肝郁脾虚证模型大鼠血流变及TXB2、PGF1a的变化

目的:探查中医肝郁脾虚证模型的血流变及相关调节因子的状态。方法:采用慢性束缚应激 过度疲劳 饮食失节法建立大鼠肝郁脾虚证模型,测定大鼠造模三周、自然恢复一周时的血流变和血浆TXB2、PGF1a。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模三周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度和还原粘度均显著升高(P＜0．001),红细胞聚集指数显著降低(P＜0．001),红细胞压积显著升高(P＜0．01),红细胞变形指数无显著性差异(P＞0．05);血浆TXB2显著升高(P＜0．001),6-keto-PGF1a显著降低(P＜0．05), TXB2/PGF1a显著升高(P＜0．01);模型组大鼠第四周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度和还原粘度仍显著升高(P＜0．001或P＜0．01);红细胞聚集指数显著降低(P＜0．001);红细胞压积与变形指数无显著性差异(P＞0．05);血浆TXB2和TXB2/PGF1a显著降低(P＜0．05),6-keto-PGF1a显著升高(P＜0．05)。结论:肝郁脾虚证大鼠存在血液高粘和血栓易形成状态,恢复期血液高粘同时伴有扩血管因素的加强。提示肝郁脾虚证有血流变的异常和血浆TXA2-PGI2的平衡失调,主要涉及到血小板和血浆因素的参与。     

肝郁脾虚证模型大鼠血流变及TXB2、PGFla的变化

目的:探查中医肝郁脾虚证模型的血流变及相关调节因子的状态。方法:采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法建立大鼠肝郁脾虚证模型,测定大鼠造模三周、自然恢复一周时的血流变和血浆TXB2、PGF1a。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模三周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度、还原粘度均显著升高(P<0.001),红细胞聚集指数显著降低(P<0.001),红细胞压积显著升高(P<0.01),红细胞变形指数无显著性差异(P>0.05);血浆TXB2显著升高(P<0.001),6-keto-PGF1a显著降低(P<0.05),TXB2/PGF1a显著升高(P<0.01);模型组大鼠第四周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度、还原粘度仍显著升高(P<0.001或P<0.01);红细胞聚集指数显著降低(P<0.001);红细胞压积与变形指数无显著性差异(P>0.05);血浆TXB2和TXB2/PGF1a显著降低(P<0.05),6-keto-PGF1a显著升高(P<0.05)。结论:肝郁脾虚证大鼠存在血液高粘和血栓易形成状态,恢复期血液高粘同时伴有扩血管因素的加强。提示肝郁脾虚证有血流...     

肝郁脾虚证模型大鼠血流变及TXB_2、PGFla的变化（英文）

目的：探查中医肝郁脾虚证模型的血流变及相关调节因子的状态。方法：采用慢性束缚应激＋过度疲劳＋饮食失节法建立大鼠肝郁脾虚证模型,测定大鼠造模三周、自然恢复一周时的血流变和血浆TXB2、PGF1a。结果：与正常组相比,模型组大鼠造模三周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度、还原粘度均显著升高（P〈0.001）,红细胞聚集指数显著降低（P〈0.001）,红细胞压积显著升高（P〈0.01）,红细胞变形指数无显著性差异（P〉0.05）;血浆TXB2显著升高（P〈0.001）,6-keto-PGF1a显著降低（P〈0.05）,TXB2/PGF1a显著升高（P〈0.01）;模型组大鼠第四周150/s、38/s、10/s、5/s切变率下的全血粘度、还原粘度仍显著升高（P〈0.001或P〈0.01）;红细胞聚集指数显著降低（P〈0.001）;红细胞压积与变形指数无显著性差异（P〉0.05）;血浆TXB2和TXB2/PGF1a显著降低（P〈0.05）,6-keto-PGF1a显著升高（P〈0.05）。结论：肝郁脾虚证大鼠存在血液高粘和血栓易形成状态,恢复期血液高粘同时伴有扩血管因素的加强。提示肝郁脾虚证有血流变的异常和血浆TXB2-PGI2的平衡失调,主要涉及到血小板和血浆因素的参与。     

大鼠实验性脾虚证胰腺组织化学研究

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只,分为（１）正常对照组,喂饲自来水。（２）脾虚组,用苦降破气中药和饮食失节法致成脾虚模型。（３）自然恢复组,动物致虚后,喂饲自来水。（４）中药治疗组。取四组动物胰腺进行ＲＮＡ,琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,三磷酸腺苷酶（ＡＴＰａｓｅ）,葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６－Ｐａｓｅ）和硫胺素焦磷酸酶（ＴＰＰａｓｅ）组织化学反应和观察,并对ＳＤＨ,ＬＤＨ,ＲＮＡ进行了显微分光光度计定量测定。本研究结果表明,脾虚组胰腺泡细胞的ＲＮＡ,ＳＤＨ,ＡＴＰａｓｅ,Ｇ－６－Ｐａｓｅ,ＴＰＰａｓｅ含量和活性都低于对照组,而ＬＤＨ活性高于对照组。治疗组与自然恢复组相比,治疗组胰腺泡细胞以上指标接近对照组。定量测定与定性的结果一致。本研究表明,脾虚证时胰腺泡细胞上述几种酶活性和ＲＮＡ明显下降,可能在脾虚证发病中起主要作用,中药治疗有显著改善     

肝郁脾虚泄泻大鼠模型的建立及评价

目的采用多因素刺激方法建立吻合人类"肝郁脾虚泄泻"疾病特征的大鼠模型,并选取操作简单、结论实时、科学经济的评价指标。方法将幼年SD大鼠随机分为空白组和模型组,模型组采用母婴分离、束缚刺激、直肠醋酸刺激三种因素复合造模,选择不同时间测定大鼠体重变化、直肠敏感性、大鼠粪便分型积分及粪便含水量等指标,客观验证肝郁脾虚泄泻模型是否成功。结果模型大鼠出现食欲减退,饮水量增大,尿液减少的病理现象,部分大鼠出现活动增加、甚至躁狂。粪便积分在5~7分,粪便含水量远远高于正常组大鼠,而肠道敏感性显著增加。结论该模型较好的模拟了肝郁脾虚泄泻的临床表现,能满足该类疾病的相关研究。     

大鼠实验性脾虚证胃粘膜内分泌细胞变化的免疫组织化学研究

用正常成年雄性Wistar大鼠53只,体重100～150g,分为正常对照组、实验性脾虚组、自然恢复组和四君子汤治疗组。取胃,固定于Bouin液。制成石蜡切片,进行(1)HE染色;(2)免疫组织化学染色,按Sternberger PAP法显示胃泌素细胞(G细胞)、生长抑素细胞(D细胞)和5-HT细胞。根据细胞的免疫反应程度,将细胞分为强阳性、中等阳性和弱阳性三级,每例动物计数三种细胞各1,000个,并计算各级细胞占的百分比;(3)从正常对照组,脾虚组随机选择各5例动物,对D细胞和G细胞进行显微分光光度计的定量测定;(4)由四组动物随机选择各5例,进行G细胞和D细胞密度及G/D细胞比值的测定。本文的观察表明:(1)脾虚组胃粘膜未见明显的组织学变化;(2)内分泌细胞:与对照组相比,脾虚组G细胞和5-HT细胞中,弱阳性细胞增多,表明分泌活动增强;D细胞弱阳性和中等阳性细胞减少,强阳性细胞增多,表明分泌释放减弱,合成增强。与自然恢复组比较,治疗组G细胞和D细胞的分泌活动接近于对照组;5-HT细胞无明显的恢复;(3)显微分光光度计的测定结果与光镜观察一致,脾虚组G细胞胃泌素反应物的含量低于对照组,D细胞内生长抑素反应物的含量高于对照组;(4)脾虚组G细胞密度低于对照组(P<0.01),D细胞密度略高于对照组,G/D细胞比值也低于对照组(P<0.01)。本文结果提示,脾虚证这些内分泌细胞的分泌活动出现异常,可能是导致消化功能紊乱的原因之一。经四君子汤治疗后,内分泌细胞的分泌活动接近于对照组,说明此药对脾虚证有一定的治疗作用。     

大鼠肝郁证胃肠运动功能障碍动物模型的建立

目的 通过运用模具加水浴方法制备肝气郁结证候动物模型.方法 将大鼠分为空白对照组、模型组、自复组、反证组4组.运用模具加水浴方法造成大鼠肝郁证胃肠运动功能障碍动物模型.测量各组动物的体重、腹围、自发活动、智力、胃和小肠运动功能变化,观察胃肠组织形态学变化,测定血浆胃动素(MTL)、胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)指标研究肝郁证大鼠胃肠激素的变化.结果 模型组大鼠体重增加减慢,腹围指数变大,自发活动减少,智力下降;胃残留率增加、小肠推进率减慢;Gas、MTL和VIP的含量降低,SS的含量升高.用四逆散治疗后上述指标恢复正常.结论 用模具加水浴方法制备肝郁证动物模型接近中医肝气郁结证的发病学因素,其模型的情志改变呈现肝郁证典型的临床特点.     

实验性脾虚证大鼠内分泌腺形态学与细胞化学研究

成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只,分对照组和实验组。实验组用大黄煎剂灌服４２天致实验性脾虚证。对两组睾丸,肾上腺和甲状腺进行常规形态学与细胞化学观察。形态学显示：睾丸,肾上腺和甲状腺的组织和细胞均有不同程度的损伤。细胞化学显示：各内分泌腺均表现酸性磷酸酶（ＡＣＰ）减弱,个别内分泌腺细胞显示琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）,三磷酸腺苷酶（ＡＴＰａｓｅ）和ＰＡＳ反应的变化。结果证明脾虚证不仅消化系统功能低下,而且内分泌功能也受到了影响     

实验性脾虚证大鼠肝细胞ATP酶的组织化学研究

用Ｗｉｓｔａｒ雄性成年大鼠２８只,分为对照组、脾虚组、自然恢复组和中药治疗组,每组７只。每组各取５只,麻醉处死后取肝右叶小块组织,恒冷箱切片,按Ｗａｃｈｓｔｅｉｎ－Ｍｅｉｓｅｌ法显示Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ,光镜观察。每组另２只经心脏灌注多聚甲醛混合固定液固定,取肝右叶小块组织,制振动切片,采用Ｒｏｂｉｎｓｏｎ和Ｋｏｒｎｏｖｓｋｙ法显示Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ,以常规电镜法包埋和切片,透射电镜观察。本文见到,光镜下Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ位于胆小管,电镜下存在于胆小管微绒毛质膜上。脾虚组Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组;“自然恢复组”Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性介于对照组与脾虚组之间。中药治疗组酶活性与对照组相近。本文对脾虚证肝细胞Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ变化的意义进行了讨论。     

低氧暴露对大鼠下丘脑CRF分泌的影响

目的和方法：利用人工模拟低氧及放射免疫测定（RIA）法,观察不同低氧（5km,7km）暴露对大鼠下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素（C orticotropin-releasing factor,CRF）的作用和血浆皮质酮水平的变化。比较低氧暴露不同时间（2h,24h,5d,15d）后,大鼠下丘脑CRF分泌和血浆皮质酮的变化。结果：低氧暴露2h,24h后下丘脑的CRF分泌明显增加,血浆皮质酮水平显著升高,这种变化随着低氧程度的加深而增强,随着低氧暴露时间的延长（5d）上述变化减弱。至慢性低氧暴露15d后,下丘脑CRF分泌及血浆皮质酮水平与对照组相比已无显著差异,基本恢复到对照水平。结论：动物暴露于低氧环境后,下丘脑CRF分泌及血浆皮质酮水平变化为：低氧暴露2h,24h后CRF分泌和皮质酮分泌被激活;低氧暴露5d后CRF分泌和皮质酮分泌活动减弱,并开始恢复;至低氧暴露15d后,这种分泌活动基本恢复,进入恢复期。     

肝郁证实验动物模型研究的现状及存在的问题

肝郁证(syndrome of stagnation of the liver-qi),是由于情志不遂,致肝疏泄不及,肝气郁结所表现的证候。随着生活节奏的加快,生活压力的增加,人们受到外界的各种压力越来越大。情志不畅、肝气不疏成为临床上常见的病因。据统计,中医五脏中发病率最高的是肝脏^[1]。故有必要建立以动物为主体的模型来进行实验研究。但毕竟动物     

穹窿切断对大鼠下丘脑CRH表达的影响

目的观察穹窿切断对大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)表达的影响,探讨海马对HPA轴的抑制作用是否通过穹窿介导。方法成年健康雄性Wistar大鼠80只,随机分为穹窿切断组和假手术组,再分为0d、4d、7d、10d组,每组10只。建立大鼠穹窿切断模型,采用免疫组织化学和Westernblot技术检测穹窿切断组0d、4d、7d、10d时下丘脑CRH的表达变化和分布规律,并以假手术组相应时间段作为对照。结果穹窿切断组于7d时CRH表达升高,10d时升高显著。假手术组下丘脑仅有少量CRH表达。结论穹窿切断使CRH表达升高,HPA轴活动增强,海马对HPA轴的抑制作用减弱,揭示海马是通过穹窿纤维对HPA轴发挥抑制作用。     

大鼠实验性脾虚证空肠粘膜吸收细胞ATP酶的细胞化学研究

用Ｗｉｓｔａｒ成年雄性大鼠８只,分为对照组、实验性脾虚组、自然恢复组和中药治疗组。四组动物用水合氯醛麻醉后,经心脏灌流固定,取空肠制成５０μｍ厚的振荡切片,按Ｒｏｂｉｎｓｏｎ和Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ法显示Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ,然后常规电镜包埋和制片,在Ｈ－７００型电镜下观察。结果显示,在粘膜吸收细胞微绒毛质膜铈离子（Ｃｅ３＋）沉淀呈现为电子密度较高的细密颗粒。脾虚组酶反应强度明显低于对照组;自然恢复组酶反应高于脾虚组而低于对照组;中药治疗组酶反应较高,与对照组相似。本文提示,肠粘膜吸收细胞ＡＴＰ酶活性的降低,使食物的消化吸收减弱     

睡眠中间断低氧对大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴和生长激素的影响

目的:探讨睡眠中间断低氧对大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴和生长激素水平的影响.方法:大鼠分别给予吸入空气,持续低氧和间断低氧气体,在1 d,3 d,7 d和30 d后测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和生长激素释放激素(GHRH)mRNA水平,并测定30d后血浆CRH,GHRH,促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮水平,分析其间的变化关系.结果:与对照组比较,在低氧后1 d,3 d,7 d后大鼠下丘脑CRH mRNA升高,GHRH mRNA降低,在30 d后,间断低氧组下丘脑CRH mRNA升高,GHRH mRNA降低,而持续低氧组则接近正常.间断低氧30 d后,血浆CRH、ACTH,皮质酮均升高,GHRH降低,而生长激素没有明显变化.结论:大鼠睡眠中慢性间断低氧可以引起下丘脑-垂体-肾上腺轴激素水平升高,反馈调节紊乱,可引起GHRH分泌抑制.     

实验性脾虚证大鼠结肠和盲肠组织化学、免疫组织化学研究

成年雄性Wistar大鼠60只,分正常对照组;脾虚组;自然恢复组和四君子汤治疗组。四组动物取结肠和盲肠分别进行H-E;酶组织化学和5-羟色胺细胞PAP免疫组织化学观察。结果表明,脾虚组结肠和盲肠粘膜上皮的杯状细胞较对照组明显增多,淋巴细胞及淋巴集结也增多。固有层毛细血管充血并有炎症细胞的增多。上皮细胞和腺细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)减弱,乳酸脱氢酶(LDH)增强;结肠上皮细胞和腺细胞碱性磷酸酶(AIP)和三磷酸腺苷酶(ATPase)增强,而盲肠上皮细胞和腺细胞AIP和ATPase减弱。结肠和盲肠5-HT细胞免疫组化反应减弱。这些结果表明肠上皮细胞酶的变化和5-HT细胞分泌活性的变化与脾虚证的发生密切相关,可能是导致脾虚证原因之一。经四君子汤治疗后以上各项指标均比自然恢复组更接近于正常对照组,说明此药对消化道粘膜上皮酶活性和5-HT细胞分泌活性恢复正常有明显效果,从而起治疗作用。     

应激性高血压大鼠脑干及下丘脑-垂体-肾上腺轴中肾上腺髓质素及其受体mRNA表达的改变

采用逆转录-聚合酶链式反应检测了慢性足底电击结合噪声应激致高血压大鼠下丘脑、延髓、中脑、垂体和肾上腺等组织中编码肾上腺髓质素的肾上腺髓质素前肽原(preproadrenomedullin,ppADM)基因以及ADM的特异性受体组件降钙素受体样受体(calcitonin-receptor-like receptor,CRLR)和受体活性调节蛋白2和3(receptor-activty-modifying proteins,RAMP2和RAMP3)表达的变化.我们观察到:与对照组相比,以3-磷酸甘油醛脱氢酶作为内参照,15 d足底电击结合噪声应激引起下丘脑、垂体和肾上腺中ppADM mRNA表达上调,而在延髓和中脑表达明显下调(P＜0.01或P＜0.05);CRLR基因表达量正常时在下丘脑相对较高,应激15 d后CRLR表达在延髓、中脑和下丘脑下调(P＜0.01或P＜0.05),而在垂体和肾上腺的表达无明显变化;应激后RAMP2基因在延髓和下丘脑表达上调,而在肾上腺表达显著下调(P＜0.01),其他部位无明显变化;RAMP3基因在对照组大鼠的中脑和下丘脑表达较高,在应激性高血压大鼠的下丘脑和垂体表达上调(P＜0.01或P＜0.05),而在中脑和肾上腺表达下调(P＜0.05),在延髓中的表达变化无统计学差异.上述结果提示:慢性足底电击结合噪声应激引起明显的中枢和下丘脑-垂体-肾上腺轴ADM及其受体组件CRLR/RAMP2或CRLR/RAMP3基因的表达变化.但慢性应激后中枢源性ADM及其受体的表达变化对应激和血压的调节以及在应激致高血压中的确切作用及机制尚待进一步研究.     

重复制动应激对雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的: 探索重复制动应激对雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响。方法: 40只SD雌鼠随机分为两组(n=20),对照组和实验组,一组正常饲养,一组采取递增负荷束缚应激,每天置于束缚器内制动应激一次(从上午9:00开始),第1日制动2 h,以后采用递增负荷,每日增加0.5 h,持续两周,通过检测体重、脏器系数、动情周期、性激素、病理和相关基因的表达探索其对下丘脑-垂体-卵巢轴的危害。结果: 重复制动应激使雌性大鼠体重下降、动情周期延长,卵巢和子宫的脏器系数和形态发生改变,利用qPCR技术对其相关基因检测,发现下丘脑促性腺激素释放激素、垂体促性腺激素释放激素受体、促卵泡生成素和促黄体生成素mRNA的表达显著下降,卵巢促卵泡生成素和黄体生成素受体 mRNA的表达显著上升,卵巢和子宫雌激素受体mRNA的表达显著下降。结论: 重复制动应激可能通过干扰下丘脑-垂体-卵巢轴的内分泌调节作用,使动情周期紊乱,从而损伤雌性动物的性腺和生殖内分泌功能。     

疏肝健脾针法对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征患者肠道菌群和血清5-HT、NPY、CGRP的影响

目的:观察疏肝健脾针法治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的临床疗效及对肠道菌群和血清5-羟色胺(5-HT)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)的影响。方法:96例肝郁脾虚证IBS-D患者均来自天津市人民医院2018年5月~2021年2月期间收治的门诊或住院患者。根据双色球法将患者分为对照组和研究组,各为48例,对照组接受西医治疗,研究组在对照组基础上结合疏肝健脾针法治疗,对比两组疗效、中医证候积分、肠道菌群和血清5-HT、NPY、CGRP水平变化。结果:研究组的临床总有效率明显高于对照组(P<0.05)。疗程结束后,研究组大便稀溏、少腹胀痛、食后腹胀、食欲减退、精神疲乏、口苦口黏、四肢无力、烦躁易急、畏寒怕冷症状积分均低于对照组(P<0.05)。疗程结束后,研究组血清5-HT、NPY、CGRP水平均低于对照组(P<0.05)。疗程结束后,研究组双歧杆菌、双歧杆菌/大肠杆菌比值、乳酸杆菌数量均高于对照组,而大肠杆菌数量低于对照组(P<0.05)。结论:疏肝健脾针法治疗肝郁脾虚证IBS-D患者,可有效促进症状改善,调节肠道菌群,降低血清5-HT、NPY、CGRP水平,临床疗效显著。     

应激性高血压犬鼠脑干及下丘脑-垂体-肾上腺轴中肾上腺髓质素及其受体mRNA表达的改变

采用逆转录- 聚合酶链式反应检测了慢性足底电击结合噪声应激致高血压大鼠下丘脑、延髓、中脑、垂体和肾上腺等组织中编码肾上腺髓质素的肾上腺髓质素前肽原(preproadrenomedullin, ppADM) 基因以及ADM 的特异性受体组件降钙素受体样受体(calcitonin-receptor-like receptor,CRLR)和受体活性调节蛋白2 和3(receptor-activity-modifying proteins, RAMP2 和RAMP3)表达的变化。我们观察到:与对照组相比,以 3- 磷酸甘油醛脱氢酶作为内参照,15 d 足底电击结合噪声应激引起下丘脑、垂体和肾上腺中ppADM mRNA表达上调,而在延髓和中脑表达明显下调(P<0.01 或 P<0.05); CRLR基因表达量正常时在下丘脑相对较高,应激15 d 后CRLR 表达在延髓、中脑和下丘脑下调(P<0.01 或 P<0.05), 而在垂体和肾上腺的表达无明显变化;应激后RAMP2 基因在延髓和下丘脑表达上调,而在肾上腺表达显著下调(P <0.01), 其他部位无明显变化;RAMP3 基因在对照组大鼠的中脑和下丘脑表达较高,在应激性高血压大鼠的下丘脑和垂体表达上调(P<0.01 或P<0.05), 而在中脑和肾上腺表达下调(P<0.05), 在延髓中的表达变化无统计学差异。上述结果提示:慢性足底电击结合噪声应激引起明显的中枢和下丘脑- 垂体-肾上腺轴ADM 及其受体组件CRLR/RAMP2 或CRLR/R