L-苹果酸产生菌F-871变株合成延胡索酸酶的研究

温特曲霉Aspergillus wentii F-871是高效转化延胡索酸为L-苹果酸的变株,通过对其合成延胡索酸酶的因素进行研究,筛选了培养基主要营养元素有L-精氨酸、酪氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸及相应含量丰富的酵母粉、黄豆饼粉和玉米浆。该变株生长阶段条件为：pH6．0,温度2830℃,培养时间为24h,酶合成阶段最适条件：接种量15％,初始pH6．8,培养温度2830℃,装量8090ml／500ml,酶合成周期40h。在优化的培养条件下,F-871变株延胡索酸酶合成水平可达156．33u／g,100ml发酵液中的酶可将延胡索酸转化为L-苹果酸32．06g,比国内一步发酵法产酸88．5％提高约4倍,转化率由85％提高到106．87％,发酵周期由90h缩短至57h。     

L-苹果酸产生菌F-871变株合成延胡索酸酶的研究*

温特曲霉AspergilluswentiiF-871是高效转化延胡索酸为L-苹果酸的变株,通过对其合成延胡索酸酶的因素进行研究,筛选了培养基主要营养元素有L-精氨酸、酪氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸及相应含量丰富的酵母粉、黄豆饼粉和玉米浆。该变株生长阶段条件为:pH6.0,温度2830℃,培养时间为24h,酶合成阶段最适条件:接种量15%,初始pH6.8,培养温度2830℃,装量8090ml/500ml,酶合成周期40h。在优化的培养条件下,F-871变株延胡索酸酶合成水平可达156.33u/g,100ml发酵液中的酶可将延胡索酸转化为L-苹果酸32.06g,比国内一步发酵法产酸88.5%提高约4倍,转化率由85%提高到106.87%,发酵周期由90h缩短至57h。     

温特曲霉延胡索酸酶的提纯及性质研究

报道经硫酸鱼精蛋白沉淀、硫酸铵分级沉淀和葡聚糖凝胶G-200柱层析,再经冰冻干燥后从温特曲霉F-871菌体中获得延胡索酸酶,纯化倍数为31.70,回收率为36.64％,酶比活性为24.6U/mg。酶学性质研究表明:酶作用最适pH和温度分别为8.0和30℃,稳定pH范围为6.0～8.5,酶在35℃下保温30min后仍残留约90％以上的活力。     

L-苹果酸产生菌筛选及高产突变株诱变选育

通过广泛收集和分离,获得根霉属(Rhizopus)、曲霉属(Aspergillus)及裂褶菌属(Schizophyllum)等属菌株897株。产酸指示平板上的变色圈测定结果表明,它们中间628株为产酸菌。通过纸层析对产酸菌发酵液酸谱的分析,获得129株L-苹果酸产生菌,经进一步测定发酵液中L-苹果酸的含量,筛选出以葡萄糖为原料,摇瓶发酵140小时,L-苹果酸产率48．37g／L,对糖转化率48．37×10^-2 的菌株LMO2。经初步鉴定,这一菌株为曲霉(Asper-gillus sp.)以LM02作为出发株,采用亚硝基胍、自然污染细菌、甲基磺酸乙酯及紫外线进行诱变处理,选育出葡萄糖为原料,L-苹果酸产率较高的突变抹N1-14、N1-14、NE1412、NU1416及NU1419。其中N1-14 的L-苹果酸产量最高,比出发株提高46．2×10^-2。N1-14 的菌丝生长速度快,产孢能力强,摇瓶发酵葡萄糖140小时,平均L-苹果酸产率为72．53g／L,对糖转化率53．74×10^-2。全发酵液经薄层层析测定,不含黄曲霉毒素。发酵产物分离提纯后,得到白色粉末状结晶,经纸层析、质谱及红外光谱测定,证明为L-苹果酸。     

温特曲霉转富马酸为L—苹果酸的初步研究

从大量霉菌在选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｗｅｎｔｉｉ）Ａ５－６１。在摇瓶培养条件下,３２℃ ９６小时,产Ｌ－苹果酸达１０．４９ｇ／１００ｍｌ,对富马酸的转化率达９０．８０％。利用菌体细胞,进行酶转化试验,结果表明：１．６ｇ湿菌体接入２５ｍｌ含富马酸１０．０％（用ＮａＯＨ中和至ｐＨ７．０）的转化液中,３５℃１６－２４小时,连续转化三次,分别产生Ｌ－苹果酸９．６１     

曲霉F-817菌株几丁质酶的产生条件

从采自河南各地的三十一份土样中分离筛选到一株能分泌胞外几丁质酶的曲霉(Aspergillus sp.)F-817。该菌株几丁质酶产生的最适碳源是1％的胶体几丁质,表面活性剂Tween-20、Tween-80能显著提高酶的产量。产酶的最适温度和起始pH值分别是28～32℃及pH5。     

温特曲霉转富马酸为L-苹果酸的初步研究

从大量霉菌中选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉(Aspergilluswentii)A     

甲壳素脱乙酰酶产生菌产酶条件的优化

采用斜面培养和液体发酵培养产甲壳素脱乙酰酶的真菌构巢曲霉,并且研究了产酶条件。结果表明,构巢曲霉的最适产酶条件为：发酵培养基初始pH值为6.5、发酵时间为96h、培养温度为31℃、碳源浓度为2%、氮源浓度为2%、金属离子浓度为0.01mol/L、接种量为6%。     

反应分离耦合技术生产L-苹果酸工艺过程的优化研究

运用生物反应分离耦合原理 ,以富马酸钙为底物 ,采用游离延胡索酸酶 ,直接转化生成苹果酸钙。该法相对目前广泛采用的包埋式固定化方法具有工艺流程短、操作简便、转化率、收率高等特点。研究结果表明 ,转化温度为 40℃、Ph为 7.0～ 7.5时 ,每升延胡索酸酶液能在 2.0～ 2.8h间将 3.2kg的富马酸钙转化生成苹果酸钙 ,转化率高达 99.9% ,富马酸在产品中的残留在 0.1%左右 ,产品符合美国药典标准 ,成本与化学合成法生产的DL 苹果酸相当     

温特曲霉转富马酸为L-苹果酸的初步研究*

从大量霉菌中选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉(Aspergillus wentii) A5-61。在摇瓶培养条件下,32℃ 96小时,产L-苹果酸达10.49g/100ml,对富马酸的转化率达90.80%。利用菌体细胞,进行酶转化试验,结果表明：1.6g湿菌体接入25ml含富马酸10.0%（用NaOH中和至pH7.0）的转化液中,35℃16～24小时,连续转化三次,分别产生L—苹果酸9.61g/100ml、9.73g/100ml、6.93g/100ml。对菌体整体细胞酶学性质的研究表明,其最适反应温度35℃,最适反应pH7.0,Cu2＋对该酶有明显的抑制作用,该酶的Km＝0.154mol/L,Vmax＝0.0571mol/L·h。     

温特曲霉HD_1的鉴定及其对氧蒽类染料脱色特性的研究

从土壤中分离到1株染料脱色真菌,经鉴定命名为温特曲霉HD1（aspergilluswentiiWehmerHD1）.该菌对氧蒽类染料虎红具有很强的脱色能力。温度在28～40℃之间,HD1对虎红的脱色率为93～99％,最适脱色温度为33℃;pH值在4.0～8．0之间,其脱色率为89．3～98．8％,最适脱色pH值为6．0。培养基、碳源、氮源及接种量对其脱色率均有影响。该菌对虎红的脱色酶为组成酶,主要分布在细胞内。染料的加入能改变脱色酶在胞内外的分配比例,加速胞内脱色酶的合成。虎红脱色产物的紫外可见光光谱分析表明,可见光区544．8nm处的吸收峰完全消失,而紫外光区的吸收峰则减弱、移位、消失（244～277nm）或稍有增加（242nm以下）。     

宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质*

L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3．8±0．2。在pH2．5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0．263g／L、0．278g／L和0．415g／L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr／min、mL,酪蛋白为最适底物。在pH2．0～5．0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外,还研究了金属离子对酶活性的影响。     

宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质

L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3．8±0．2。在pH2．5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0．263g／L、0．278g／L和0．415g／L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr／min、mL,酪蛋白为最适底物。在pH2．0～5．0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外,还研究了金属离子对酶活性的影响。     

棒曲霉22产木聚糖酶的研究

从105株霉菌和酵母菌中筛选到一株木聚糖酶活力较高的棒曲霉(Aspergillua clavatus)菌株22。该菌株适宜的产酶培养基为(g/1):蔗渣半纤维素30,NH₄NO₃ 5,酵母膏5,麸皮10,吐温801和少量无机盐,初始pH5.5。最适的孢子接种量为4.9×10⁶个/ml。在上述培养基中28℃振荡培养72h.木聚糖酶活力可达335.9u/ml。酶反应的最适温度为50℃;最适pH为4.8,在pH 6-11酶活性稳定。     

黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究*

黑曲霉A3（AspergillusnigerA3）的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ。经7％凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份。经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5．5和6.1。SDS－PAGE测得亚基分子量（Da）分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,3000。三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃i;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃。最适反应pHxⅠ,3．5;xⅢ,4．5;xⅢ,5．0。保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃。金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响。     

黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究

黑曲霉A3(AspergillusnigerA3)的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ.经7%凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份.经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5.5和6.1.SDS-PAGE测得亚基分子量(Da)分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,31000.三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃.最适反应pHxⅠ,3.5;xⅡ,4.5;xⅢ,5.0.保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃.金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响.     

曲霉液体发酵产原果胶酶的条件优化研究*

研究了碳源、氮源、金属离子及表面活性剂等对菌株(Aspergillus sp.)XZ-131产原果胶酶的影响.果胶类物质是该菌株产原果胶酶所必需的诱导物.以(NH4)2SO4和(NH4)2HPO4作为氮源时,产酶较高,达到300 U/mL.钙离子及Tween-20均能促进该酶的产生.通过正交试验优化得出该菌株产酶的最佳培养基配方为桔皮粉 1g,(NH4)2SO4 2g,CaCl2 0.015g,Tween-20 0.2mL,KH2PO4 3.8g,K2HPO4*3H2O 0.2g,水 100mL,pH 6.5.