9月在欧美销售诊断衣原体属用PCR药盒

瑞士Hoffmann-La Roche 公司从9月开始在欧洲、美国销售使用聚合酶链反应法(PCR 法)的检查衣原体属用的DNA 探针诊断药盒。使用PCR 法的DNA 诊断药盒的开发为世界首创。DNA 诊断药已到新阶段。估计在日本93年下半年以后销售。DNA 探针诊断药包括在日本销售的东雷、中外制药公司等的产品;即使不扩增也能检测出基因本身     

利用转座子构建水稻基因破坏系

农林水产省农业生物资源研究所分子育种部广近洋彦等小组利用转座子首次在世界上构建了水稻基因破坏系。用动物、微生物确立了同源重组的基因破坏法。植物的基因定靶法尚无确认系。美国ＰｉｏｎｅｅｒＨｉ—ＢｒｅｄＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ公司去年底利用转座子成功地开发出玉米基因破坏法。用水稻、玉米２种谷物确立了基因破坏法,在此基础上,希望能进行机能分析以加快育种工作。２月２６日在东京召开的科学技术振兴调整费的成果报告会上发表了这项成果。广近等的方法是在传统的组织培养变异法上再使用ＰＣＲ的筛选法。检测在水稻组织…     

开发利用土壤杆菌的无标记植物性状转化法

日本烟草产业（ＪＴ）公司成功地开发了可从性状转化植物高效地去除选择性标记的利用土壤杆菌的无标记性状转化法。不仅限于双子叶植物,也能进行单子叶植物水稻的基因导入。ＪＴ公司在川崎市召开的日本育种学会上发表了该项成果。在植物的性状转化中使用了卡那霉素等基因,但是,如果能排除标记,就能反复使用单一标记,所以希望此法能在需要导入代谢系基因群等多种基因时使用。因此,选择标记的去除法是植物重组育种必需的技术。ＪＴ公司开发的载体是在其１９９４年开发的、土壤杆菌（不仅能向双子叶植物中导入基因而且也能向水稻和玉米等…     

平胸龟Sox基因的克隆和序列分析

本文采用ＰＣＲ技术扩增和克隆了平胸龟的Ｓｏｘ基因,并通过银染测序进行了序列分析。结果显示,平胸龟雌雄个体均能扩增出相同长度的片段,其ＤＮＡ序列与人ＳＲＹ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ同源性达７２．７％,推测的氨基酸序列与ＳＲＹ基因的ＨＭＧ－ｂｏｘ序列同源性为４６．５％,充分显示出Ｓｏｘ基因在系统进化上的保守性。本文为Ｓｏｘ基因的起源和进化研究提供了资料。     

利用基因导入技术(Accell)转化玉米

92年4月28日发表了美国 W.R.Grace 公司100%子公司美国 Agracetus 公司使用基因导入法“Accell”转化主要的纯系品种玉米获得成功。Agracetus 公司研究用“Accell”法向玉米中间母本导入耐虫性基因和农药耐性基因,打算将来用于 F_1杂种的商品作物的育种。“Accell”法是使用 Agracetus 公司开发的基因枪直接向细胞内导入基因的技术。Agracetus 公司没有公开“Accell”法的详细情况。但是已申请专利。因玉米从原生质体再生植物体的效率低,也是用向     

化学发光检测系统的改良型的开发

富士公司(以下称富士公司)在用于结合抗体的新的固相检测基础物质上使用新的化学发光物质,成功地开发出免疫测定系统。该系统比该公司现在销售的化学发光法的检测系统的抗原抗体反应时间减少一半,灵敏度也提高了28倍。另外使用开发的方法,测定低浓度的正常人血清中白细胞介素6(IL6)浓度获得成功。于9月7～10日在吹田市召开的日本生化学会上发表了此成果。 富士公司开发并销售化学发光免疫测定仪器和试剂,其中使用了美国Tropix公司开发的高灵敏度发光基质AMPPD。发表的方法是利用AMPPD的传统方法的改良型。在目前使用的Sandwich酶免疫测定     

基因敲除技术对5－HT受体研究的新贡献

基因敲除技术对５－ＨＴ受体研究的新贡献随着５－ＨＴ受体家族的扩大,寻找高选择性的受体激动剂及阻断剂日趋困难。基因药理的研究对象不是特定的受体蛋白质,而是编码蛋白质的基因或ｍＲＮＡ．通过基因敲除技术,可以繁殖出变异鼠,使之缺少某种特定基因,从而使之不能...     

开发耐虫性赤豆

农林水产省农业研究中心作物开发部豆类育种研究室研究员石本政男、该研究室主任喜多村启介和北海道立中央农业试验场研究员佐藤毅等研究小组开发出导入α淀粉酶抑制剂基因的耐虫性赤豆。目前在以赋予耐虫性为目的的重组育种中使用的是昆虫病原菌苏云金杆菌杀虫蛋白(BT毒素)和蛋白酶抑制剂的基因。使用α淀粉酶抑制剂基因的耐虫性植物的开发在世界上还是第一次。如果进行对哪类昆虫发挥杀虫作     

用重组大肠杆菌生产的Bt杀虫蛋白

住友化学工业公司宝塚综合研究所使用基因重组大肠杆菌,经24小时培养生产20 g/1的苏云金杆菌杀虫蛋白.该小组曾开发了用大肠杆菌JM103株的基因重组大量生产IP的方法.这次以繁殖速度快而菌体产率高的大肠杆菌K12株为寄主,确立了高效率的TP制造法.这项成果于4月1日在京都召开的日本农艺化学会上发表. 这次生产的是对粉蛾的杀虫效果强但对蚕无毒性的IP(130 kD).如使用基因重组技术,能生产出不含对蚕有害的135kD的IP.但是比医药品附加价值低的农药,应用基因重组     

HCV5NCR转基因细胞模型的建立

缺乏合适的ＨＣＶ感染细胞及小动物模型,是抗ＨＣＶ药物研究和开发的主要障碍之一。建立一种ＨＣＶ５ＮＣＲ调控荧光素酶基因的转基因细胞模型,可为以ＨＣＶ５ＮＣＲ及Ｃ基因５’端为靶的反义寡核苷酸及特异性核酶等抗ＨＣＶ药物的评价及筛选创造条件。     

抗稻瘟病重组水稻

《日经生物技术》１９９９年４月１２日第１０页报道：日产化工工业公司和东京大学分子细胞生物学研究所小组成功地开发出抗水稻主要病害之一稻瘟病的重组水稻。研究组所使用的基因是独自从水稻花药中克隆出的ＮＡＤＨ依赖性还原酶基因ＹＫ１。目前从玉米中分离出ＮＡＤＨ依赖性ＨＣ毒素还原酶基因。该基因可还原、解毒北方斑点病菌所产生的ＨＣ毒素,并能用于植物抗病性改良。据说将ＮＡＤＨ依赖性还原酶基因导入植物体赋予抗病性大约还是第一次。详细成果４月４日在宇都宫市召开的日本育种学会上发表。对ＹＫ１导入水稻系统进行稻瘟病（レ…     

牛β-乳球蛋白基因的克隆及部分序列测定

为了制备乳腺生物反应器所需要的乳腺特异性表达的调控序列,用ＰＣＲ法从奶牛染色体上分５段扩增出了全长的牛 ＢＬＧ基因约 ８ ｋｂ,包括 １．８ ｋｂ的 ５’侧翼区、１．７ ｋｂ的 ３’侧翼区及 ４．７ ｋｂ的ｇＤＮＡ区。扩增出的各片段克隆到Ｔ－Ｖｅｃｔｏｒ上,酶切鉴定及序列分析均证实了所扩增片段的正确性。     

优化外源基因在大肠杆菌中表达的翻译起始率的策略 …

ｍＲＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因为模型,将ＰＣＮＡ基因５＇端编码区的１１４ｂｐ的顺序插入质粒ｐＴＺ１９Ｒ中ＬａｃＺ＇的５＇端构成融合基因。用定点突变法在ＰＣＮＡ的ＡＵＧ的－８位插入一个Ｓｈｉｎｅ／Ｄａｌｇａｒｎｏ（ＳＤ）顺序ＧＡＧＧＴ,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物,     

在转基因植物中实现外源基因最佳表达的途径

引言大约最近十年左右的时间,许多重要植物品种的遗传转化相继获得了成功,并再生出可育的转基因植株。迄今为止,应用生物弹击法或农杆菌介导法,已经转化了５０种以上的不同植物。但是有一些重要的粮食作物诸如小麦和大豆等,其转化效率则有待于进一步的提高。在最近的５年中,已有许多种不同的基因被分别导入了以烟草为主的多种不同的植物。在这类工作中,大多数是使用组成型的启动子（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｐｒｏｍｏ...     

抗人CD3单抗重,轻链可变区基因的体外扩增,克隆和序列分析

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５＇端序列和Ｊ区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ,反转录生成ｃＤＮＡ,以ｃＤＮＡ为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ,编码１１９个     

重组植物培育法的开发

日本制纸公司成功地开发了不残留标识基因(标记基因)而可导入多重基因的植物基因重组技术。首先用烟草确立了该技术,接着又用白杨高效率地获得性状转化体,这项基因导入技术被命名为MAT(Multi-Auto-Transformation)载体系统。日本制纸公司将其技术应用于白杨和桉树、松树等制纸用树木的重组育种。该公司用基因重组抑制木质素的生物合成系,进行树木育种(适合纸浆化的),要抑制木质素生物合成系,进行单基因操作是不够的,所以开发了多重基因导入法。     

开发用多种萤光色素检测基因点突变的方法

德岛大学医学部教授板仓光夫、助手岩花弘之等使用多种萤光色素和计算机图像开发了检测基因点突变的MF(Multiple Fiuoresence-based)-PCR-SSCP法。检测灵敏度高,使用萤光标识能处理多种试剂,所以有可能应用于临床检查。另外板仓等打算以500名痛风患者为对象,使用该MF-PCR-SSCP法,分析被认为是导致痛风之一的人ATase基因的变异。在大阪召开的第67届日本生化学会上发表了其结果。     

p35Nck5a基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究

为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电 穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入ＥＳ细胞,经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择,获得２４５个 双药物抗性的细胞克隆,细胞存活率为６．２２ × １０－５。经ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,２个 ＥＳ细胞克隆发生了ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的重复,同源重组率为５．０８×１０－７、负向选择系统的应用使 同源重组事件的富集效率提高了７倍。为建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的转基因小鼠模型打下了基础。     

内含子的位置不影响转基因的表达

内含子在转基因动物的基因表达中具有重要作用,以乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因５′区为调控序列,人基因组Ｇ－ＣＳＦ基因为目的片段,将ＷＡＰ基因第一内含子插入Ｇ－ＣＳＦ基因５′端,构建成转基因动物乳腺表达载体。将其直接注射到小鼠乳腺,在泌乳期表达出人Ｇ－ＣＳＦ。表明内含子在５′端的位置不影响转基因的表达,同时也表明内含子对表达有一定的作用。     

抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ,反转录生成ｃＤＮＡ,以ｃＤＮＡ为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ,编码１１９个氨基酸,轻链可变区基因全长３２１ｂｐ,编码１０７个氨基酸。