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《生物技术通报》1992,(2)
920526在大肠杆菌中表达鸡生长激素及其缺失变体〔俄〕/Gorbulev,V.G.…了Biotekhnologiya一19ox,i一20~25仁译自DBA,1991,10(12),91一06760〕 介绍了重组质粒的构建,该质粒在trp启动子调控下编码全长鸡生长激素(CGH,家禽生长激素)及其缺失变体的生物合成。同时介绍了用大肠杆菌DH一1生产上述蛋白。以质粒pCGHex为基础,构建了含CGH cDNA的质粒PtrpCGH、ptrp CGH一乙一3和ptrp CGH一乙一7,它们分别编码全长CGH、去掉N一端最初3个氨基酸的CGH和去掉N一端最初7个氨基酸的CGH。在基本培养基中加入户引噪丙烯酸进行诱导,转化的… 相似文献
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《生物技术通报》2003,(4)
030 0 2 3囊尾蚴膜联蛋白 32在大肠杆菌中的表达及纯化〔中〕/郭氵嬴军… / /生物工程学报 .- 2 0 0 1,17(5 ) .- 5 5 3～ 5 5 6在已获得的囊尾蚴膜联蛋白 (Annexin) 32cDNA的基础上 ,以PCR的方法在cDNA两端加上酶切位点 ,插入原核表达载体 pJLA 5 0 3,热诱导表达后 ,外源蛋白大部分以可溶形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 35 %。经(NH4) 2 SO4分级沉淀、DEAE阴离子交换层析及Sephacry1S 2 0 0凝胶过滤层析得到电泳单一条带 ,Westernbolt及抗凝血实验证明表达产物是有生物活性的。0 30 0 2 4猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920561链球菌抗肿瘤蛋白:在大肠杆菌细胞中的表达及其皿组蛋白的特性〔英〕/Kanaoka,M.”·,Agr-ie。Biol.Cbem一1991,55(3)。一743~750〔译自DBA,1991,10(12),。i一067。幻 用质粒pUC19作载体,将链球菌抗肿瘤蛋白SAGP(源千酿脓链球菌(召‘:e夕名oeoee。召尹犷。-g。介。。)Su染色体的Hindl片段)克隆到大肠杆菌 JMio3中。获取重组质粒pSP3i、ptae SPZ和ptac SP3,以便在大肠杆菌中表达SAGP。通过 (NH‘):50‘沉淀、Zx离子交换HPLC和凝胶过滤HPLC,从5.51大肠杆菌JMio3/质粒ptae SP培养液中纯化重组SAGPt纯度大于90%)。重… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(9)
92引47抗杀稻疽菌素一S的大肠杆菌TK121的杀稻瘟菌素一S一脱氨酶N末端氨基酸序列以及bsr基因的核普酸序列〔英〕/Kobayashi,K.…了Agrie.Biol.Chem一1991,55(12)。一3155~3157〔译自DBA,1992,11(5),92一02402〕 分离到抗杀稻瘟菌素一S(BS)的蜡状芽抱杆菌K55一51菌株,并分离到BS脱氢酶(BSD)。构建了含有BSD基因(bsr)的质粒pBSRs(10.5kb)。将其再克隆到枯草杆菌及大肠杆菌TK121中,已将bsr基因定位于pTK17中的一个1。5 kbEcoRI一BamHI片段上(内含一个单一的Bglll位点)。用M13链终止法测定DNA序列,在测定的Nde工一Hincn片段中… 相似文献
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《生物技术通报》1985,(6)
852421一个编码核酮糖一1,5一二磷酸狡化酶小亚基的豌豆核基因组织特异性和光调节表达〔英〕/Coruzzi,G.…了EMBOJ一1984,3(8)一1671一1679〔译自DBA,1984,3(20),84一09731〕 研究了在豌豆不同组织中编码核酮糖-1,5一二磷酸梭化酶小亚基(rbcs)的多基因族的一个成员表达。豌豆(品种Progressg号)基因组DNA用Bglll消化并连接到IO59DNA上。用““P标记cDNA克隆P5515的插人筛选了重组噬菌体,分离出6个编码的rbcs。将克隆的汇PS一3D的一个EcoRI片段继续克隆到pPR::6上,称为pPS一4.0;把这个含有rb。S基因的E。oRI一Clal片段再克隆… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920920分枝杆菌中的播人诱变和异常盆组〔英〕/Kalp-ana,G.V.一了Proe.Natl.Aead.Sei一U.S.A厂1991,88(12)。一5433~5437[译自DBA,1991,10(17),91一09668〕 用质粒pYUB36构建了耻垢分枝杆菌(对了卜o乙act。,艺u二‘拼eg必at云夕)基因组DNA文库。采用转座子Tnsseql,在大肠杆菌中克隆的分枝杆菌 DNA内制备了随机插入产物。含转座子的重组质 粒经同源重组被重新引入到分枝杆菌染色体中。以 此分离到几个随机营养缺陷株。为了将此方法延用 到结核分枝杆菌(M.tubec:105艺s)和BCG中, 将克隆的BCG甲硫氨酸基因在大肠杆菌接受Tns seql… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921209噬菌体T7第10基因翻译增强子(TREN)的化学-酶促合成及其构件的功能〔俄〕/Gureyich,A.1.…1 Bioorg.khim一1991,17(5)一e47~652〔译自DBA,1991,10(18),91一10247〕 为了这种分析,通过化学一酶促合成法制备了TREN完整序列及其近端和远端序列。用Bam Hl和E。。Rl二种限制酶将合成序列克隆到多拷贝质粒pFPC10中。获得的新质粒用千检测TREN近端区增强翻译的能力。编码人白细胞介素一3的人工基因(克隆于pFPC10中,不含TREN的一部分)在大肠杆菌中的表达很低。引入完整的TREN序列,使人白细胞介素一3的产量大大升高。取代pTE3 … 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923695分离自苏云金芽抱杆菌肯尼亚亚种的晶体蛋白甚因产物的杀虫特性〔英〕/Masson,L.…了Appl.Environ,Mierobiol一1992,58(2)一642~646〔译自DBA,1992,11(7),。2一03850〕 从苏云金芽抱杆菌肯尼亚亚种(Bac订如8‘h-。,￡。夕￡。。s‘,subsp.无e叮ae)一个大质粒分离到的前毒素基因被克隆到大肠杆菌JM83(质粒pKEN4)的BamHI DNA片段中。该基因(编码Cr刃E毒素)是作为4.skb片段克隆于质粒pMP-CV,在大肠杆菌HB101中作为相发光包涵体表达134kDa蛋白。用胰酶或家蚕胃计消化已溶解的包涵体,得到抗蛋白水解酶的65kDa蛋白。在强迫进食… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
920410可在蓝燕株系PCC7120中分析启动子的载体〔英〕/Tang,J.D.…了J.Baeteriol一1901,i了3 (s)一2729~2731〔译自DBA,1991,10(12),91一06654〕 构建了启动子探测载体pJL3,它含有一个多克隆位点、cat基因(不带启动子)以及转录终止子。经接合将其从大肠杆菌转移至Aoaba‘。a“P.PCC7iZo中。新质粒的成分来源于:质粒pRL25C (含大肠杆菌和兰藻复制子)、新霉素杭性标记、bom接合转移区、质粒pDUI(从丝态兰细菌分离到)以及pBR322的序列。描述了该载体质粒的详细构建过程。Aoaba。:a psbB基因编码光合系统n中的一种分子量47000的叶绿… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(4)
921317应用吸菌体展示文库制备抗体片段〔英〕/C lack-50。,T。…/Nature。一1991,352(6336)。一624~628〔译自DBA,1991,10(19),91一10869〕921318栽培花生徐州68一4核签因文库的构建〔中〕/梁涛…了莱阳农学院学报。一1990,7(3)。一iei~165 以EMBL4噬菌体多聚克隆载体将栽培花生徐州68一4的核DNA13~20kb片段进行了克隆,共得到重组噬菌体总数分别为5.6xl。,,8.4xl。,和1.3x10。的3个基因组基因文库。(孙国凤)921319弗兰克氏菌若因文库的构建〔中〕/秦敏…了西南农业学报。一1090,3(4)一56~60 采用cosm记质粒pLAFRI为载体,成功地构建… 相似文献
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《生物技术通报》1994,(2)
940738小南瓜花叶病毒外壳蛋白基因:克隆序列分析及其在烟草原生质体中1的表达〔英万Hu,J.S…了Areh.Virol一。1993,130(i一2)一17~31仁译白DBA,1993,12(19),93一11036〕 克隆了南瓜花叶就豆花叶病毒(SqMV)香瓜株系中间部分RNA的互补DNA。分离出SqMVmRNA,通过蔗糖梯度离心分级分离双链cDNA、用E。。Rl DNA一甲基化酶使之甲基化并将EcoRI-亲和性接头连到两侧末端。用EcoRI消化后,将。DNA克隆到质粒pUC18的EcoRI位点上。转化并筛选大肠杆菌DHS感受态细胞。设计了4种寡核普酸引物,用以在SqMV寡核昔酸序列和预测的多聚蛋白… 相似文献
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传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 总被引：6，自引：0，他引：6
核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 5kD表达蛋白 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920836用盆组聚合酶链反应构建小砚全长血型.蛋白签因〔英〕/Gu,H.一厂B ioehe皿.Biophys.Res.Commun一1991,177(i)一202~208〔译自})BA,1991,10(15),91一08450〕 分别从贫血小鼠脾基因库(质粒pBR322)和小鼠基因库(质粒pUC18)中分出小鼠血型搪蛋自一A基因不完全cDNA克隆(质粒pGP315)和基因组克隆(质粒pGX7,含第一个外显子和转录起始位点附近的序列),并定序。由于缺乏构建小鼠全长血型糖蛋白一A基因的限制位点,用聚合酶链反应拼接这两部分序列克隆擂人的成分,获得全长的重组DNA片段(IO53bp,含小鼠血型糖蛋白A eDNA)。用5种DNA… 相似文献
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性逆转石斑鱼性腺差异表达基因的克隆和筛选 总被引：4，自引：0，他引：4
以 17α 甲基睾丸酮 (17α MT)饲喂 2～ 4龄赤点石斑鱼 (Epinephelusakaara) ,成功地促使其性转变为具有生殖功能的雄鱼 .应用抑制性差减杂交 (SSH)技术构建了石斑鱼性反转前后性腺组织的SMARTcDNA文库及其cDNA差减文库 ,从中随机挑取 12 0 0个克隆进行了PCR和斑点杂交筛选 ,得到 12 0个差异表达cDNA片段 .挑选 71个cDNA克隆测序 ,将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较 ,发现有 5 1个cDNA片段序列无明显的同源性 ,2 0个片段与报道的基因有较高同源性 .在这 2 0个具同源性的片段中有 3个片段可能是与性别分化密切相关的重要功能基因 ,它们是钙调蛋白基因、活性蛋白激酶C受体基因和一氧化氮合酶蛋白抑制剂基因 .这 3个基因被分别命名为鱼钙调蛋白基因 (GenBankaccession :AY2 8136 3)、鱼活性蛋白激酶C受体基因 (GenBankaccession :AY2 8136 4)和鱼一氧化氮合酶蛋白抑制剂基因 (GenBankaccession :AY2 8136 5 ) . 相似文献
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《生物技术通报》1986,(6)
862962装配型质粒克隆用载体〔专,英]Hunter,1.5.了European Patent Appl.EP 0146368.Pub.26.06.85.Appl.GB833659,filed 16.12.83〔译自CBA,1985, (9),2835」 构建了一个双功能的杂种装配型质粒克隆载体,它能够在大肠杆菌和链霉菌属中复制。这个载体叫pPZ74,它可能用于在大肠杆菌中构建基因文库,然后,可以下经进一步的DNA操作,即能被转回到链霉菌中。 (郭殿瑞)862963编码兔肿瘤坏死因子(TNF)的DNA,具有上述插人的DNA的运载体,用上述载体转化的寄生,兔TNF多肤和这种肚的生产方法〔专,日〕/Yamada,M一了European Patant Appl。… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922993苏云金杆菌蜡螟亚种新型d一内毒素基因Crylg的核曹酸序列〔英〕/Smuleviteh,5.V.…了FEBSLett一1991,293(i一2)一25一25〔译自DBA,1992,11(4),92一01452」 采用亲和纯化的抗CryIG纯蛋白单特异血清进行筛选,从噬菌体卜pSLS基因文库中分离出B.t.gll一67的杀虫晶体蛋白CryIG的基因即crylg基因。对3种呈免疫反应的克隆进行限制性作图。含全长crylg基因的质粒pOC10经Xbal切除后删去噬菌体部分。所得质粒pOK10作图后,将其Kpnl一Xbal插入子(含有全长基因及两翼序列)克隆到pUC18内,产生pKP7。如此即可在大肠杆菌中经lac启动子调… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(6)
922110在噬菌体表面装配组合抗体库:genelll位点〔英〕/Barbaslll,C.F.…/Proe.Natl.Aead.Sei.U.S。A一1991,55(18)一7975~7982仁译自DBA,1991,10(23),13354〕 建成phagemid pCombs系统,以使线型噬菌体M13(克隆于大肠杆菌XLI一Blue)表面的组合抗体Fab库呈单价。Fab片段与gene一111蛋白C-末端区融合。表面带有人抗一破伤风类毒素克隆10C Fab片段的噬菌体与非特异性噬菌体相比抗原覆盖表面积增大1000~100000倍。用此系统分拣预先鉴定的人组合抗一破伤风类毒素Fab基因库,以验证其可用性。此基因库已重新构建于pComb3中,保留了原有的… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(… 相似文献