短链脂肪酸作用下伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制的探讨

目的了解短链脂肪酸(SCFA)作用伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制。方法将SCFA作用伤寒沙门菌感染巨噬细胞8 h后,检测TNF-α、caspase3、caspase8、caspase9及NO的产生量,同时检测加入caspase3、caspase8、caspase9抑制剂和TNF-α抗体后的细胞凋亡率。结果作用8 h后caspase3、caspase8及NO、TNF-α的产生量均高于对照组(P0.01)。caspase3、caspase8抑制剂和TNF-α抗体均能不同程度抑制SCFA作用伤寒沙门菌诱导的巨噬细胞凋亡(P0.01)。结论 SCFA作用伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡可以通过NO及TNF-α介导,caspase3和caspase8参与的外源性凋亡途迳。     

皮肤损伤后SDF-1分泌量的变化及其受体CXCR4在表皮组织中分布表达的实验研究

目的:研究皮肤受损后不同时间点伤口液和皮肤组织中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的含量变化,同时验证SDF-1受体CXCR4在表皮组织内的分布.方法:分别在伤后即刻、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、96小时留取Ⅱ°烧伤患者的大疱液,用ELISA法检测伤口液中SDF-1的含量;用免疫组织化学染色的方法检测伤后1天、3天、7天创缘表皮内SDF-1的表达水平和其受体CXCR4在表皮组织上的分布.结果:用ELLSA法检测发现在受伤后几小时内大疱液中SDF-1的含量开始升高,1天后达到最高水平,伤后的3天SDF-1分泌量逐渐下降,而免疫组织化学染色结果显示创缘表皮层和真皮层上有散在的SDF-1分泌,且分泌量随创面愈合时间的推移逐渐增多;表皮细胞表达有CXCR4,且越靠近表皮基底层细胞膜的阳性越强.结论:SDF-1在皮肤损伤后表达量的增多可能对皮肤组织创伤修复起一定的调节作用.     

人同源盒基因NKX3.1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP 中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,将NKX3.1 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1（+）中; 将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3.1 cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3.1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3.1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确. pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3.1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA 48 h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNA ladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 NKX3.1, 转染PC3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用     

Nutlins类似物NL-86诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的 观察新型Nutlins类似物NL-86在体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用的分子机制.方法 采用MTT法检测NL-86化合物对HeLa细胞增殖的影响;用 FITC-Annexin V及碘化丙锭（PI）双染法,通过流式细胞仪（FCM）检测NL-86诱导HeLa细胞凋亡情况;用Western 印迹检测PARP[poly（ADP-ribose）polymerase]、pro-caspase 3、8、9的变化,并利用活力检测试剂盒检测caspase 3、8、9的活力,初步确定其诱导凋亡的通路.结果 不同浓度的NL-86 对于HeLa细胞的存活率均具有一定影响,并以浓度依赖的方式诱导HeLa细胞凋亡;随着NL-86浓度的增加,PARP被切割、HeLa 细胞pro-casepase 3、8的含量下降,但 pro-caspase 9无变化.活力测定结果显示caspase 3、8被激活,caspase 9无变化.结论 NL-86化合物能够有效地在体外诱导HeLa 细胞凋亡,且可能依赖于caspase 3、8相关的死亡受体凋亡途径,为进一步研发治疗宫颈癌等肿瘤疾病的药物奠定了实验基础.     

抗Caspase-3核酶M1RNA的制备与体内外活性鉴定

为评价抗caspase 3核酶在阻抑细胞凋亡发生中的潜在价值 ,以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,设计合成 3个特异性针对人caspase 3的核酶pM1 GS716、pM1 GS337和pM1 GS2 35 ,并对它们的体内外切割活性进行探讨 .3 2 P标记的caspase 3基因片段体外转录物作为靶RNA ,体外切割实验表明 ,pM1 GS716和pM1 GS337均有切割活性 ,其中pM1 GS716的切割效率可达到 93% .3个核酶转染HeLa细胞 ,评价其在体内的切割活性 .在TNF α作用下 ,转染pM1 GS716的HeLa细胞内caspase 3mRNA下降了 75 % ,蛋白含量下降了 6 9% ,caspase 3蛋白酶活性下降了 5 2 % .Hoechst 332 5 8染色表明 ,细胞凋亡率较对照明显下降 (分别为 2 1 6± 0 7%和 4 9 4± 0 2 % ,P <0 0 1) .提示体外制备的pM1 GS716具有良好的特异催化切割活性 ,有望通过切割caspase 3而抑制细胞凋亡 .     

谷氧还蛋白1调节高糖诱导的心肌细胞自噬

谷氧还蛋白1（Grx1）在体内具有广泛的抗氧化、抗凋亡作用,与氧化应激损伤导致的糖尿病和心肌病等多种疾病的发病机制密切相关. 研究表明,糖尿病心血管病与自噬调节异常密切相关,但糖尿病心血管病变时自噬水平如何调节才能够保护受损的心肌还尚未定论.为研究自噬在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用及其与Grx1的关系,以明确Grx1对高糖诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及相关机制,本研究以高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2建立高糖损伤模型,采用氧化还原蛋白免疫印迹法检测蛋白质的氧化水平.免疫印迹检测活性caspase 3蛋白和自噬蛋白Beclin1和LC3以及抗凋亡蛋白Bcl 2的表达水平.研究发现,高糖可诱导蛋白质的氧化水平增加,而Grx1可拮抗高糖诱导的H9c2细胞中蛋白质的氧化.并且含血清的高糖（25和50 mmol/L）作用H9c2心肌细胞后,自噬蛋白Beclin 1表达水平在6～48 h显著上调.同时发现,活性caspase 3水平也呈时间依赖性表达上调,caspase 3和自噬蛋白表达水平的同趋势增加,说明升高的自噬水平与心肌细胞凋亡的调节有关.Grx1保护组的自噬蛋白及活性caspase 3表达水平均显著下调,Grx1抑制剂镉组可拮抗Grx1调节的自噬蛋白和凋亡蛋白水平,说明Grx 1通过抑制自噬及caspase 3水平抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡.以上研究结果提示,通过提高Grx1/GSH抗氧化系统功能,调节氧化还原稳态,可以有效减少高糖诱导的心肌损伤,保护糖尿病心脏功能.     

Commonly used caspase inhibitors designed based on substrate specificity profiles lack selectivity

Caspase regulation and activation have been extensively studied since the discovery of this class of proteases almost two decades ago, yet surprisingly few tools are available that can be used to monitor individual caspase activities [ 1 ]. The most commonly used tools include caspase-specific anti-sera as well as fluorogenic substrates and inhibitors. Unfortunately, antibody reagents often do not provide an accurate measure of caspase activity since several caspase family members （caspases 8/10 and 9） do not require proteolytic processing for activation [2, 3]. Furthermore, recent evidence suggests that caspase-7 （an executioner caspase） activation occurs via a catalytically active full-length intermediate that cannot be differentiated from the non-cleaved inactive zymogen using antibodies [4, 5].     

人表皮生长因子的研究进展

人表皮生长因子是激活表皮生长因子受体的生长因子家族的典型成员,由人体的多个组织器官合成与分泌,通过结合受体激活一系列信号途径,调控细胞的增殖、分化和迁移等。近年来,有关人表皮生长因子的研究已扩展到其在人类生理和病理作用的领域,尤其在组织再生和伤口愈合方面成为研究热点。文中综述了人表皮生长因子的研究进展,简要描述了其基因和蛋白的结构与特点、作用机制与生物学效应,重点介绍该生长因子在胃肠溃疡愈合、皮肤伤口修复和肿瘤病理过程中的作用与影响,从而为相关研究提供辅助信息。     

猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究

表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物, 在自体眼表修复及组织工程生物角膜的构建中将产生不可估量的作用. 将体外分离培养的2 ~ 4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养(Transwell法), 于共培养前后使用流式细胞仪、RT-PCR和免疫组织 化学技术对其分化情况进行检测和鉴定. 并于第2, 4, 6, 8和10天进行免疫组织化学染色观察表皮干细胞转分化的比率. 实验采用条件培养基诱导法作为对照. 表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志, K15和整合素β1阳性, K3/K12阴性; 共培养后转为表达K3/K12, 从基因水平和蛋白质水平表现出角膜上皮细胞的特征, 但是条件培养基诱导法阳性率较低. 可见, 表皮干细胞具有可塑性, 在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下, 可以横向分化为类角膜上皮细胞, 有可能重建角膜上皮, 进行自体生物角膜的构建.     

河蚌插核育珠的固核措施

河蚌插核后,核往往会顺手术伤口或由表皮穿孔掉落出来,这种现象称为脱核。在手术蚌伤口没有愈合的整个体复期都能发生。脱核率可高达50—70％,有时甚至脱光。     

阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡

阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力,发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后,采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平;RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升;蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达,PARP出现剪切体. 进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡. 结果显示,阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力,并通过激活caspase 通路诱导NTera-2细胞的凋亡,为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础.     

北方地区藤本类忍冬叶表皮结构及其生态适应性比较研究

利用光镜和扫描电镜观察了8种在北京地区引种栽培成功的藤本类忍冬的叶表皮形态,观察指标包括气孔器、表皮毛、表皮细胞特征等.结合其在北京的栽培状况,发现叶片表皮形态和解剖结构与生态适应性之间有很强的相关性.自然分布广、适应性强的种在叶表皮形态上表现出气孔密度大、表皮细胞小、被毛或叶革质等特征.金银花、红白忍冬、淡红忍冬是8种忍冬中适应性最强的,具有推广应用价值.本研究为藤本类忍冬在北方地区推广应用提供了理论基础.     

norA基因mRNA表达水平与表皮葡萄球菌氟喹诺酮耐药性的关系

目的:探讨表皮葡萄球菌多药转运蛋白norA基因表达水平与氟喹诺酮耐药性的关系.方法:收集临床分离表皮葡萄球菌菌株,用纸片扩散法(Kirby-Bauer)检测50株表皮葡萄球菌对抗茵药物的敏感性,筛选出耐药和敏感菌株,以标准菌株ATCC12228作为对照;提取表皮葡萄球菌的总RNA,应用荧光实时定量RT-PCR检测表皮葡萄球茵多药转运蛋白norA基因mRNA表达水平.结果:所有菌株均检测到norA基因,临床分离耐药菌株norA基因mRNA表达水平明显高于敏感菌株,统计学分析差异有显著性(P＜0.05).结论:对氟喹诺酮类耐药的表皮葡萄球菌norA基因过度表达,其可能是表皮葡萄球茵耐药的原因之一.     

眼镜蛇咬伤致皮肤溃疡的护理

临床上救治眼镜蛇咬伤者脱离生命危险后,有的人留下了伤口溃疡或造成伤肢致残。眼镜蛇含有血循毒素对伤口造成溃疡,这与蛇毒中的卵磷脂酶和水解蛋白酶有关。蛋白质水解酶可以破坏血管壁．由此引起出血及组织损害,甚至导致大片组织坏死。局部处理不当．可加重局部的炎症及坏死。眼镜蛇咬伤的伤口特点是：表皮发黑、     

中国石灰岩专性凤仙花叶表皮特征及其分类学意义

通过光学显微镜和扫描电镜技术对中国产的8种凤仙花科植物叶表皮微形态特征进行了实验研究,其中6种产于石灰岩地区,另外2种作为对照.结果表明,中国石灰岩地区的6种凤仙花的叶表皮微形态上、下表皮差异明显,上表皮细胞为不规则形和多边形,一般不具气孔器;下表皮细胞均为不规则形,均具气孔器,气孔器多为不等型.上、下表皮细胞形状、垂...     

人表皮细胞生长因子及其研究进展

表皮细胞生长因子是人体内一种重要自分泌/旁分泌的生长因子。人表皮细胞生长因子及其受体调控细胞增殖、分化、迁移、生存等与细胞命运密切相关的过程,在细胞发育、伤口愈合、器官发生中发挥重要作用。本文将对人表皮细胞生长因子的合成、分泌、生化特性、分子结构、家族、受体、信号通路、生物学活性、生理功能、应用及制备方法等方面进行综述。     

沉默UVRAG基因在二烯丙基二硫诱导K562细胞中caspase3的表达

目的:沉默UVRAG基因在DADS诱导K562细胞中观察caspase3的表达。方法:以K562细胞为细胞模型,将构建成功并筛选出最有效干扰抑制UVRAG基因的si RNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂质体转染法转染白血病K562细胞,组别为:空白对照组,转染试剂组、阴性对照组,阳性对照组,转染24小时后,利用QT-PCR检测UVRAG m RNA的表达水平以此观察干扰效果,再以40 mg/LDADS处理转染试剂组12小时,采用蛋白印迹(Western Blotting)技术检测凋亡相关基因caspase3的表达。结果:QT-PCR显示:与空白组相比,UVRAG m RNA表达明显减少,表明沉默UVRAG基因成功;Western Blotting显示:DADS处理的干扰成功的K562细胞12小时后,检测到caspase3的蛋白表达水平下降。结论:沉默UVRAG基因能使白血病K562细胞中凋亡相关基因caspase3的蛋白表达水平下降,提示抑制UVRAG表达的同时也可能抑制DADS诱导K562细胞的凋亡。     

野丁香属植物叶表皮形态特征研究

在光学显微镜和电子扫描显微镜下观察了茜草科(Rubiaceae)野丁香属(Leptodermis Wall.) 35种8变种植物的叶表皮微形态特征.结果表明,野丁香属植物叶表皮细胞为多边形或不规则形状,垂周壁平直、弓状或波状.气孔器全部位于下表皮,有辐射型、平列型两种,其中平列型较为普遍.表皮毛在上下表皮都有分布,有单...     

Thx cells: a new subset in T helper cells, are they born to die

A new subset of T helper namely T helper x (Thx) was differentiated ex vivo from spleens by primary activation with α-CD3 and α-CD28 and later differentiated in the presence of α-IL-4, α-IFN and α-IL-12. Thx cells exhibit characteristic cell surface markers and intracellular cytokines patterns. These cells are extremely sensitive to reactivation-induced apoptosis. We further compared death pathways in all the T Helper cells that we had differentiated and found that Thl cells exhibited a Fas-FasL/ caspase dependent apoptotic pathway, Th2 cells died by a pathway independent of Fas/FasL and caspase 8. α-FasL antibody, ZVAD and TR6 were able to rescue Th1 cells from apoptosis confirming that Thl cells die by     

A novel small molecule inhibitor targeted at Bcl-2

Recently, the heterocyclic compound 8-oxo-3-thiomorpholino-8H-acenaphtho[1,2-b]pyrrole-9-carboni-trile (S1) was synthesized and shown to induce apoptosis in both (H22) hematoma and (MCF-7) ade-nocarcinoma cells. The IC50 values of S1 against the two cell lines were 0.17 and 0.09 μmol/L, respec-tively. Furthermore, the apoptosis-inducing activity of this compound was highlighted both in vivo and in vitro. Subsequent experiments identified Bcl-2 as the primary target of S1, as a significant reduc-tion in Bcl-2 protein levels was observed in H22 cells following a two-hour treatment with 10 μmol/L S1. While rapid depolarization of mitochondrial membranes led immediately to caspase 9 activation, no changes were identified in either caspase 8 levels or levels in Bcl-2 mRNA. These data were consistent with the results of circular dichroism (CD) spectra analysis, revealing that S1 inactivated the Bcl-2 protein by destroying its critical alpha helices. Taken together, these results suggest the potential of S1 in the development of new therapeutic agents.