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阐明乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白1(PS1TP1)的表达对于肝细胞的基因表达谱的影响。应用基因芯片技术对于pcDNA3.1()和pcDNA3.1()PS1TP1分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析。以肝癌细胞系HepG2基因作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PS1TP1基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1()PS1TP1。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总RNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1()的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。在4096个基因表达谱的筛选中,发现有8个基因表达水平显著上调,14个基因表达水平显著下调。PS1TP1基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式调节靶基因的有效技术途径。 相似文献
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柑橘叶片总RNA的两种提取方法比较 总被引:1,自引:0,他引:1
为了简便、快速提取高质量的柑橘(Citrus reticulata Banco)叶片总RNA,采用TRlzol法,对北京天根公司RNAplant Reagent和日本TaKaRa公司RNAiso Reagent两种RNA提取试剂进行比较并适当改进.结果表明:通过琼脂糖凝胶电泳,使用TaKaRa公司试剂提取的总RNA28S和18S条带清晰,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1,820,A260,A230为2.088,RNA的浓度为2.840 μg μl-1,用于RT-PCR反应可成功克隆柑橘β-actin看家基因228 bp片段;采用天根公司试剂,琼脂糖凝胶电泳显示RNA带型较模糊,紫外分光光度计检测分析A260/A280为1.464,A260/A230为1.603,RNA的浓度为2.020 μg μl-1,达不到RNA的标准.TaKaRa公司RNAiso Reagent试剂提取的柑橘叶RNA纯度和完整性较好,能用于Northern杂交、cDNA文库的建立及基因克隆等分子生物学实验,为柑橘的进一步分子生物学研究奠定了基础. 相似文献
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盐生肉质化植物海马齿(Sesuvium portulacastrum L.)中总RNA提取方法的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
以海马齿为材料,分别用CrAB法、SDS法、Trizol方法以及改进的CTAB法提取其总RNA,并比较了各RNA的产率、纯度和完整性等.结果表明,改进的CrAB法对海马齿总RNA的提取有较好的效果.所得总RNA的28S、18S和5S条带清晰,A260/A280比值为2.0,A260/A230比值为2.08,RNA产量可达56μg·g-1(FW).经RT-PCR获得了特异条带,说明利用改良的CTAB法从海马齿中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究. 相似文献
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人参植物高质量RNA的分离及其皂苷生物合成相关新基因GBR6的表达分析 总被引:3,自引:0,他引:3
为从富含多糖的人参植物组织中分离出高质量的RNA,使用改进的两种异硫氰酸胍法,可从人参植物根组织中提取到较高产量和质量的总RNA、每克新鲜组织的RNA产量在80~110μg之间;经琼脂糖凝胶电泳分析,可见到28S和18S rRNA两条完整、清晰的条带;紫外分光光度法测得的A260/A280比值位于1.8~2.0.而且,使用该改良法分离的RNA,可广泛用于检测基因表达的RT-PCR与Northern印迹杂交分析以及cDNA文库构建等植物分子生物学研究。 相似文献
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以不同葡萄组织为材料对目前常用的2种总RNA提取方法一改良SDS法和CTAB-LiCl法进行研究。2种RNA提取方法中均不使用酚。采用这两种方法从葡萄不同组织中均成功地提取到RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示28s和18SrRNA条带完整清晰。检测A260/A280 值分布在1.7-2.0之间,A260/A230值分布于1.9-2.3之间,说明RNA质量较高。管家基Actin和ACS5基因的检测表明2种方法所得RNA能够满足RT-PCR和基因克隆等研究需要。改良SDS法的RNA得率是CTAB-LiCl法的RNA得率的2~3倍,而CTAB-LiCl法获得的RNA纯度高。可以根据原料的数量和对RNA质量的要求来选取最佳提取方法。 相似文献
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提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究油菜种子和种皮发育的必要条件。现有方法因为油菜种子脂肪、多酚和多糖,难以快速获得完整、高纯度的油菜种子总RNA。本试验针对油菜种子和种皮特点,利用苯酚-氯仿抽提后用无水乙醇沉淀RNA,建立了在油菜种子和种皮中快速提取高质量总RNA的提取方法,电泳分析表明28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍;紫外分光光度计检测A260/A280介于1.8~2.0之间。用该法分离的RNA,已成功用于RT-PCR、Northern blot分析和基因全长的克隆等分子生物学研究。 相似文献