光敏剂HMME对人骨肉瘤细胞U-2OS的光动力作用及其作用机制的初步研究

目的：探讨光敏剂（HMME）介导的光动力疗法对人骨肉瘤细胞U-2OS的杀伤效应及机制研究。方法：使用不同浓度（0、10、20、30、40μg.ml-1）的光敏剂,采用不同光照能量（0、3、6、9 J.cm-2）照射人骨肉瘤细胞,与空白对照组、药物对照组（无光照但加光敏剂）和光照对照组（不加光敏剂但加光照）进行比较,MTT法检测细胞的存活率,选择半数有效量药物浓度和光照能量,作为实验组。以空白对照组为对照,采用Hoechst33342染色法,观察细胞凋亡情况。用western blot方法检测细胞凋亡蛋白caspase-7、caspase-9和PARP-1。结果：MTT结果显示,空白对照组、药物对照组和光照对照组对细胞存活率在96.7%和100%之间,药物的半数有效量为40.1μg.ml-（16 J.cm-2）和25.0μg.ml-（19 J.cm-2）。Hoechst33342染色法观察到实验组细胞明显凋亡。westen blotting检测结果,实验组与对照组相比,caspase-7、caspase-9和PARP-1表达明显增高。结论：HMME-PDT对人骨肉瘤细胞U-2OS有显著的杀伤效应,且呈光敏剂浓度和光照强度依赖性,其杀伤效应与caspase途径相关。     

一种新型细胞摄取增强的两亲性卟啉类光敏剂及肿瘤光动力治疗研究

光敏剂能否被肿瘤细胞高效吸收是影响光动力治疗效率的重要因素。亲脂性光敏剂易于被肿瘤组织摄取,但会使光敏剂发生自猝灭;亲水性光敏剂则有利于光敏剂在体内的转运,但肿瘤细胞摄取率会下降。本工作通过亲酯性的乙二醇缩合支链和亲水性季膦基团与卟啉相连接,成功制备一种新型两亲性卟啉锌化合物(ZnTP-TP),实验表明该化合物具有较高的单线态氧量子产率和良好的两亲性,可被细胞快速摄取,并表现出较低的细胞毒性和良好的肿瘤光动力治疗效应。     

Isoverbascoside对HL-60细胞的诱导分化和细胞毒作用

不同时间、不同浓度的isoverbascoside体外处理HL-60细胞,以形态改变(光镜和透射电镜观察)、功能分化(化学发光检测吞噬能力)、恶性度降低(裸鼠成瘤试验)等指标观察其诱导分化作用;以台盼蓝拒染作用和电镜下形态变化确定其细胞毒作用;用流式细胞术测定其对HL-60细胞周期的影响。20—25μmol/L Isov 1—3天诱导HL-60细胞向粒系方向分化,细胞吞噬能力提高,裸鼠成瘤性降低。30—35μmol/L Isov 2—3天对HL-60细胞有强烈的细胞毒作用。20μmol/L Isov处理12h可引起HL-60细胞的G_1期阻滞,在72h时引起HL-60细胞的G_2/M期的阻滞。     

杉木自毒作用的研究

对杉木自毒作用研究表明,杉木纯林中的土壤、枯落叶、半分解枯落叶和杉木鲜叶、枝条、树皮、树根的水浸液及其添加乙烯吡咯啉酮ｋ３０（ＰＶＰ） 的溶液对杉木种子、空心菜种子和萝卜种子的萌发均有影响．所有水浸液均表现出高浓度下抑制种子萌发,随着浓度降低,抑制作用减弱、消失,甚至转变为促进作用的规律;其中根和鲜叶水浸液抑制作用最强,但水浸液添加ＰＶＰ 后抑制作用明显减弱,且在低浓度时表现出促进作用．     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖莱多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC50分别为390,362,402,421mg／L;药物浓度为300mg／L和500mg／L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2／M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2／M期细胞阻滞有关。     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖菜多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC_(50)分别为390,362,402,421mg/L;药物浓度为300mg/L和500mg/L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、过集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G_1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G_2/M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G_2/M期细胞阻滞有关。     

光杆菌(NLK-1) Txp40毒蛋白基因克隆表达及预测

【背景】光杆菌存在于嗜菌异小杆线虫肠道内,并与其互惠共生,其能够产生多种高效、广谱的杀虫蛋白及毒素,是近年来继苏云金芽胞杆菌(Bt)之后挖掘新型杀虫蛋白及杀虫基因的热点研究对象。【目的】克隆Photorhabdus luminescens(NLK-1)Txp40毒蛋白基因,分析其与已知其他同属共生菌相似毒蛋白在基因序列、蛋白组成、理化性质及构象的区别,构建原核表达载体并转化大肠杆菌进行诱导表达,初步测定其杀虫活性。【方法】采用侵染的大蜡螟幼虫血腔直接分离初生型共生细菌,根据已报道的序列经比对分析设计引物,扩增目的基因,连接克隆质粒p MD19-T后测序,利用Expasy在线Prot Param tool预测其基本理化特性参数,NPS@-Network Protein Sequence Analysis在线工具进行二级结构预测。通过克隆、酶切、连接目的基因在p ET28a原核表达载体上,转化大肠杆菌BL21中,利用蓝白斑筛选阳性克隆,测序验证后进行IPTG诱导表达;菌体超声破碎离心,以毒蛋白含量较高的上清溶液对大蜡螟幼虫进行饲喂和血腔注射毒性测定。【结果】Photorhabdus luminescens(NLK-1)Txp40毒蛋白基因全长为1 008 bp,与已知相关基因的序列相似性为94%,与已知40 k D相关蛋白的氨基酸相似性达到99%,分子量37.9 k D,p I 8.37,二级结构预测表明其主要由α螺旋35.71%,无规卷曲54.46%,延伸链9.52%组成,跨膜区域与已知蛋白基本相似,克隆构建了原核表达载体p ET28a-(NLK-1)Txp40,SDS-PAGE分析其在38 k D处有特异条带,蛋白分子量与预测值基本一致,且表达相对单一,表达量较高。Photorhabdus luminescens(NLK-1)Txp40蛋白对大蜡螟幼虫具有较高的血腔毒性,大蜡螟幼虫注射5μL蛋白粗提液剂量下48 h内致死率达100%,未发现胃毒活性。【结论】获得Photorhabdus luminescens(NLK-1)Txp40毒蛋白基因,比对、分析了与已知基因在序列组成、蛋白基本理化性质和二级结构的异同,构建了原核表达载体并成功诱导表达,验证了Photorhabdus luminescens(NLK-1)Txp40毒蛋白具有较高的大蜡螟幼虫血腔毒性,为进一步发掘Photorhabdus luminescens(NLK-1)中的杀虫功能基因和蛋白奠定基础。     

眼镜蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用

目的　研究眼镜蛇毒细胞毒素（ Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ）的体内抗肿瘤作用。方法　小鼠皮下、腹腔接种 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ后, 于接种部位注射不同剂量的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ, 每天 １ 次, 连续１０ 天, 观察瘤重抑制率和生命延长率。结果　适当剂量（０２～０８ｍ ｇ／ｋｇ） 的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 能明显抑制肿瘤的生长 （ Ｐ＜ ００１）,小鼠的存活时间明显延长（ Ｐ ＜ ００１）。结论　 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 在小鼠体内对 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ有明显地抗肿瘤作用。     

硅对柱花草铝毒的解毒作用

为了解硅在解除豆科作物铝毒方面的作用,本文以5个品种的柱花草为材料研究了硅对铝胁迫条件下的植物根伸长及膜脂稳定性的影响.研究结果表明,在铝(30 μmol/L)胁迫条件下柱花草根伸长受阻、根尖丙二醛(MDA)含量和抗氧化酶(POD,CAT)活性显著增加,而硅(1.4 mmol/L)处理增加根中硅的含量而降低了铝对根伸长、MDA含量和抗氧化酶活性的影响,且铝处理前12 h供给的硅和前处理溶液及铝溶液中均加硅处理的影响均显著;在不加硅条件下西卡品种的耐铝性显著低于其它品种,而经硅预处理的植株和在预处理及铝处理期间均供应硅的植株的耐铝性不同品种间的差异不显著.这些结果表明,硅能提高柱花草的耐铝能力并影响品种间耐铝差异性.     

毒黄素对黄嘌呤氧化酶作用的影响

利用从椰毒假单胞菌(Pseudomona cocovenenans)中所分离提取的毒黄素(toxoflavin)对黄嘌呤氧化酶(EC.1、2 3、2)作用的动力学试验表明,毒黄素是此酶的非必需激活剂,而且对以次黄嘌呤为底物的反应的激活作用明显高于以黄嘌呤为底物的反应。此激活作用属于部分混合型。这一结果为探寻毒黄素对人体的致毒机理提供了一条重要线索。     

ALA-PDT对白血病肿瘤细胞作用的参数研究

本文在实验的基础上研究了ALA-PDT灭杀HL60细胞的ALA浓度、ALA培养时间、辐照光剂量和光波长参数,初步总结了对HL60白血病肿瘤细胞进行ALA-PDT的较佳处理方案。     

灰毡毛忍冬次皂苷乙抑制白血病细胞HL-60的增殖及其机制研究

研究了灰毡毛忍冬次皂苷乙(MB)在体外对白血病细胞HL-60和结肠癌细胞LOVO增殖的抑制作用,并初步探讨其分子机制。采用MTT法检测MB的增殖抑制作用;利用RT2ProfilerTMPCR Array芯片实时定量PCR扩增肿瘤发生中84个关键基因。结果表明MB对两种肿瘤细胞生长均有抑制作用,且对HL-60效果更好。以HL-60作为细胞模型,总共发现差异基因20个,其中上调基因14个,下调基因6个,主要作用是阻滞细胞周期和降低细胞侵袭转移。     

基于CdSe-ZnS量子点的PDT体外灭活 HL60最佳实验参数的研究

随着光动力学疗法( photodynamic therapy,PDT)基础研究的不断深入和临床应用的广泛开展,根据患者的个体差异寻求高性能的光敏剂和精确量化光动力剂量,已成为亟待解决的难题,并日渐成为PDT研究的热点.以ZnS包裹的CdSe量子点(CdSe-ZnS)作为光敏剂,以人前髓细胞（早幼细胞）株HI6O为研究对...     

Induction of Differentiation in Human Promyelocytic Leukemia HL-60 Cell Line by Niacin-related Compounds

Water-soluble vitamin, niacin, and its related compounds were examined for their differentiation-inducing activity in human promyelocytic leukemia cells (HL-60). Among the compounds, which inhibited cell proliferation measured by MTT assay, isonicotinic acid, nicotinamide N-oxide, and nicotinamide induced NBT reducing activity. HL-60 cells were differentiated into granulocyte-like cells by these compounds, judging from morphological changes and loss of nonspecific esterase activity. The differentiation-inducing activity of water-soluble vitamin and its related compounds suggest that these compounds may be applicable for medical use.     

Effect of DNA methylation on protein-DNA interaction of HL-60 cells

HL-60 cells have been induced with differentiation index 16 % by S-adenosyl-L-rnethionine (SAM) as inducer in the presence of optimum conceptration of 10 μmol/L. The methylation level of genorne DNA determined by HPLC is increased during cell differentiation. When restriction endonuclease Hae Ⅲ, Sma I, Sal I, XhoI and Hind Ⅲ which are sensitive to 5-methylcytosine were used to cleave the genorne DNA, a resistance effect was found. The interaction between DNA and DNA binding proteins is changed by using gel retarding test.     

5－氮－2＇－脱氧胞苷（5－aza－CdR）对HL－60细胞分化和DNA甲基化酶的影响

以５－氮－２＇－脱氧胞苷（５－ａｚａ－ＣｄＲ）为诱导物,在０．５μｍｏｌ／Ｌ的最佳浓度下,可诱导ＨＬ－６０细胞分化达１５％左右。同时,用［￣３Ｈ］－ｍｅｔｈｙｌ－ｓ－ａｄｅｎｏｓｙｌｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ（￣３Ｈ－ＳＡＭ）为底物,通过同位素参入法,测定了不同浓度诱导物对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力的影响,发现在最佳诱导物浓度下,可使ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ甲基化酶活力明显下降,此外,也比较了不同分化水平的ＨＬ－６０细胞中具有不同甲基化水平的ＤＮＡ在体外接受甲基的能力,从而证明５－ａｚａ－ＣｄＲ诱导ＨＬ－６０细胞分化与其ＤＮＡ甲基化状态密切相关。     

Thioredoxin reductase is one of the selenoproteins in both promyelocytic and granulocytic HL-60 cells

Human leukemia promyelocytic HL-60 cells differentiate into granulocytes when cultured with 1.25% dimethyl sulfoxide for 3 d. The radioactive Na₂ ⁷⁵SeO₃ incorporation and the amount of total proteins were interrelated in both promyelocytic and granulocytic HL-60. Promyelocytic cells had four times higher⁷⁵Se incorporation and 34% more protein synthesis than the granulocytic cells on the fifth culturing day. The enzyme activities of glutathione peroxidase (GSH-Px, E.C. 1.11.1.9) and thioredoxin reductase (TrxR, E.C. 1.6.4.5) in both types of cells increased significantly and approached steady stage on the third day. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) analysis and autoradiography of the proteins from the cells revealed three proteins with molecular weights of57, 28, and 21 kDa, respectively. These three⁷⁵Se-labeled proteins were present in both types of cells. The proteins from HL-60 cells were separated by DEAE-Sepharose and 2′5′-ADP-Sepharose columns. The purified 57-kDa protein had TrxR activity of 0.744 Μmol 5′-thionitrobenzoic acid (TNB) formed/min/mg protein and two isoelectric points at pH 5.9 and 6.0. These results suggest that TrxR is one of the selenoproteins in both promyelocytic and granulocytic HL-60 cells.     

Changes in the Susceptibility of 12-O-Tetradecanoylphorbol 13-Acetate (TPA)-Treated HL-60 Cells to Staphylococcal Leukocidin

Susceptibility of human promyelocytic leukemia HL-60 cells to staphylococcal leukocidin following treatment of cells with 12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA) was examined. TPA treatment for 6 hr rendered the cells very resistant transiently to leukocidin. There was no change in binding of leukocidin to the cells, but leukocidin-induced ⁴⁵CaCl₂ influx, phospholipase A₂ and C activities were inhibited. Further incubation with TPA rendered the cells sensitive again and then more sensitive than original HL-60 cells following increase of the binding, and leukocidin-induced activities described above appeared again. Those cells treated with TPA for more than 18 hr started to differentiate to macrophages morphologically and functionally. These data suggest that the differentiated cells were more sensitive than original HL-60 cells because of increased binding of leukocidin and that treatment of TPA for 6 hr may transiently impair the signal transduction system of leukocidin after binding of leukocidin to the specific receptor of the cell membrane. Using these TPA-treated cells, it was shown in this report that calcium influx, phospholipase A₂ and C activities were important to induce cytotoxic action of leukocidin after binding of leukocidin to specific receptors on the cells.