荧光染料菲啶溴红的合成

荧光染料菲啶溴红(简称EthBr或EB)与核酸(DNA、RNA和双链多聚核苷酸)有特异的结合能力,它能反映核酸的量与结构的变化,对体内核酸的合成和有关的核酸酶有抑制作用。菲啶溴红原是五十年代合成的一种抗锥虫药物,1964年发现它与核酸结合后荧光显著增强的现象以来,即被广泛地用作核酸的一     

荧光探针菲啶溴红(Ethidium Bromide)测定微量核酸的方法

一、前言核酸是重要的生物大分子,是现代生物学、医学等研究的主要对象之一。在核酸的研究中,常采用比色法和紫外分光光度法测定核酸的含量,这些方法步骤繁琐,灵敏度不高。本文探讨六十年代后期由Le Pecq等提出的,并由S.P.Ananda应用到生物组织样品中的一种新的测定核酸的荧光方法。常温下核酸自身荧光很弱,不能直接探测到。利用荧光探针——菲啶溴红(简称 Eth Br)插入核酸的双链区时,其量子产率大大增高,它和核酸形成一     

受照狗血清-菲啶溴红络合物的荧光变化

自六十年代后期Lepecq提出利用荧光探针菲啶溴红(Ethidium Bromide)测定微量核酸的荧光方法以来,已广泛应用在生物组织细胞样品中核酸测定上。1972年Richard C.K.用菲啶溴红染料测定了正常人血浆中核酸的含量。1979年我们曾用此法测定组织中微量的     

核酸荧光探针新进展

核酸荧光探针新进展田少敏阮康成（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词核酸荧光探针核酸荧光探针作为核酸标记的工具,具有方便、快速、灵敏和安全等特点,近年来得到很大发展,不但种类明显增加,性质上也有进一步改善。下面就笔者得到的最新资料,...     

基于荧光染料PicoGreen和核酸适配体的伏马毒素B1检测方法

伏马毒素B1是主要存在于玉米及玉米制品中的一种可以引起癌症的霉菌毒素。针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。本研究利用核酸适配体与伏马毒素B1结合后不再结合其互补核酸序列的选择性以及Pico Green与双链DNA结合的特异性,开发了一种快速检测伏马毒素B1的适配体方法。Pico Green与双链DNA反应15 min后激发产生的荧光达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。该方法的最低检测限为0.1μg/L(0.1 ppb),线性范围为0.1-1μg/L(0.1-1 ppb),整个检测流程可在40 min内完成。特异性试验显示伏马毒素B1适配体与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素、桔毒素和玉米赤霉烯酮等常见霉菌毒素无交叉反应。结果表明适配体方法与基于抗体的检测伏马毒素B1商品化ELISA试剂盒相当,Kappa值为0.857。由于核酸适配体比抗体成本低,检测时间短,因此基于核酸适配体的方法比基于抗体的ELISA方法更具有推广应用价值。     

核酸染料Genefinder使用方法的比较

目的:使用核酸染料Genefinder检测琼脂糖凝胶中的核酸,通过比较预染样品法、胶内染色法和后染法三种染色方法的染色效果,了解该染料的染色特性,以期找到性能稳定,染色效果好的染色方法.方法:在琼脂糖凝胶电泳中,以不同的染色方法使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析.结果:使用电泳后染色方法染色效果较好,胶内染色法次之,预染样品法效果最差.结论:核酸染料Genefinder会干扰DNA的迁移效率,因此,使用Genefinder进行电泳后染色是一种较好的染色方法.     

绿色荧光蛋白的首次应用者——查尔菲

绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）是20世纪60年代发现的一种在紫外线下可发出绿色荧光的蛋白,进入20世纪90年代后开始被广泛应用于生命科学和环境检测等研究领域。1994年,查尔菲首次成功将GFP转入细胞内并观察到绿色荧光,从而开创了GFP应用的先河,为随后GFP的广泛应用和深入研究奠定了基础。查尔菲是一位线虫触觉机理研究领域的专家,但在GFP应用方面的贡献却使他于2008年分享了诺贝尔化学奖。     

荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体

以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。     

黄连素作为核酸染料染色效果的探讨

目的:黄连素作为核酸染料与EB染色效果的比较。方法:通过不同种的提取工艺来提取黄连素,测定荧光光谱,选择合适的溶剂,进行琼脂糖凝胶电泳。结果:各种方法提取的黄连素都能够进行染色。结论:黄连素作为核酸染料染色效果低于EB,还有待进一步探讨。     

核酸测定中的有机荧光探针

对历来利用荧光分析技术研究和定量测定核酸的情况加以简单的综合评述。介绍了截至目前用于核酸研究和测定的一些主要有机荧光试剂,并对新兴的如有机纳米探针和分子信标等荧光分析技术以及有机荧光试剂的发展前景进行评述。     

两种核酸染料染色效果的比较研究

用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。     

核酸染料对DNA条带形态产生的影响分析

使用核酸染料对DNA片段进行前染色时,DNA条带会出现弯曲、变形、拖尾等现象。这些现象是由核酸染料造成的,并且与核酸染料的浓度及DNA的上样量成正相关,另外,还与分子量大小、琼脂糖凝胶的质量与浓度、电压相关。选择合适的核酸染料及染色方式可以减少DNA条带形态改变的概率,得到较好的电泳结果。     

荧光染料Hoechest 33342与干细胞研究

Hoechest 33342是一种可以与DNA结合的荧光染料,在细胞周期研究方面得到广泛的应用。最近研究发现,某些癌细胞和干细胞可以将进入细胞的Hoechest 33342排出细胞外,利用流式细胞仪可以将这些不着色的细胞加以分离。现在已经从许多组织中分离得到了这种细胞。许多研究也提出了利用该方法分离干细胞的可能性。     

保存胚胎材料中荧光染料的方法

本文介绍了保存胚胎材料中荧光染料的技术,给两栖类胚胎注射荧光染料后,应用所介绍的方法制备切片,既能保存荧光又能正确判断染料在各层细胞之间的传递情况。     

一种灵敏的单链核酸的探针——Tb_(3+)核酸复合物的荧光特性的研究

本文报导了一种对单链DNA灵敏的探针——Tb~(3 )研究了Tb~(3 )-核酸复合物的荧光光谱及激发光谱,实验结果表明,Tb~(3 )与核酸的结合位点主要有两个;核酸上的磷酸部位及鸟嘌呤上的电子供体部位.本文提出了Tb~(3 )可作为测定单链DNA及RNA量的一个较灵敏的方法.     

DNA的荧光染料DAPI的特性及其应用

在检测DNA的各种染料中,DAPI具有专一性强、灵敏度高、使用简便等特点。本文简要地就有关DAPI的文献作一综述,并介绍我们在使用DAPI时的一些经验。一、DAPI的物理化学性质DAPI是一种二价阳离子的荧光染料,由Dann等于1971年合成。化学名为4′6-二脒基-2-苯基吲哚(4′6-Diamidino-2-phenylindo-le·2HCl)。结构式为分子量350.3。黄色晶体,易溶于水,最大溶解度为2.5％。可被高浓度的两价或高价阴离子     

菲咯啉铜配合物与核酸结合特性的研究

用电化学方法研究了菲咯啉铜配合物分别与ＣｔＤＮＡ、热变性ＣｔＤＮＡ、ｐｏｌｙ（ＡＵ）作用的循环伏安行为,得到了（ｐｈｅｎ）２Ｃｕ＋与它们的表观结合常数Ｋ及结合位点数ｎ,结果表明Ｂ型ＤＮＡ是（ｐｈｅｎ）２Ｃｕ＋的最适结合底物     

近红外荧光染料IR-783介导的肿瘤成像

目的评估近红外荧光染料IR-783在犬自发性肿瘤中的特异性成像。方法将IR-783染料(5μmol/kg)腹腔注射荷瘤裸鼠,通过活体成像仪检测IR-783的代谢周期,在此基础上,将IR-783染料(1.5μmol/kg)通过后肢静脉注射入自发肿瘤犬体内,5 d后手术切除肿瘤组织,分别进行荧光成像、组织切片HE染色、冰冻切片荧光观察。结果 IR-783染料注射荷瘤裸鼠后可以在肿瘤部位检测到特异性荧光,连续观察8 d,仍有较强的荧光。IR-783注射自发肿瘤犬5 d后,可在肿瘤组织中检测到特异性荧光。结论近红外荧光染料IR-783能够被肿瘤组织特异性吸收,可用于犬自发性肿瘤的特异性诊断,具有重要的临床应用前景。