检测 ,是临床肾活检的重要的染色方法之一 ,该法可特殊地显示肾小球毛细血管基底膜 ,系膜基质、肾小囊壁层基膜以及肾小管基底膜的病理变化 ,亦是显示真菌、尿酸盐 [1 ] 等常用的一种方法。由于临床送检组织时多时少 ,预先配制的六胺银贮备液往往因放置过久而失效 ,导致染色失败。我们在 Gomor氏六胺银贮备液 [2 ] 的基础上将配制方法进行了改进 ,报道如下 :材料和方法1.试剂配制 :1.1　硝酸银分装于 EP管中 ,每只 2 5 mg,加盖 ,贴好标签 ,置 4℃冰箱内保存 ;六次甲基四胺 30 0 m g/只 EP管 ,…     

皮肤组织神经髓鞘几种染色方法的比较

对皮肤组织神经髓鞘应用髓磷脂硷性蛋白myelin basic protein简称MBP）免疫组织化学,劳克坚牢蓝(Luxol fast blue,简称LFB）,砂罗铬花青（solochrome cyanine简称SC）,KOH-HIO4-Schiff四种不同的染色方法进行染色比较,结果显示,MBP法具有特异性强,背景干净,对比清晰等特点。SC、Schiff法髓鞘着色效果亦较好,但背景中其他组织也着色,只要分化适当,LFB法髓鞘着色鲜明,且有一定特异性。     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法的改良

为了筛选和检测绵羊种群中具有较好表现的微卫星多态性,采用Touch-down PCR方法扩增绵羊基因组上的微卫星DNA序列后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,采用改良的银染法对微卫星位点进行多态性检测,染色结果与常规银染法相比,该方法具有灵敏度高、背景浅、污染小、条带清晰等突出特点,能有效地控制染色背景,显著提高检测分辨率,整个染色过程所需时间短,具有广泛的推广价值。     

课堂教学中疟原虫血涂片染色方法的改进

疟原虫血涂片染色是高校寄生虫学实验课中的重要内容。传统的疟原虫血涂片染色采用的是经典的Giemsa染色法,但是染色效果受各种因素影响不稳定,严重影响教学质量。采用Diff-Quik染色方法进行染色发现,血涂片上的红细胞及疟原虫的形态与Giemsa染色结果相比更加明显和典型,染色背景干净无杂质,有利于进一步分辨疟原虫形态和进行数据统计。     

两种脂肪细胞内脂滴染色方法的比较研究

目的比较油红O染色法和尼罗红染色法对脂肪细胞内脂滴染色的优劣,探讨科研工作中更优的脂滴染色方法。方法采用经典的"鸡尾酒"法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化;诱导分化8d后,对细胞内脂滴进行油红O染色和尼罗红染色,观察脂滴形态并测定甘油三酯含量。结果两种染色方法中甘油三酯的测定结果一致。但油红O染色过程较为繁琐、耗时较长,染料不易清洗干净,导致染料残留,从而引入实验误差,影响测定结果;而尼罗红荧光染色操作简单、耗时短以及背景更洁净。结论尼罗红荧光染色法应用于脂肪细胞内脂滴的鉴定和定量测定更加简单、便捷。     

双氧水快速氧化法在Mallory磷钨酸-苏木素染色中的应用

在日常病理诊断、鉴别诊断及科研工作中,观察横纹肌的基本病理变化,以及对横纹肌肉瘤与许多未分化的间叶性肿瘤的鉴别诊断,多采用Mal-lory磷钨酸—苏木素染色法。但在应用过程中,我们发现该法染色时间长(12—48h),所配染液成熟周期长(数周-数月),从而使临床病理诊断和鉴别诊断受到很大影响。我们根据染色的基本原理,经反复实验,对染色步骤进行了改进;同时采用双氧水快速氧化法,加速染液成熟,收到了理想的染色效果。材料和方法1.材料本科活检及尸检的正常肌肉及横纹肌肿瘤组织,经Zenker氏液固定,常规石蜡切片,切片厚4μm。2.仪器YWY781B医…     

茎点霉致泛发性嗜酸性脓疱性毛囊炎1例及实验分析

目的报道1例顽固性嗜酸性脓疱性毛囊炎,并对其病因、诊断及治疗方法进行研究讨论。方法患者男性,47岁,头面部丘疱疹1年伴瘙痒,泛发,并出现血嗜酸性粒细胞增多3个月就诊。取皮损组织和骨髓进行组织分别进行HE、PAS、PASM、钙荧光白染色;同时进行组织真菌培养;真菌特异性引物ITS4/ITS5、NL1/NL5、T1/TUB4Rd测序。结果组织病理可见以毛囊为中心的嗜酸性毛囊化脓性炎,PAS染色和钙荧光白染色可见真皮、皮下组织大量不规则菌丝和孢子,毛囊及毛囊周围显著;骨髓PASM染色可见大量芽生孢子,组织及骨髓组织培养见绒毛状菌落,初期为粉红色,渐变为黑褐色,培养4周见黑色子囊形成;序列鉴定为茎点霉属;抗真菌治疗后痊愈。结论嗜酸性脓疱性毛囊炎可由真菌感染诱发;作为植物致病菌的茎点霉属感染可导致严重的变态反应,并可诱发嗜酸性脓疱性毛囊炎。     

介绍一种LFB显示线粒体组织化学新方法

在病理诊断和研究工作中,线粒体染色是一种常规的染色技术。目前常用的染色方法多存在着染色步骤复杂,染色时间过长及分化难以掌握等缺点。针对上述缺点,我们根据线粒体中含有大量的类脂质（蛋白质－磷脂）这一组织结构特点,采用劳克坚牢蓝（Ｌｕｘｏｌｆａｓｔｂｌｕ...     

中华稻蝗血细胞染色方法的比较

通过Giemsa、Wright和Giemsa-Wright混合染色3种方法,对中华稻蝗Oxya chinensis(Thunberg)的血细胞进行了染色和血细胞的形态学观察,其结果是Giemsa染液染色时间较长,对细胞核染色效果较好,细胞质界限清晰,但对细胞质中的颗粒染色较差;Wright染液染色时间较短,对细胞核和细...